Диссертация (Связь мутаций митохондриального генома с формированием атеросклеротических поражений артериальной стенки), страница 3

Для 11 митохондриальных мутаций обнаруженыотличия в уровне гетероплазмии для разных участков как нормальной, так ипораженной атеросклерозом сосудистой стенки, что подтвердило мозаичноерасположение атеросклеротических поражений в интиме артерий.Обнаружены мутации митохондриального генома, характерные для разныхтиповатеросклеротическогопоражения,атакжесуммарногоатеросклеротического поражения.Впервыеобнаружено,чтомитохондриальныемутацииm.652delG,m.3336T>C, m.12315G>A, m.14459G>A, m.13513G>A и m.14846G>A в клеткахкрови связаны с наличием атеросклеротических бляшек в сонных артериях, амутации m.12315G>A, m.15059G>A, m.13513G>A и m.14846G>A  сутолщением интимо-медиального слоя сонных артерий.Впервыеисследованнымустановлено,11чтосовокупнаямитохондриальныммутационнаямутациямнагрузкапоассоциированасатеросклеротическими поражениями артерий.Впервые выявлены два гаплотипа m.1555A>G-m.5178C>A-m.13513G>A иm.652delG-m.12315G>A-m.3256C>T,ассоциированныесатеросклерозом,которые обусловлены сцепленными между собой мутациями мтДНК.12Впервые обнаружено, что с атеросклеротическими поражениями связанагаплогруппа митохондриального генома U.

При этом митохондриальныегаплогруппы M и T ассоциированы с отсутствием атеросклероза у людей.Теоретическаязначимостьданнойдиссертационнойработызаключается:1) В выявлении трех новых мутаций митохондриального генома, ранее неописанных в литературе: m.652delG, m.961delC и m.5132insAA.2)Вустановлениифакта,чтогенетическаяпредрасположенностькатеросклерозу определяется суммарной нагрузкой митохондриального генома,обусловленной сочетанием мутаций, ассоциированных с атеросклерозом имутаций, связанных с отсутствием атеросклеротических поражений. Вчастности,рисквозникновениямутационной нагрузкой точечныхm.15059G>A,m.3336T>C,атеросклерозаопределяетсясуммарноймутаций мтДНК m.652delG, m.5178C>A,m.12315G>A,m.3256C>T,m.14459G>A,m.13513G>A, m.652insG, m.14846G>A и m.1555G>A.3) В выявлении трех гаплогрупп митохондриального генома, связанных сатеросклеротическими поражениями.

При этом гаплогруппа U оказаласьассоциирована с атеросклерозом, а гаплогруппы M и T – с его отсутствием уиндивидов.Практическая значимостьРазработанный оригинальный метод количественной оценки мутантногоаллеля может быть использован при исследовании мутаций и полиморфизмовкак митохондриального, так и ядерного генома при различных патологияхчеловека. Предложенная схема исследования позволяет идентифицироватьмутации, гаплотипы и гаплогруппы митохондриального генома, являющиесявозможнойпричинойклиническойкартиныиндивида.Данныйметодологический подход перспективен для массового скрининга людей, в13целях определения предрасположенности индивидов к атеросклеротическимпоражениям, ранней диагностики и семейного анализа атеросклероза.Основные положения диссертации, выносимые на защиту1.Выявлена мозаичность распределения митохондриальных мутаций в интимеаорты человека: обнаружены отличия в уровне гетероплазмии 11 мутаций дляразных участков как нормальной, так и пораженной атеросклерозомморфологически картированной интимы аорт человека.2.Суммарное атеросклеротическое поражение интимы аорт ассоциировано смутациями митохондриального генома m.3256C>T, m.3336T>C, m.5178C>A,m.12315G>A, m.14459G>A и m.15059G>A, а мутация m.13513G>A достоверночаще встречалась у условно здоровых участников исследования.3.Для разных типов атеросклеротических поражений интимы аорт, таких какначальное поражение, липофиброзная и фиброзная бляшка, характеренразличный набор мутаций митохондриального генома, ассоциированных сатеросклерозомилисвязанныхсотсутствиемподобныхпоражений.Липофиброзные бляшки и начальное атеросклеротическое поражение интимыаорт связаны с мутациями m.3256C>T, m.3336T>C, m.5178C>A, m.12315G>A,m.14459G>A и m.15059G>A.

В то же время мутация m.1555A>G связана сотсутствиемначального и суммарного атеросклеротических поражений,амутация m.14846G>A – с отсутствием липофиброзных бляшек. С фибрознымибляшками ассоциированы m.5178C>A и m.3256C>T. Мутация m.12315G>Aсвязана с отсутствием фиброзных бляшек в интиме аорты.4.Атеросклеротические бляшки сонных артерий ассоциированы с мутациямиm.652delG, m.3336T>C, m.12315G>A и m.14459G>A. Мутации m.13513G>A иm.14846G>A связаны с отсутствием бляшек. Утолщение интимо-медиальногослоясонныхартерийассоциированосоднонуклеотиднымизаменамиm.12315G>A и m.15059G>A.

Мутации m.13513G>A и m.14846G>A связаны сотсутствием утолщения интимо-медиального слоя.145.Генетическая предрасположенность к атеросклерозу определяется суммарнойнагрузкой митохондриального генома, обусловленной сочетанием мутаций,ассоциированных с атеросклерозом и мутаций, связанных с отсутствиематеросклеротических поражений. Совокупная мутационная нагрузка поисследованным 11 митохондриальным мутациям оказалась связана как сатеросклеротическими бляшками, так и с утолщением интимо-медиальногослоя сонных артерий.6.Гаплотипы m.1555A>G-m.5178C>A-m.13513G>A и m.652delG-m.12315G>Am.3256C>T ассоциированы с атеросклеротическими поражениями сонныхартерий.7.Гаплогруппа U связана с атеросклеротическими поражениями сонныхартерий.

Гаплогруппы M и T ассоциированы с отсутствием каротидногоатеросклероза.Личный вклад автораЛичный вклад автора диссертации составляет более 90% и заключается втом, что Сазоновой М.А. самостоятельно проведен подбор и анализотечественной и зарубежной литературы по теме диссертации. Кроме того,автором самостоятельновыполнены экспериментальные исследования поопределению уровня гетероплазмии мутаций митохондриального генома вобразцах интимы аорты; гомогенатах аорт; стенках аорт, морфометрическиразделенныхнаучасткинормальнойинтимыиатеросклеротическогопоражения различной степени тяжести. Сазоновой М.А.

была проведенадетекция уровня гетероплазмии мутаций митохондриального генома в700образцах клеток крови, взятых у участников исследования из Московскогорегиона, здоровых или имеющих клинические проявления атеросклероза.Диссертантом самостоятельно проведены математическая и статистическаяобработка полученных данных, анализ и обобщение результатов. СазоноваМ.А. самостоятельно написала текст диссертации, а также подготовилапубликации по теме диссертации.15Вместе с тем, в диссертации использованы данные, полученные иопубликованные в соавторстве с сотрудниками лаборатории ангиопатологииФГБНУ «НИИ Общей патологии и патофизиологии» Желанкиным А.В. иЧичёвойМ.М.

Электронно-микроскопические исследования морфологиимитохондрийбыливыполненыпринаучномконсультированиид.б.н.Бобрышева Ю.В. Исследование гаплогрупп митохондриального генома былопроведено совместно с сотрудниками лаборатории популяционной генетикиФГБНУ«Медико-ГенетическийНаучныйЦентр»БалановскойЕ.В.иБалановским О.П.

В общей сложности, доля совместных исследований вдиссертационной работе автора составила менее 10%.Исследование в части диссертационной работы Сазоновой М.А. 3.8.4-6выполнялось при поддержке Министерства образования и науки РФ (проектRFMEFI61314X0006, соглашение 14.613.21.0006).ПубликацииОсновные результаты исследования опубликованы в 91 научной работе, изкоторых 35 статей и 16 тезисов опубликованы в ведущих рецензируемыхнаучных журналах, входящих в список ВАК Российской Федерации. Двадцатьтри опубликованные статьи цитируются РИНЦ. Восемнадцать статей и 16тезисов опубликованы в зарубежных журналах, цитируемых Web of Sciense иScopus, двадцать пять из них имеют импакт-фактор от 2,239 до 4,593. Порезультатам данной работы поданы 2 патентных заявки и опубликованамонография.Индекс Хирша диссертанта составляет 7,0 по базе «Scopus» и 9,0 по базеРИНЦ.Внедрение результатов исследования в практикуРезультаты диссертационного исследования планируется использовать дляразработки тест-системы, необходимой для диагностики предрасположенности16к атеросклерозу, ранней генодиагностики и семейного анализа даннойпатологии.

Кроме того, они могут быть полезны при создании молекулярноклеточных и генно-инженерных моделей, необходимых для разработкиподходов к лекарственной терапии атеросклероза.Апробация диссертацииРезультаты диссертации были доложены на 76-85 Европейских конгрессахпо изучению атеросклероза (EAS) 2007-2017 годов; VII Всероссийской научнопрактической конференции с международным участием «Молекулярнаядиагностика-2010»;международнойтелеконференции«Фундаментальныенауки и практика», 2010 г.; XV Российском VII Всероссийской научнопрактическойконференциис международным национальном конгрессе«Человеклекарство»;международнойителеконференции«Высокиетехнологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии,фармакологиии медицине» 2011 г.;ПятойМеждународнойнаучно-практической конференции с элементами научной школы для молодых ученых,аспирантов, магистрантов и студентов "Инновации и человек" (Актуальныеинновационные вопросы в медицине, биологии, экологии, психологии,педагогике и социологии), 2014 г., Турция, Анталья; Итоговой конференции порезультатам выполнения мероприятий за 2009 год в рамках приоритетногонаправления «Живые системы» ФЦП «Исследования и разработки поприоритетным направлениям развития научно-технологического комплексаРоссии на 2007-2012 годы»; Десятой Международной научно-практическойконференции «Стратегические вопросы мировой науки», 2014 г., Перемышль,Польша; Десятой научно-практической конференции "Перспективные научныеисследования-2014", 2014 г., София, Болгария; Всероссийской научнопрактической конференции по патологической анатомии, посвященной 155летию кафедры патологической анатомии ВМедА 2014 г.; международнойтелеконференции «Актуальные проблемы современной науки» 2012 г.;МеждународнойконференцииИзраильскогоОбщества61-ойСердца17ассоциациированногосИзраильскимОбществомКардиоторакальнойХирургии, 2014 г., Тель Авив (Устный Доклад); Десятом АзиатскомТихоокеанском Конгрессе по гипертонии, 2014 г., Себу, Филлипины; Третьейконференции по воспалительным и иммунологическим маркерам, 2014 г., СанДиего, США; международной телеконференции «Современный мир, природа ичеловек» 2011 г.; Второй Международной конференции «Сердце и Мозг», 2014г., Париж, Франция; Третьем Всемирном Биотехнологическом Конгрессе, 2014г., Дубай, ОАЭ, (Устный доклад (Лекция)); международной телеконференции«Проблемы и перспективы современной науки» 2011 г.;Пятом ВсемирномКонгрессе по исследованию митохондрий, 2014 г., Берлин, Германия (Устныйдоклад);ТретьейМеждународнойконференции«ГеномикаиФармакогеномика» («Геномика-2015»), 2015 г., Сан Антонио, США (Устныйдоклад),IXВсероссийскойнаучно-практическойконференциисмеждународным участием «Молекулярная диагностика -2017».Апробация диссертации состоялась в Федеральном государственномбюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт общейпатологии и патофизиологии», на заседании межлабораторной конференции,протокол №1 от 25 апреля 2018 года.Структура и объем диссертацииДиссертация изложена на 350 страницах машинописного текста и состоитиз следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы,результаты, обсуждение, заключение и выводы.