Диссертация (1102418), страница 22
Текст из файла (страница 22)
С другойстороны, HTLP взаимодействует с клетками врожденного иммунитета:макрофагами, натуральными киллерами (NK). Полученные данные (таблица19) показали, что под действием полисахарида происходит их активация. Всвоюочередь,активированныемакрофагиразрушаютклеткисвнутриклеточными патогенами, продуцируют цитокины, активирующие NKклетки и Т-лимфоциты, которые обладают цитотоксическим действием наопухолевые клетки. NK-клетки освобождают химические соединения,которые уничтожают опухолевые клетки посредством разрушения клеточныхмембран [297].Считается, что различные β-(1→3)-, β-(1→4)- и β-(1→6)–глюканыявляются активаторами врожденных иммунных реакций в макрофагах,взаимодействуя с Dectin-1 рецептором [298], что приводит к стимуляциисигнальных путей, повышающих врожденные иммунные реакции.
Толлподобные рецепторы также участвуют в первоначальном узнаваниимикробныхиопухолевыхпатогеновипатоген-ассоциированныхкомпонентов [299]. Активируя иммунные эффекторные клетки, такие какклеткиNKицитотоксическиеТ-лимфоциты,полисахаридHTLPспособствует инфильтрации опухоли лимфоцитами для ее уничтожения.Клинически отмечено, что инфильтрация препятствует метастазированию.Следует отметить еще один важный фактор, играющий огромную роль вуменьшении распространения метастазов – это лимфатические узлы, вкоторыхнаходятсяТ-киллерыиВ-лимфоциты,вырабатывающиепротивоопухолевые антитела. В свою очередь, регуляция иммунных клеток,таких как цитотоксические Т-лимфоциты, NK-клетки и макрофаги, приводит143к выработке цитокинов TNF-a, IFN-α, -δ, -γ и IL-1, непосредственноучаствующих в ликвидации опухолей.NK-клетки заслуживают особого внимания в проявляемых активностяхHTLP не только в качестве клеточного компонента противоопухолевогоиммунитета, эффективно подавляя рост и метастазирование опухоли, но ипринимают непосредственное участие в противовирусном иммунитете.
Какбыло показано, HTLP непосредственно активирует NK и макрофаги. Сдругой стороны, формирование Th1-ответа приводит к увеличениювысвобождения IFN-γ и TNF-α, которые усиливают активность NK.Стимуляция рецепторов TLR прямо ведет к увеличению продукции IFN-αβклетками, что важно для защиты организма от вирусных и некоторыхбактериальных инфекций [300]. Противовирусная активность HTLP наэкспериментальной модели герпетического менингоэнцефалита мышей(таблица20)использованиипроявляласьполисахарида.припротективномПредварительноитерапевтическомбылопоказано,чтополисахарид не обладал вирулицидностью. Выживаемость составила 80 и70% при введении 10ЛД50, а при 100ЛД50 – 57 и 63%, соответственно, тогдакак в контроле выживаемость составила 0%, а в контрольной группе сацикловиром – 15% и 0%, соответственно. Средняя продолжительностьжизни в опытных группах с HTLP выросла в 3,2 и 2,9 раза, а у ацикловиратолько в 1,9 при 10ЛД50, а при 100ЛД50 с HTLP – в 3,0 и 3,2 раза, аацикловира – 1,6.
На основании того факта, что противовирусная активностьHTLP наблюдалась при введении полисахарида за 5 дней до инфицирования,можно предположить ингибирование адсорбции вируса: HTLP или егофрагменты мешали связыванию вируса с рецепторами клеток. Возможно, чтоуже зараженные вирусом клетки быстро уничтожались активированныминатуральными киллерами и макрофагами. Также возможно, что имели местообапроцесса.Притерапевтическомиспользованииполисахаридаинтерфероны подавляют репликацию вируса в вирус-инфицированныхклетках, а макрофаги и натуральные киллеры эти клетки лизируют.
В этом144процессеактивноеучастиепринимаютивирусоспецифическиецитотоксические Т-лимфоциты.Иммуномодулирующие полисахариды, стимулирующие выработкуцитокинов и не имеющие цитотоксичности, являются перспективнымобъектомдляисследованийвкачестверадиозащитныхсредствспротиволучевой активностью. Противолучевая активность полисахаридаHTLPбылаизученавэкспериментальноймоделивыживаемостигемопоэтических стволовых клеток, формирующих селезеночные колонии(КОЕ-С) на 8-ые сутки после облучения мышей-гибридов F1(CBA×C57B1/6)(таблица 27).
Полученные данные показали, что полисахарид HTLPзащищает гемопоэтические стволовые клетки от действия ионизирующейрадиации. Все подопытные группы по тесту выхода КОЕ-С в 2–2,3 разапревышаютзначенияконтрольнойгруппы.Вопытахпооценкетерапевтических радиопротективных свойств полисахарида HTLP на мышахпри внутривенном способе введения в условиях острого облучения (таблица28) было определено, что полисахарид HTLP обладает противолучевойактивностью. Дозы 1, 10 и 100 мкг/животное проявляли одинаковуюэффективность,чтосвидетельствовалоотерапевтическойширотеполисахарида.
Обращает на себя внимание высокий терапевтическийрадиозащитный эффект полисахарида в течение суток, и это очень важноекачество соединения дает возможность оказать экстренную помощьпрактически в любой точке земного шара. Мы полагаем, что высокийрадиозащитный эффект HTLP основывается на стимуляции роста колонийгемопоэтических стволовых клеток и цитокиновой активности.Поскольку гемопоэтические стволовые клетки формируют клеткикрови, обеспечивая жизнедеятельность организма, стимуляция роста колонийгемопоэтических стволовых клеток приводит к повышению порога дозыоблучения, необходимой для деструкции критического количества стволовыхклеток и уменьшению кровеных клеток, как следствие – к снижению145выведенияметаболитов,продуктоввзаимодействияγ-облучениясорганизмом и снабжению тканей полезными веществами.Цитокины (лимфокины, монокины, интерфероны, IL-1) проявляютпротиволучевое действие, основанное на их гемо- и иммуностимулирующейактивности,атакжеспособностиповышатьэндогенныйфонрадиорезистентности, сохраняя его длительное время.
Однако прямое ихиспользование затруднено в силу высокой токсичности. Препараты же,стимулирующиеиндукциюцитокинов,приводяткопосредованнойповышенной резистентности к облучению и ускоренным процессам выводаметаболитов (О2–, H2O2 и др.) облучения и могут иметь широкое применение.Из литературных данных известно, что экспрессия рецепторов,узнающих β-глюканы в макрофагах, дендритных клетках, субпопуляциях Тлимфоцитовнеобходимадляпроявленияимисвоейбиологическойактивности [225]. Для того чтобы изучить возможность вовлечения CR3,Dectin-1 и TLR-6 в опосредование провоспалительных ответов HTLP, былоисследовано влияние генных конструктов, подавляющих экспрессию белковэтих рецепторов на способности HTLP вызывать выработку TNF-αмакрофагальными клетками RAW 264.7 (таблица 16 и 17, рисунок 19 и 20).Все конструкции были клонированы в ретровирусном векторе, упакованы ввирионы и были использованы для трансдукции RAW 264.7.
Было показано,что HTLP не стимулировал выработку TNF-α в культурах с выключеннымигенами рецепторов TLR-6 и Dectin-1. В то же время, инактивация генацелевогорецептораCR3несказываласьнавыработкеTNF-αмакрофагальными клетками. Продукция цитокина не отличалась от таковой вконтрольной культуре клеток с внесенным HTLP.В другой экспериментальной модели целевые рецепторы TLR-6, CR3 иDectin-1 блокировали высокоспецифичными моноклональными антителами(таблица 18, рисунок 21). HTLP не стимулировал выработку TNF-α вкультурах с добавлением моноклональных антител к рецепторам TLR-6 иDectin-1, тогда как блокирование целевого рецептора CR3 соответствующим146моноклональнымантителомнесказываласьнавыработкеTNF-αмакрофагальными клетками.Полученные данные по инактивации генов целевых рецепторов TLR-6,CR3 и Dectin-1 макрофагов и блокировании их моноклональнымиантителами однозначно свидетельствуют об участии двух рецепторов–Dectin-1 и TLR-6 – в активации макрофагальных клеток RAW 264.7 припомощи полисахарида HTLP, поскольку при выключении генов хотя быодного рецептора выработка цитокина TNF-α в пределах погрешности неотличается от значений в контрольной культуре клеток.Таким образом, для проявления биологической активности (активацииклеток и выработки цитокинов) HTLP необходимы оба рецептора – Dectin-1и TLR-6.
В связи с этим возможно несколько способов взаимодействияполисахаридноймолекулыиклеточныхрецепторовипередачивнутриклеточного сигнала.Во-первых, возможно связывание HTLP сразу с двумя рецепторами засчет большой молекулярной массы – 1–2 МДа, что приводит к активациисразу двух сигнальных каскадов, которые обладают эффектом синергизмапри участии транскрипционного фактора NF-κB. Активация NF-κB в случаеDectin-1 происходит при участии Src, Syk и CARD9-MALT1-Bcl-10. TLR-6,скорее всего, не участвует в связывании с полисахаридом отдельно от TLR-2,что показано в нескольких работах [301, 302].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
