Диссертация (1102418), страница 21
Текст из файла (страница 21)
Также описан β-глюкан из овса (БГО) с выявленной активностьюв заживлении ран, состоящий из остатков глюкозы, соединенных линейной β(1→3) и -(1→4) связью [284], который приводит к выработке TNF-α и IL-6 вмакрофагальной линии мышей RAW 264.7.Доподлинно известно, что LPS осуществляет свою биологическуюактивность через TLR-4 рецептор [285]. В свою очередь БГО и HTLPосуществляют передачу сигналов и через TLR-6 рецептор.
При этом138рецептор TLR-2 является корецептором TLR-6 и TLR-4. Таким образом, LPSи β-глюканы, а также HTLP действуют на одно семейство TLR рецепторов –TLR-2/TLR-6 и TLR-2/TLR-4. Это может объяснить факт стимуляциивыработки TNF-α и IL-1 и сочетанной индукции IL-1 и LPS под воздействиемHTLP. Практически все рецепторы TLR связываясь с собственнымилигандами, способны активировать NF-κB, который является одним изосновныхфакторов,регулирующихэкспрессиюпровоспалительныхцитокинов.
Активация NF-κB приводит к повышению продукции цитокиновIL-1, IL-2, IL-6, IL-10, TN F-α.Противоопухолевая активность HTLP исследовалась in vitro наклеточных линиях Hep-2 и L-929 и in vivo в модели карциносаркомы Уокера.Антиметастатическое действие полисахарида HTLP изучали в моделикарциносаркомы Уокера in vivo. Противоопухолевое действие HTLPнаблюдали во всех используемых моделях, как in vitro, так и in vivo.Торможение роста опухолевых клеточных линий Hep-2 и L-929, сдеструкцией трансформированных клеток было отмечено в опытных группахс исследуемой дозой HTLP 200 мкг/мл: 81,2% для L-929 и 40% для Hep-2(таблица 21).
Такой эффект HTLP, скорее всего, не связан с его влиянием нажизнеспособностьклеток,посколькуHTLPнеобладаетпрямымцитотоксическим действием, что было показано в одной из работ [267].Также было показано, что культивирование макрофагальных клеток линииRAW 264.7 с полисахаридом HTLP в дозах 100 мкг/мл и 200 мкг/мл в течение24 часов не приводило к достоверному снижению жизнеспособности клетоклинии RAW 264.7 (таблицы 7 и 8). Также не наблюдалось и увеличенияколичества макрофагальных клеток RAW 264.7 (таблица 9).
Ранее былопоказано, что HTLP не проявляет цитотоксических свойств и на лимфоидныеклетки мышей и человека (данные не приведены). Таким образом, можноговорить о противоопухолевом эффекте HTLP in vitro. Такие свойстваполисахаридов,извлеченныхизприродныхисточников,какиммуномодулирующая активность и предотвращение опухолевого роста без139прямой цитотоксичности для опухолевых клеток описаны достаточно давно[286]. Торможение роста культуры клеток, скорее всего, связано с запускомпроапоптотических каскадов в трансформированных клетках.Интересные данные были получены на моделях первичных опухолей invivo.
В случае карциномы Льюиса в изученном диапазоне доз, до 20-ти суток,критического ингибирующего влияния HTLP на развитие опухоли отмеченоне было (таблица 24). Однако к 20-му дню следует отметить тенденцию куменьшению размеров опухолевого узла у некоторых групп леченыхживотных. Коэффициент торможения роста опухоли составлял 10–24%.Предположительно, противоопухолевая активность in vivo обусловленамодуляцией иммунной системы, вызывающей развитие воспаления в местеобразования опухоли, за счет чего происходит ложное завышение значениявеса и снижения реального значения действия HTLP на трансформированныеклетки.
Дополнительным подтверждением этого предположения служатлитературные данные, которые свидетельствуют о том, что полисахаридыпроявляютсвоепротивоопухолевоедействиеопосредованно,черезиммунную систему, а не за счет прямого цитотоксическимого действия [287].Известно, что Т-клеточный ответ на антиген играет существенную роль в егоуничтожении и что для его запуска необходимо время. Видимо, к 20-ымсуткам фиксировалось начало его развития и имело бы смысл удлинитьвремя проведения эксперимента для реальной оценки действия HTLP наопухоль.Экспериментальная модель карциномы Льюиса дала возможностьнаблюдать и за антиметастатическим эффектом HTLP.
В работе былобнаружен отчетливый антиметастатический эффект полисахарида намодели метастазирующей карциномы легких Льюис. В зависимости от дозыи режима введения ингибирование метастазирования достигало 75% (таблица26) по сравнению с контролем.Антиметастатическую активность HTLP изучали на двух моделях:метастазирующей карциномы легких Льюиса, когда измельченные кусочки140карциномы легких Льюиса вводили внутримышечно в бедренную частьзадней лапы, и карциносаркомы Уокера - вводили в хвостовую вену крыс.Последняя обладает с избирательной органотропностью (формировалаопухолевые узлы в легких) и повышенной клоногенностью в условиях in vivo(использовалсявысокоаффинныйштаммкарциносаркомыУокера).Полисахарид HTLP проявлял антиметастатическую активность в широкомдиапазоне концентраций: и в 1,5 мкг на животное, и в 100 мкг в моделикарциносаркомы Уокера in vivo (таблицы 22 и 23).
Учитывая наличиеиммуномодулирующей активности у полисахарида из Helianthus tuberosus L.,можно утверждать, что полисахарид обладает прямым и непрямымпротивоопухолевым действием.Еслисравнивать двевыбранные вэксперименте модели,тоэкспериментальная модель метастазирующей карциномы легких Льюисаявляется наиболее адекватной, приближенной к реальным событиям ворганизме. В связи с тем, что карцинома Уокера проявляет свойстваорганотропности к легким, развивающиеся опухолевые узлы, возможно,правильнее рассматривать как первичную опухоль, а не как истинныеметастазы. В связи с этим мы предполагаем, что эта разница являетсяопределяющей в объяснении антиметастатической активности HTLP. Излитературных данных известно, что процесс метастазирования представляетсобой сложный каскад процессов, включая клеточную адгезию, миграцию,инвазию, межклеточные взаимодействия и взаимодействие клетки свнеклеточным матриксом.
Адгезия между опухолевыми клетками иэндотелиальными клетками сосудов является одним из важнейших факторовметастазирования раковых клеток [288]. В субпопуляции метастатическихраковых клеток по сравнению с доброкачественными или нормальнымиклетками высоко экспрессируется галектин-3 [289].
Галектин-3 участвует вразличныхбиологическихпроцессах,такихкакмежклеточныевзаимодействия, пролиферация, дифференцировка, апоптоз [290, 291].Галектин-3 способствует прогрессии опухоли и иммунному уклонению от141опухолевых клеток путем связывания с рецепторами Т-клеток, что приводитк ингибированию активации Т-клеток и апоптозу Т-клеток [292].Предполагается,чтоантиметастатическойоднимактивностиизHTLPвозможныхявляетсяобъясненийингибированиеимрецептора галектина-3 за счет связывания с этой молекулой. В работе КсяогеГао [293] описана структура молекулы галектина-3, которая имеет Сконцевуюобласть,распознающуюуглеводы(CRD),специфическисвязывающуюся с бета-галактозидами, и N-концевую область, обогащеннуюпролином и глицином, а также центр связывания линейного тетрасахарида ввиде канавки [294].Описан β-(1→4)-галактан полученный из пектина рамногалактомананаI(RG-I)картофеля,путемферментативнойобработки,которыйспецифически распознается рецептором галектин-3 [295].
Ганнинг ссотрудниками предположили, что модифицированный пектин содержитструктурные элементы размером с Gal3, которые могут связываться сгалектином-3 и ингибировать его функцию. Галектин-3 рассматривается вкачестве диагностического маркера и мишени для лечения рака [296].Макрофаги, как предполагается, расщепляют HTLP на небольшиефрагменты, которые способны связываться с галектином-3, а также сразличными клетками иммунной системы (дендритные клетки, моноциты идр.), активируя их в направлении противоопухолевой защиты.HTLPзапускаетспецифическогопротивоопухолевой(адаптивного)иответзанеспецифическогосчетактивации(врожденного)механизма противоопухолевой защиты. Специфические механизмы связанысоспецифическимицитотоксическимиТ-лимфоцитамиипротивоопухолевыми антителами.
HTLP регулирует баланс между Th1 и Th2,при этом сдвиг в сторону Th1 приводит к активации клеточного иммунитета,то есть цитотоксических Т-лимфоцитов, макрофагов и естественныхкиллеров. На мононуклеарах периферической крови человека мы наблюдалиувеличение количества выработки TNF-α, стимуляцию выработки IFN-γ,142модуляцию выработки IL-1, что связано с созреванием иммунокомпетентныхклеток. Ранее, и в этой работе, по антительному ответу к эритроцитам барананами были показаны адьювантные свойства HTLP (таблица 6). На основанииэтого мы предполагаем, что полисахарид будет стимулировать иммуннуюсистему организма к выработке противоопухолевых антител.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
