Главная » Просмотр файлов » Biokhimia_T1_Strayer_L_1984

Biokhimia_T1_Strayer_L_1984 (1123302), страница 24

Файл №1123302 Biokhimia_T1_Strayer_L_1984 (Л. Страйер - Биохимия в 3-х томах) 24 страницаBiokhimia_T1_Strayer_L_1984 (1123302) страница 242019-05-10СтудИзба
Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 24)

Почему? Мы выясним это в ходе дальнейшего изложения. 5.2. Дезокснгеннровяниьой серповилиоклеточный гемоглебня имеет пониженную растворимость Херрик высказал правильное предположение о локализации первичного дефекта, обусловливающего серповндноклеточную анемию, При снижении концентрации кислорода эритроциты больного приобретают серповидную форму на предметном стекле (п тйго. Оказалось, что в этих клетках дефектен сам гемоглобин. Растворимость дезоксигемоглобина серповидных клеток примерно в 25 раз ниже растворимости нормального гемоглобина.

При дезоксигенировании концентрированно~о раствора гемоглобина серповидных клеток образуется волокнистый осадок (рис. 5.3). Именно ~акой осадок деформирует зритроцит,придавая ему серповидную форму. Гемоглобин серповидных клеток принято обозначать как гемоглобин 5 (НЬ Я) в отличие от гемоглобина А (НЬ А) — нормального гемоглобина взрослого человека. 5.3. Гемоглобин Я отличается от гемоглобина А но электрофоретической подвижности В 1949 г. Полнит (Ранйпй) и его сотрудники изучали физико-химические свойства гемоглобина в норме, при носительстве признака серповидноклеточности и при заболевании серповидноклеточной анемией. Использованный ими экспериментальный подход состоял в следующем: они сопоставляли подвижность исследуемых гемоглобинов в электрическом поле. Метод определения подвижности в электрическом поле называется электрофорезам.

Скорость миграции (Г) белка (или какого-либо другого соединения) в электрическом поле зависит от напряженности электрического поля (Е), общего о0 О ра и с— ЕХ 7 рН Рис. 5,4. заряда белка (с) и сопротивления ~рения (7'). Сопротивление трения определяется разме- ром и формой белка. Указанные величины связаны между собой соотношением Изозлентрическая точка белка — это значение рН, при котором данный белок не несет электрического заряда. При таком значении рН электрофоретическая подвижность равна нулю, поскольку с = 0 [уравнение (1)2. При рН ниже изозлектрической точки молекула белка заряжена положительно; при значениях рН, лежащих выше изоэлектричсской точки, белок заряжен отрицательно.

Гемоглобин. серповидных клеток отличается от нормального по изозлектрнческой точке: Зависимость от рН злектрофоретической подвижности нормального гемоглобина и гемоглобина серповидных клеток. Ге о бин нор- мальны» Гем - Ра н- бин оерно- на нндиьп клеток зригрогГи- гое Океигемогнобин 6,87 Дезоаеигемогнобин 6,68 7,09 0,22 6,91 0,23 Как видно из приведенной таблицы, различие между серповидноклеточным и нормальным гемоглобином для окисленной н восстановленной форм одинаково. Различие в электрофоретической подвижности гемоглобина А и 5 может объясняться изменением либо общего заряда г., либо коэффициента трения/.

Сам по себе эффект трения (обусловленный изменением формы) выразился бы в том, что одно вещество двигалось бы медленнее другого во всем диапазоне рН. В рассматриваемом случае этого не происходило, судя по тому, что кривые зависимости электрофоретической подвижности от рН имели одинаковый угол наклона (рис. 5 4). Кроме того, другие физико-химические исследования, а именно определение скорости седнментацин н свободной диффузии показали, что коэффициенты трения оксигенированных форм гемоглобина А и гемоглобина 5 были одинаковы.

На основании этих наблюдений был сделан вывод о различии в числе или типе ионизированиых групп в сравниваемых гемоглобияах. Сколько таких групп в каждом из гемоглобинов? Ответ дает кривая кислот- но-основного тнтровання гсмоглобннов. В области рН 7 эта кривая почти линейна. Изменение рН раствора гемоглобина на единицу создает разницу почти на ! 3 зарядов. Стало быть, различие в изоэлектрических точках на 0,23 соответствует примерно трем зарядам в молекуле гемоглобина.

Отсюда следует, что гемоглобин серповидных клеток отличается от нормального наличием дополнительньгх 2 — 4 положительных зарядов. С чем связано это отличие: с изменением состава полипептидной цепи или с изменением гема? Из серповидноклеточного гемоглобина был выделен порфирии; по данным определения точки плавления и ренттеноструктурного анализа он оказался идентичен порфирину нормального гемоглобина. Это показывает, что различие между двумя гемоглобинами заключается в особенностях состава полипептидных целей. У больных серповидноклеточной анемией (всегда гомозиготных по дефектному гену) имеется гемоглобин Я н нет гемоглобина А. В то же время у носителей признака серповидноклеточности (которые гетерозиготны по гену серповндноклеточностн) оба гемоглобина содержатся примерно в равных количествах (рис.

5.5). Таким образом, в работе Полннга был выявлен бесспорный случай изменения молекулы белка при изменении аллелей коднрующего его гена. Это был первый пример молекулярной болезни. 5, Молекулярные болезни: серповидноклегочная анемия нь л НЫ Положительно за- Нейтральная аминокислОта раненная амино- кислота Положительно заряженная амино- кислота Отрицательно заря- женная амино- кислота Рнс.

5.5. Нейтральная амино- кислота Отрицательно заря- женная амино- кислота Эпвктрофо рвз в горизонтальном Хроматография в вертикальном Рнс. 5.6. 5.4. Получение пептидных карт: выявление аминокнслотиой замены в гемоглобнне серповидных клеток Итак,электрофоретический анализ показал, что гемоглобин Б имеет 2-4 дополнительных положительных заряда по сравнению с гемоглобином А. Возможны разные пути возникновения такого различия в заряде молекулы: Выяснение вопроса, какая конкретно замена произошла в гемоглобине Я, относится к 1954 г,, когда Вернон Ингрем (зт. 1пйгетп) разработал новый метод определения аминокнслотных замен в белках. Для проведения анализа молекулу гемоглобина расщепляли на фрагменты, поскольку в небольших пептидах, содержащих примерно по 20 аминокислот„выявить замену аминокислоты, безусловно, легче, чем в целой молекуле белка, значительно большей (в 10 раз) по размеру. Гемоглобин подвергали специфическому расщеплению трипсином по пептидным связям, образованным карбоксильными группами лизина и аргинина.

Смесь пептидов разделяют путем электрофореза в горизонтальном направлении с последующей хроматографией в вертикальном направлении. Часть 1 Конформации и динамика Признак СарповидноНорма серповидно- клеточная кпвточности анемия Электрофорез на крахмальном геле при рН 8,6 гемоглобина здорового человека, гемоглобина носителя признака серповидноклеточностн и гемоглобина больного серповидноклеточной анемией.

Поскольку в и()-половине гемоглобина содержится в общей сложности 27 остатков лизина и аргина, при триптическом гидрализе образовалось 28 разных пептидов. Следующий этап состоял в разделении полученных пептидов. Для этого был применен метод двумерного разделения (рис. 5.б). Смесь пептидов наносили в виде небольшого пятна в угол большого листа фильтровальной бумаги. Далее проводили электрофорез в одном направлении, разделяя таким образом пептцды в соответствии с их общим зарядом. Однако полного разделения смеси при этом не происходило. Многие пептиды накладывались друг на друга.

Поэтому продолжалн процесс разделения, но уже методом хроматографии на бумаге, причем это разделение проводили в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. Хроматография— термин введен Михаилом Цветом в! 906 г. применительно к разделению смеси пигментов из листьев растения на колонке карбоната кальция. М.

Цвет сравнил этот процесс с «разложением света на спектр». Образовано от греческих слов сЬгоша-цвет и йгар)»еш — рисовать, писать. Процедура состояла в следующем: конец бумаги, ближайший к разделяемым пептидам, помещали в смесь органических растворителей и воды, налитую на дно герметично закрывающейся стеклянной банки. При этом растворитель поднимался вверх по бумаге.

В такой ситуации каждый пептид мог либо мигрировать с растворителем (не- полярная среда), либо оставаться на обводненной целлюлозе бумаги (высокополярная среда). Такой метод разделения называется распределительной хроматографией. Пептид с наиболее выраженными неполярными свойствами будет растворяться в растворителе и, следовательно, подниматься вместе с фронтом растворителя вверх по бумаге; в то же время самый полярный нз пептидов останется на бумаге внизу. Рассматриваемые методы — хроматография на бумаге и электрофорез — дополняют друг друга, поскольку они разделяют пепт|щы на основе независимых свойств; первый — на основе различий в полярности, второй -на основе различий в общем заряде. Вся последовательность проведения анализа — избирательное расщепление белка на небольшие пептиды сих последующим разделением в двух направлениях †называет методом пептидных карт (отпечатков пальцев).

Характеристики

Тип файла
PDF-файл
Размер
22,87 Mb
Тип материала
Предмет
Высшее учебное заведение

Список файлов книги

Свежие статьи
Популярно сейчас
Как Вы думаете, сколько людей до Вас делали точно такое же задание? 99% студентов выполняют точно такие же задания, как и их предшественники год назад. Найдите нужный учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
6488
Авторов
на СтудИзбе
303
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее