Диссертация: Эпизоотология и диагностика анаплазмоза и сочетанных трансмиссивных заболеваний

Актуальность темы. Анаплазмозы – классические природно-очаговые, передающиеся иксодовыми клещами облигатно-трансмиссивные инфекции, вызываемые облигатно-внутриклеточными грамотрицательными протеобактериями рода Anaplasma (Коренберг Э.И., 2013). Впервые гранулоцитарный анаплазмоз собак (вызываемый Anaplasma phagocytophilum) был описан в 1982 году (Madewell B.R., 1982); тромбоцитарный анаплазмоз (вызываемый Anaplasma platys) – в 1978 году (Harvey J.W., 1978). С этого момента эти два заболевания ежегодно регистрируются во многих странах мира. Anaplasma phagocytophilum является возбудителем гранулоцитарного анаплазмоза не только у собак, но и у других видов животных, и у человека в том числе. Гранулоцитарный анаплазмоз человека (ГАЧ) регистрируется по всему миру, и в России в том числе. Переносчиками Anaplasma phagocytophilum в России являются клещи рода Ixodes (Коренберг Э.И., 2013), широко распространенные в нашей стране (Акбаев М.Ш., 2000). Зараженность клещей данным возбудителем варьируется в зависимости от региона и составляет от 0% до 46,7% в отдельных природных очагах (Katargina О., 2012; Рар В.А., 2011; Rar V.A., 2014; Колчанова Л.П., 2011; Ефимова А.Р., 2017; Ильинских Е.Н., 2015). Роль собак как возможных резервуаров инфекции пока не определена. Однако данные о распространенности гранулоцитарного анаплазмоза среди собак имеют большое значение, т.к. могут служить маркером возможного заболевания людей. Наиболее вероятным переносчиком Anaplasma platys является клещ Rhipicephalus sunguineus (Sainz А., 2015), распространенный в южных регионах нашей страны (Акбаев М.Ш., 2000). Зараженность клещей данным возбудителем варьируется от 0,6% в Филиппинах (Ybañez А.Р., 2012) до 14,3% в Китае (Li Y., 2015). Информация о степени зараженности клещей Anaplasma platys в России на данный момент отсутствует. На сегодняшний день собран достаточно большой объем информации о зараженности собак этими двумя видами анаплазм в разных странах мира, а также о клинических проявлениях данных заболеваний. В России проводилось лишь несколько исследований, посвященных распространению и проявлению анаплазмоза у собак (Volgina N.S., 2013; Филимонова О.Б., 2014; Колодий И.В., 2012; Раевская М.А., 2012; Бутенков А.И., 2013). Все они проводились на территории европейской части России; таким образом, ситуация на территории азиатской части до сих пор оставалась неизученной. Кроме того, стоит учесть, что большинство клинических случаев описано на территории Европы и США, в то время как встречающиеся в России штаммы Anaplasma phagocytophilum и Anaplasma platys могут характеризоваться иной симптоматикой.
Степень разработанности темы. В доступной литературе недостаточно отражены вопросы распространенности анаплазмоза и сочетанных с ним трансмиссивных заболеваний собак на территории России; информация по азиатской части России отсутствует. Также нет данных о генетических штаммах анаплазм, циркулирующих на территории нашей страны, и об особенностях клинического проявления при заражении собак данными штаммами. Таким образом, для ветеринарии важность изучения анаплазмоза собак в России определяется необходимостью выявления характерных для наших штаммов клинических признаков и гематологических маркеров, способных помочь ветеринарным врачам в диагностике данного заболевания.
Целью данной работы было изучить распространение анаплазмоза собак в различных регионах России и особенности его проявления в ассоциациях с трансмиссивными паразитозами, а также определить маркеры для его предварительной лабораторной диагностики.
В задачи исследования входило: 1) Определить серопревалентность по анаплазмозу среди собак в различных регионах России. 2) Определить зараженность собак Anaplasma phagocytophilum и Anaplasma platys методом ПЦР в различных регионах России. 3) Сопоставить нуклеотидные последовательности полученных генетических изолятов анаплазм с уже имеющимися в международной базе данных (GenBank). 4) Сравнить клинические проявления анаплазмоза у собак в зависимости от генетического изолята возбудителя. 5) Проанализировать биохимические и гематологические показатели положительных по анаплазмозу собак; выявить возможные диагностические маркеры данного заболевания. 6) Изучить частоту встречаемости сочетанных с анаплазмозом других трансмиссивных заболеваний. 7) Изучить особенности проявления микст-инфекций анаплазмоза и трансмиссивных заболеваний паразитарной природы.
Научная новизна. Впервые получены данные о распространении анаплазмоза собак на азиатской части России; данные по европейской части России дополнены результатами исследований методом ПЦР. Впервые определены генетические особенности изолятов анаплазм, выделенных от домашних собак на территории России. Выявлены отклонения в биохимических и гематологических показателях, характерные для гранулоцитарного и тромбоцитарного анаплазмоза собак. Установлены случаи бессимптомного носительства анаплазм, а также сочетания анаплазмоза с другими трансмиссивными заболеваниями.
Теоретическая и практическая значимость. Изучено распространение анаплазмоза собак в восьми регионах как европейской, так и азиатской части России Установлены случаи заражения собак как Anaplasma phagocytophilum, так и Anaplasma platys. Обнаруженные изоляты Anaplasma phagocytophilum и Anaplasma platys сопоставлены с уже имеющимися в международной базе данных. Отмечено, что при заражении одним и тем же штаммом Anaplasma phagocytophilum возможно как развитие клинически проявленного гранулоцитарного анаплазмоза, так и бессимптомное носительство. Выявлены лабораторные маркеры гранулоцитарного и тромбоцитарного анаплазмоза. Определена значимость метода ПЦР для выявления анаплазм у собак без сопутствующей клинической симптоматики. Определена значимость комплексного обследования собак на другие трансмиссивные заболевания, которые могут протекать совместно с анаплазмозом.
Личный вклад. Диссертантом лично выполнена экспериментальная часть работы, анализ полученных результатов, сформулированы выводы и практические предложения. Статистическая обработка данных выполнена совместно с Бондаревым С.А. и Бондаревой О.В. Молекулярно-генетические исследования проведены на базе ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора совместно с заведующей научной группой по разработке новых методов диагностики природно-очаговых инфекций Карань Л.С. Автор выражает благодарность всем ветеринарным врачам, обеспечившим сбор и доставку материала из различных регионов России.
Степень достоверности. Достоверность результатов подтверждается большим объемом серологических, генетических, биохимических и гематологических исследований, а также статистической обработкой данных.
Апробация результатов. Материалы исследований представлены на конференции «Лабораторная диагностика в ветеринарной медицине» (Москва, 2014); XXIII Московском Международном Ветеринарном конгрессе в рамках секции «Лабораторная диагностика» (Москва, 2015); Ежегодной научно-практической конференции МГАВМиБ им. К.И.Скрябина «Актуальные проблемы ветеринарной медицины, зоотехнии и биотехнологии», проводимой в рамках Всероссийского Фестиваля науки (Москва, 2015); Международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 95-летию кафедры паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы МГАВМиБ им. К.И.Скрябина (Москва, 2015); Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Инновационные технологии и технические средства для АПК» (Воронеж, 2015); Конференции «Лабораторная диагностика в ветеринарной медицине» (Санкт-Петербург, 2016); XXV Московском Международном Ветеринарном конгрессе в рамках секции «Трансмиссивные заболевания» (Москва, 2017).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 статей (из них 2 – в журналах, рекомендованных ВАК РФ), а также учебно-методическое пособие.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа включает в себя следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, рекомендации по использованию научных выводов, сведения о практическом использовании результатов, перспективы дальнейшей разработки темы. Работа содержит 145 страниц машинописного текста (в т.ч. 2 страницы приложений), иллюстрирована 35 рисунками и включает 39 таблиц. Список используемой литературы включает 189 источников, из них 165 зарубежных.