Витамины
Лекция № 12
Тема: Витамины. Получение витаминов группы В.
План: 1. Характеристика и определение витаминов, функции витаминов.
2. Микробиологический синтез витамина В12 .
3. Получение витамина В2 .
4. Использование витаминов В12 , В2 в медицине и животноводстве.
Ключевые слова: цианкобаламин, рибофлавин, пропионовокислые бактерии, плесневые грибы.
Витамины – это низкомолекулярные органические вещества, необходимые любому организму в ничтожных концентрациях и выполняющих в нем каталитические и регуляторные функции. Недостаток витаминов нарушает обмен веществ и нормальные процессы жизнедеятельности организма, приводя к развитию патологических состояний. Способностью к синтезу витаминов обладают лишь автотрофы, в частности, растения. Многие микроорганизмы также образуют целый ряд витаминов, поэтому синтез витаминов с помощью микроорганизмов стал основой для разработки технологий промышленного производства. Однако, с помощью микроорганизмов целесообразнее производить особо сложные по строению витамины: В12 , В2 , β-каротин (провитамин А) и предшественники витамина D. В производстве большинства витаминов ведущие позиции занимает химический процесс.
Получение витамина В12. Витамин В12 – α- 5,6-диметилбензимидазол (ДМБ) – цианкобаламин необходим для роста и развития многих животных и микроорганизмов. Способность к его синтезу широко распространена среди прокариотических микроорганизмов. Активно продуцируют витамин В12Propionibacterium, а также Pseudomonasи смешанные культуры метанообразующих бактерий.
Рекомендуемые материалы
Микробиологический синтез – единственный способ получения витамина В12 – осуществляют в две стадии на основе пропионовокислых бактерий, способных к самостоятельному синтезу коэнзима В12– аденозилкобаламина 5,6 ДМБ. Первую стадию культивирования проводят в течение 80 часов в анаэробных условиях и при слабом перемешивании (до полной утилизации сахара). Полученную биомассу центрифугируют и сгущенную суспензию инкубируют во втором аппарате еще в течение 88 часов, аэрируя культуру воздухом 2 м3/ч. Питательная среда содержит сахара (обычно глюкозу, 1-10%), добавки солей железа, марганца, магния и кобальта (10-100 мг/л), кукурузный экстракт (3-7%) и азот в виде (NH4)2 SO4 . Ферментацию проводят при 300 С и рН 6,5-7,0. На второй стадии происходит образование ДМБ. После завершения ферментации витамин извлекают из клеток нагреванием в течение 10-30 минут при 80-1200С. При последующей обработке горячей клеточной суспензии цианидом происходит образование CN-кобаламина. Продукт сорбируют , пропуская раствор через активированный уголь и окислы алюминия, а затем элюируют водным спиртом или хлороформом. После выпаривания растворителя получают кристаллический витамин В12 , выход которого достигает 40мг/л.
Разработаны эффективные технологии получения витамина В12 и на основе термофильных бацилл Bacilluscirculans, которые выращивают в нестерильных условиях в течение 18 часов при 65-750 С на питательных средах, приготовленных из соевой и рыбной муки, мясного и кукурузного экстракта. Выход витамина составляет от 2,0 до 6,0 мг/л.
Для нужд живодноводства витамин В12 получают на основе смешанной ассоциации, состоящей из четырех культур – углеводсбраживающих, аммонифицирующих, сульфатвосстанавливающих и собственно метанообразующих бактерий, которые взаимосвязанно расщепляют органический субстратдо СО2 и СН4 . В качестве субстрата используют декантированную ацетоно-бутиловую барду, содержащую 2,0-2,5% сухих веществ. Брожение проходит при 55-570 С в нестерильной культуре в две фазы: на первой образуются жирные кислоты и метан, на второй – метан, углекислота и витамин В12. Длительность процесса в одном аппарате составляет 2,5-3,5 суток, в двух последовательно – 2-2,5 суток. Концентрация витамина в барде достигает 850 мкг/л. Параллельно в значительных количествах образуется газ – 65% метана и 30% углекислоты. Барда имеет слабощелочную реакцию. Для стабилизации витамина ее подкисляют соляной или фосфорной кислотой, затем в выпарном аппарате сгущают до 20% содержания сухих веществ и высушивают в распылительной сушилке. Содержание В12 в сухом препарате составляет 100 мкг/г.
Получение витамина В2 . Название витамина В2 - рибофлавин – происходит от сахара рибозы, входящего в состав молекулы витамина в виде многоатомного спирта D-рибита. Он широко распространен в природе и в значительных количествах синтезируется растениями, дрожжами, грибами, бактериями.
Животные, не синтезирующие этот витамин, должны получать его в составе комбикормов, поскольку при его дефиците в организме нарушаются процессы белкового обмена, замедляется рост. Препараты рибофлавина используют в медицине для лечения ряда заболеваний.
Рибофлавин, или витамин В2 - содержится в клетках микроорганизмов, будучи коферментом в составе флавопротеинов (прежде всего - соответствующих ферментов из класса оксидоредуктаз - ФМН, ФАД). Продуцентами витамина В2 являются бактерии (Brevibacteriumammoniagenes, Micrococcusglutamaticus), дрожжи (Candidaguilliermondii, Candidaflaveri), микроскопические грибы (Ashbyagossypii, Eremotheciumashbyii) и плесневые (Aspergillusniger) грибы.
Промышленное получение рибофлавина осуществляют химическим, микробиологическим и комбинированным синтезом. При комбинированном – синтезированная микроорганизмами рибоза химически трансформируется в витамин В2 .
Для медицинских целей микробиологический рибофлавин получают на основе гриба Aspergillus. Для высоких выходов витамина (до 7г/л) используют усовершенствованные штаммы и оптимизированные среды, содержащие в %: кукурузный экстракт – 2,25; пептон – 3,5; соевое масло – 4,5 и стимуляторы (пептоны, глицин). Используют активный инокулят, которым засевают стерильную среду. Ферментацию проводят в течение семи суток при 280 С и хорошей аэрации. Исходный рН составляет 7,0, в ходе ферментации в связи с выделением кислот среда подкисляется до рН 4,0-4,5. После использования углеродного субстрата продуцент начинает утилизировать кислоты, рН повышается, и затем начинается образование витамина В2 . При этом, кристаллы рибофлавина накапливаются в гифах и вне мицелия. На постферментационной стадии для выделения витамина мицелий нагревают в течение 1 часа при 1200 С.
Для получения кормовых препаратов витамина В2 используют достаточно простой способ, основанный на выращивании микроскопического гриба Eremotheciumashbyii в глубинной культуре в течение 80-84 часов при 28-300 С на среде с глюкозой или мальтозой (2,5%), источником азота в виде NH4 NO3 и карбоксидом кальция (0,5%). Выход рибофлавина составляет 1250мкг/мл. Культуральная жидкость концентрируется в вакуумном испарителе до содержания сухих веществ 30-40% и высушивается в распылительной сушилке. Товарная форма продукта - порошок с содержанием рибофлавина не менее 10мг/г и 20% сырого протеина. В препарате присутствуют также никотиновая кислота(витамин РР) и витамины В1 , В3 , В6 , В12.
Использованная литература:
1. Медицинская биотехнология. К.Х.Алмагамбетов. // Астана. – 2009. – 236с.
2. Молекулярная биотехнология. Б. Глик, Дж.Пастернак. // Москва «Мир». – 2002. – 589с.
3. Биотехнология. Н.В.Загоскина, Л.В.Назаренко и др. // Москва. – «Оникс». – 2009. – 496с.
4. Основы биотехнологии. Т.А.Егорова, С.М.Клунова, Е.А.Живухина. // Москва. – «Академия». – 2008. – 208с.
Контрольные вопросы:
1. Характеристика витаминов.
2. Характеристика витамина В12.
3. Характеристика витамина В2.
4. Характеристика микроорганизмов, синтезирующих витамины.
Обратите внимание на лекцию "12 Основы информационного поиска".
5. Микробиологический синтез витамина В12.
6. Микробиологический синтез витамина В2.
7. Характеристика химического и комбинированного синтеза витамина В2 и В12.
8. Способы получения кормовых препаратов витамина В2 и В12..
9. Получение витамина В2 использованием рекомбинантного штамма продуцента Bacillus subtilis.
10. Применение витаминов В2 и В12 в медицинской практике.