Технология получения текстильных и гидрогелевых депо-материалов с радиопротекторными свойствами (1095146), страница 45
Текст из файла (страница 45)
Полученный раствор фильтровали через фильтр Millipor 0,2 мкм и снимали спектры оптического поглощения на спектрофотометре марки «СФ-2000». По наличиюполос поглощения при длинах волн, характерных для ряда естественных примесей, определялиих присутствие в исследуемой системе.А.11 Методика определения наличия в альгинате натрия ионов металлов переменнойвалентности (железо, медь, цинк)Навеску альгината натрия в количестве 0,2 г помещали в тигель для последующего выжигания в муфельной печи в течение 4 часов при температуре 700 оС. Данная процедура позволяет избавиться от органических составляющих в составе альгината натрия, а именно, углерода,кислорода, азота.
В сухой остаток добавляли 2,5 мл концентрированной азотной кислоты. Далеерастворённый образец помещали в мерную колбу на 25 мл и доводили до метки дистиллированной водой. В полученном растворе было проведено спектрофотометрическое определениеионов железа (II) по реакции с орто-фенантролином на спектрофотометре марки «СФ-2000» последующей методике. К 10 мл полученного раствора добавляли 2 мл 0,1 % раствора ортофенантролина в воде, 2 мл раствора содержащего 0,6 моль/л ацетата натрия и 0,18 моль/л серной кислоты, 2 мл 1 % раствора гидроксиламина.
Полученный раствор выдерживали в течение60 минут, после чего определяли оптическую плотность в 10 мм кювете при 510 нм относительно холостой пробы.Определение наличия ионов меди и цинка проводили полярографическим методом, основанном на явлении поляризации микроэлектрода, получении и интерпретации вольтамперных кривых, отражающих зависимость силы тока от приложенного напряжения.
Измеренияпроведены на вольтамперометрическом анализаторе АВС-1.1. Данный прибор представляет собой автоматизированную систему, состоящую из микропроцессорного блока, встроенного трехэлектродного электрохимического датчика и измерительной ячейки. Режим работы прибора –переменно-токовая квадратноволновая вольтамперометрия. Предел обнаружения ионов меди –0,3 мкг/л, ионов цинка – 5 мкг/л. В стеклоуглеродный стакан, который одновременно выполняет функции электролитической ячейки и вспомогательного электрода, помещали 25 мл разбавленного фонового раствора (методика его получения приведена далее), в полученную системуприливали по 400 мкл анализируемого раствора, после чего проводили регистрацию вольтам-199перограммы. Рабочий тонкопленочный ртутный электрод образуется на стеклоуглеродной подложке в процессе предварительного катодного накопления определяемых ионов из исследуемого раствора, в который добавляются ионы ртути.
В качестве электрода сравнения использовалихлорсеребряный электрод в насыщенном растворе хлорида калия. Последовательность приготовления фонового раствора: Приготовление насыщенного раствора хлорида калия.На технических весах взвешивали 175 г хлорида калия, растворяли его при нагревании в3500 см дистиллированной воды. Горячий раствор отфильтровывали, охлаждали до комнатнойтемпературы и хранили в контакте с небольшим количеством кристаллов соли. Раствор азотнокислой ртути 0,01 М.Навеску нитрата ртути 0,343 г помещали в колбу вместимостью 100 см3, добавляли5 – 10 см3 дистиллированной воды и несколько капель концентрированной азотной кислоты,перемешивали до растворения, доводили до метки дистиллированной водой и вновь перемешивали. Кислота соляная, раствор 1,0 моль/дм3.82,6 см3 концентрированной соляной кислоты помещали в мерную колбу вместимостью1 дм3, доводили до метки дистиллированной водой, перемешивали. Концентрированный фоновый электролит.В мерную колбу вместимостью 200 см3 помещали 100 см3 насыщенного раствора хлорида калия, 20 см3 1 М раствора соляной кислоты и 20 см3 дистиллированной воды.
После перемешивания добавляли 5 см3 0,01 М раствора азотнокислой ртути, доводили раствор до меткидистиллированной водой и тщательно перемешивали. Разбавленный фоновый раствор.200 см3 концентрированного фонового раствора помещали в колбу вместимостью1000 см3 и доводили до метки дистиллированной водой.А.12 Методика получения модельной системы (дрожжевые клетки), используемой дляоценки радиопротекторной активности альгината натрияДрожжи Saccharomyces cerevisiae расы Феодосия-7 выращивали в течение двух дней притемпературе 27 – 29 ˚С на глюкозо-аммонийной среде следующего состава: (NH4)2SO4 – 5,0 г,KH2PO4 – 0,85 г, K2HPO4 – 0,15 г, MgSO4∙7H2O – 0,5 г, NaCl – 0,1 г, CaCl2∙4H2O – 0,1 г, глюкоза– 20 г, дистиллированная вода – 1000 мл. Использованная синтетическая среда не содержалаионов 3-d элементов, что позволило оценить их влияние на протекторную активность иссле-200дуемых соединений.
Выращенную биомассу дрожжей переносили в стерильный раствор глюкозы (среда, не содержащая ионов K+). Для этого ампулы с суспензированными дрожжами центрифугировали в течение 10 минут при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость сливали, а дрожжи ресуспендировали в растворе глюкозы с концентрацией 20 г/л. Процедуру очистки повторяли троекратно. Концентрация дрожжей составляла ~105 КОЕ/мл.А.13 Спектрофотометрический анализ антирадикальной активности веществ сиспользованием радикала 1,1-дифенил-2-пикрилгидразила (растворитель – толуол)Данные для построения калибровочной кривой и ее иллюстрация представлены в таблице А.1 и на рисунке А.2.Таблица А.1 – Данные для построения калибровочной кривой по аскорбиновой кислотеНаименованиеКонтрольная проба (вода)Раствор аскорбиновой кислоты, мкМ102040Разница оптических плотностей(∆D517)60D5170,4850,4750,4200,4200,3630,3610,2350,2390,1120,112Среднее значение D5170,480∆D51700,4200,0600,3620,1180,2370,2430,1120,3680,40,350,30,250,20,150,10,05001020304050Концентрация аскорбиновой кислоты, мкМРисунок А.2 – Калибровочный график для определения АРА60201А.14 Методика проведения токсикологического исследования материалов1)Санитарно-химические и токсикологические исследования проводили с вытяжками излечебных материалов.В санитарно-химическом эксперименте оценивалась химическая характеристика материалов.
В данной работе определяли изменение значения рН вытяжек из изделий, содержаниеформальдегида, что дает представление о природе мигрирующих из изделия химических соединений. Контролем при определении санитарно-химических показателей служила дистиллированная вода из той же партии, что использовалась для приготовления вытяжек.При проведении токсикологических испытаний изучали биологическое действие лечебного материала, стерильность и пирогенность исследуемых образцов.
Токсикологические испытания: изучение общетоксического, раздражающего и сенсибилизирующего действия проводили на беспородных белых крысах-самцах с массой тела 220 – 250 г по 8 особей в опыте иконтроле путем повторных подкожных введений вытяжки с использованием провокационнойвнутрикожной пробы. Принимая во внимание возможное продолжительное применение лечебных материалов при лечении трофических язв, инфицированных и гранулированных ран, длялечения ожогов, в том числе постлучевых и обязательную в эксперименте на животных аггравацию, продолжительность опыта составила 10 дней.По окончании эксперимента животных (крыс) забивали путем декапитации, изучали гематологические и биохимические показатели крови, определяли весовые коэффициенты внутренних органов по формуле:КМоргана мгМтела г.(А.5)Для оценки показателей, характеризующих функциональное состояние органов и системорганизма в эксперименте на крысах, использовали следующий перечень тестов.
Интегральныепоказатели оценивали по изменению массы тела, внешнего вида, поведения животных, состояния кожных покровов и слизистых оболочек, шерсти, потреблению пищи и воды. Функции печени оценивались по показателям: активность аланиновой трансаминазы (АЛТ), аспарагиновойтрансаминазы (АСТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), содержание креатинина. В качестве диагностического критерия оценивали коэффициент де Ритиса, представляющий собой отношение активности аспарагиновой трансаминазы к аланиновой. Выбор тестов был определен необходимостью оценить состояние систем и органов, отвечающих за метаболизм, детоксикацию и способность к элиминации.
Биохимические показатели определяли на полуавтоматичском фото1)Автор выражает благодарность сотрудникам Испытательной лаборатории по токсикологическим испытанияммедицинских изделий ФГБУ «Всероссийского научно-исследовательского и испытательного института медицинской техники» и лично руководителю испытательной лаборатории Перовой Н. М. за оказанную помощь.202метрическом анализаторе «Stat Fax 1904 Plus» в комплексе с проточной кюветой «Mosguito2400» производства фирмы «Awarenes Technology Inc.», США. Гематологические показателипериферической крови: содержание гемоглобина (Hb) – определяли на анализаторе «Stat Fax1904 Plus», подсчет числа эритроцитов (Er), лейкоцитов (L) и лейкоцитарной формулы кровипроводили при помощи микроскопов МБИ-15, «ЛОМО», СССР и Olympus CX41RT с видеокамерой EVS color VEC-335.Возможное аллергенное действие вытяжек из материалов изучали в опыте на белых крысах с применением провокационной внутрикожной пробы и проведением серологической диагностической реакции с сывороткой крови с целью выявления наличия комплекса «антигенантитело» по реакции непрямой дегрануляции тучных клеток.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
