Автореферат (1104485), страница 3
Текст из файла (страница 3)
за счет определения изменениямолекулярной структуры ЛПНП.После ишемической процедуры пропадают пики рамановского смещения,отвечающие за двойные связи (С=С) в ненасыщенных жирных кислотах,входящих в состав фосфолипидов ЛПНП. На спектрограммах ишемическойсыворотки появляются пики, соответствующие окислению жирных кислот вфосфолипидах ЛПНП по ненасыщенным двойным связям. В спектрограммахишемической сыворотки появляются пики, соответствующие образованиюлипоперекисных продуктов, пероксикислот и пероксиэфиров вследствиеокисления жирных кислот в фосфолипидах ЛПНП.Основным субстратом свободнорадикального окисления в ЛПНП служат, каквидно из спектрограммкомбинационного рассеяния, полиненасыщенныежирные кислоты фосфолипидного слоя.
Свободнорадикальное окислениеЛПНП приводит к изменению их химического состава, что характеризуетсяснижением в них содержания свободных жирных кислот (LH) и значительнымповышениемсодержанияпродуктовокисления(липоперекисейLOOH,диалкилперекисей LOOL′, пероксикислот LCOOOH, пероксиэфиров LCOOOL′).Такимобразом,методомкомбинационногорассеяниясветаполученоподтверждение высказанной в работе гипотезы, объясняющей измененияЛПНП после ишемии в рамках свободнорадикальной окислительной теории.В параграфе §5.4.
представлено исследование повреждающего действияишемии на компоненты сыворотки крови методами люминесцентного анализа.Продукты свободнорадикальных реакций, образующиеся при ишемическомповреждении сыворотки крови, обладают способностью к фотолюминесценции.Каквидноизрис.3,послеишемическойпроцедурыинтенсивностьлюминесценции сыворотки крови возрастает (в 5,3 раза) по сравнению синтенсивностью люминесценции здоровой сыворотки крови (λвозб = 350 нм). Внорме в здоровой сыворотке крови концентрация свободных радикалов очень15мала, поэтому мала и интенсивность люминесценции (рис.3).
Увеличениелюминесценцииобусловленоэлектроновпосленаличиемвишемиинеспаренныхсвободнорадикальныхсоединениях ишемической сыворотки, и,соответственно, большей вероятностьювозбуждения молекул этих соединенийпри облучении светом. Таким образом, спомощью методов люминесцентно –спектрального анализа подтверждаетсяпредложеннаягипотезаобопределяющейролисвободнорадикального окисления в повреждениях ЛПНП при ишемии.Липоперекисноесвободнорадикальноеокислениефосфолипидовамфипатического слоя ЛПНП после ишемической процедуры подтверждено вданнойработе такжеприпомощииспользованияфлуоресцентныхзондов (родамина 6Ж, нильского синего). Зарегистрировано, что интенсивностьлюминесценции родамина при добавлении его в ишемическую сывороткубольше аналогичной интенсивности родамина, добавленного в здоровуюсыворотку (примерно в 1,5 раза).
Данное увеличение интенсивности связано стем, что родамин 6Ж выступает в данной системе как флуоресцентный зонд,принимающийнасебяэнергиюсвозбужденныхлипидныхсвободнорадикальных соединений в составе фосфолипидного слоя ЛПНП,появляющихся по причине ишемического окислительного поврежденияфосфолипидного слоя ЛПНП.При исследовании люминесценции нильского синего, добавленного вобразцы сыворотки крови, показано, что интенсивность люминесценциинильского синего при добавлении его в ишемическую сыворотку больше16аналогичной интенсивности нильского синего, добавленного в здоровуюсыворотку крови (примерно на 30 %).
Данное увеличение интенсивностилюминесценции нильского синего объясняется тем, что нильский синийпроникает в фосфолипидный слой ЛПНП, который после ишемии становитсяразрыхлённым, и связывается с ненасыщеннымижирными кислотамифосфолипидов ЛПНП.
После ишемии в составе фосфолипидов ЛПНПприсутствуют липидные свободнорадикальные соединения, которые привозбуждении их светом, передают свою энергию возбуждения на связавшиеся сними молекулы нильского синего.В заключительной части диссертации отдельным пунктом вынесеныосновные результаты и выводы работы.ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ1. Методом динамического светорассеяния показано, что присутствие солитяжелого металла (хлорида цезия CsCl) вызывает агрегацию молекулсывороточного альбумина человека.
При этом размер образующихся белковыхагрегатов возрастает прямо пропорционально концентрации этой соли.Зависимость гидродинамического радиуса образующихся белковых комплексовот pH буферного раствора в пределах каждого значения концентрации CsClимеет параболический вид с максимумом в изоэлектрической точке белка.Показано, что наибольшая агрегация альбумина имеет место вблизи егоизоэлектрической точки. Установлено, что добавление хлорида цезия приводитк слипанию молекул альбумина в агрегаты практически сферической формы.2. Методом комбинационного рассеяния света получено свидетельствоагрегации сывороточного альбумина человека в присутствии соли тяжёлогометалла (СsCl), зарегистрировано, что наибольшая агрегация сывороточногоальбумина человека имеет место вблизи его изоэлектрической точки (т.е. приpH 5,0), а при удалении от изоэлектрической точки (как в сторону возрастания17значения pH, так и в сторону убывания pH) степень агрегации молекулальбуминауменьшается.ОбъясненаминокислотныймеханизмCsCl-индуцированной агрегации и выяснены агрегационные химические связи,возникающие между цепями аминокислот сывороточного альбумина.3.
Методом динамического рассеяния света показано, что присутствие мицеллионного отрицательно заряженного детергента ДСН приводит к денатурациимолекул альбумина, при этом в работе определена величина денатурациибелковых молекул в зависимости от значения pH раствора и концентрациидетергента. Определена концентрация насыщения сывороточного альбуминачеловекадетергентом(7мМДСН).Зарегистрировано,чтобольшаяденатурация белка в присутствии ДСН имеет место при значениях pHбуферного раствора, меньших изоэлектрической точки альбумина, чтообъясняется электростатическими причинами.4.Методомдинамическогосветорассеянияисследованаденатурациясывороточного альбумина человека под влиянием температуры в зависимостиот pH раствора. Установлено, что тепловая денатурация сывороточногоальбумина зависит от pH раствора.
Показано, что для рассмотренных в работезначений pH тепловая денатурация происходит сильнее при значениях pHбуферного раствора белка, близких к изоэлектрической точке данного белка.5. Методами лазерной корреляционной спектроскопии рассеянного светазарегистрированы отличия в сыворотке крови животных, перенёсших ишемиюголовного мозга, по сравнению с сывороткой контрольной группы здоровыхживотных: размер ЛПНП сыворотки животных после ишемии больше размераЛПНП здоровой сыворотки; плотность ишемических ЛПНП значительноменьше плотности здоровых ЛПНП.6. Методом комбинационного рассеяния света получено подтверждениевыдвинутой теории, объясняющей увеличение размеров ЛПНП и уменьшениеих плотности после ишемии по сравнению с контрольными здоровыми ЛПНП18разрыхлением фосфолипидного амфипатического слоя ЛПНП под действиемсвободнорадикальных продуктов, появляющихся вследствие ишемии.7.
С помощью применения люминесцентно – спектрального анализаподтвержденапредложеннаясвободнорадикального окислениятеорияобопределяющейролив повреждениях ЛПНП при ишемии.Показано, что интенсивность люминесценции сыворотки после ишемии сильновозрастает по сравнению с интенсивностью люминесценции здоровойсыворотки крови. Увеличение интенсивности люминесценции сыворотки кровипослеишемииоднозначносвободнорадикальныхлипидныхотражаетповышеннуюсоединенийвконцентрациюфосфолипидномслоеишемических ЛПНП. Добавление флуоресцентных зондов (родамина 6Ж,нильского синего) в сыворотку крови подтверждает различие физикохимических свойств ЛПНП сыворотки крови животных до и послеишемической процедуры.СПИСОК РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ1.
Баранов А.Н., Власова И.М., Салецкий А.М. Исследование процессовагрегации сывороточного альбумина. ЖПС, 2004, т. 71, № 2, с. 204-207.2. Власова И.М., Потапов А.В. Применение методов корреляционнойспектроскопии для определения размеров и формы молекул сывороточногоальбумина. В сборнике трудов III Международной конференции молодыхученых и специалистов “Оптика-2003”, Санкт-Петербург: СпбГУ ИТМО, 2003,с. 292-293.3.
Vlasova I.M., Mikrin V.E., Saletsky A.M. Investigation of CsCl-inducedaggregation of serum albumin depending on pH by Raman spectroscopy method.Laser Physics Letters, 2005, v. 2, № 4, p. 204-207.4. Баранов А.Н., Власова И.М., Микрин В.Е., Салецкий А.М. Лазернаякорреляционнаяспектроскопияпроцессов денатурацииальбумина.
ЖПС, 2004, т. 71, № 6, с. 831-835.19сывороточного5. Власова И.М., Микрин В.Е., Салецкий А.М. Применение методов лазернойспектроскопии динамического светорассеяния при исследовании денатурациисывороточного альбумина плазмы крови человека. В сборнике трудов Третьегомежд. оптическогоконгресса «Оптика-XXIвек», Третьей межд. конференции«Фундаментальные проблемы оптики-2004», Санкт-Петербург: СпбГУ ИТМО,2004, с. 291-292.6. Vlasova I.M., Dolmatova E.V., Koshelev V.B., Saletsky A.M. Investigation ofischemia damaging action on blood serum structure by laser spectroscopy methods.Laser Physics Letters, 2004, v. 1, № 8, p.
417-420.7. Власова И.М., Микрин В.Е. Регистрация повреждающего действия ишемиина компоненты сыворотки крови методами спектроскопии динамического истатическогосветорассеяния. В сборникетезисовмежд. конференции«Ломоносов-2004», секция «Физика», МГУ, физ.ф-т, 2004, c. 209.8. Власова И.М., Салецкий А.М. Регистрация ишемических измененийсыворотки крови методами лазерной спектроскопии. В сборнике тезисовдокладов и сообщений на XI Всероссийской конференции «Структура идинамикамолекулярныхсистем-Яльчик-2004»,Москва-Йошкар-Ола-Уфа-Казань, 2004, с. 64.9. Saletsky A.M., Vlasova I.M.
Application of laser spectroscopy methods forinvestigation of ischemia damaging action on blood serum. ALT04. Conference“Advanced Laser Technologies”, Scientific programme, Rome and Frascati, 2004, p.106.10. Baranov A.N., Vlasova I.M., Saletsky A.M. Investigation of ischemia damagingaction on blood serum by Raman spectroscopy method. Laser Physics Letters, 2004,v.
1, № 11, p. 555-559.ООП Физ. ф-та МГУ. Заказ 50-100-0520.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
