Диссертация (Клиническое значение эндотелиальной дисфункции в развитии акушерских и перинатальных осложнений), страница 9

По данным S.K. Nadar (2005), число ДЭК коррелировало с уровнемфактора фон Виллебранда (г=0,35; р=0,001), растворимого Е-селектина (г=0,43;р<0,001), являющимися плазменными маркерами эндотелиальной дисфункции[180]. В другом исследовании установлено увеличенние числа циркулирующихДЭК и концентрации биохимического маркера воспаления С-реактивногопротеина у больных с инфарктом миокарда по сравнению со здоровыми.

Этипоказатели коррелировали между собой (r=0,5; р=0,001) [201]. L.X. Yang и соавт.(1993) у пациентов с ИБС обнаружили значимую корреляцию числа ДЭК и49уровня малонового диальдегида (r=0,8) в зависимости от тяжести заболевания ипроведения терапии. Выявленное соотношение показателей позволяет судить отяжестиипрогнозеИБС[203].Убольныхсзастойнойсердечнойнедостаточностью A.Y.

Chong и соавт. (2004) получили данные об обратнойзависимостимеждуэндотелий-зависимойвазодилатациейичисломциркулирующих ДЭК (р=0,002), а также положительной – между ДЭК ифактором фон Виллебранда (р=0,032) [143]. В исследовании J.Quilici и соавт.(2004) показано, что число циркулирующих ДЭК наряду с тропонином являетсяважным диагностическим маркером острого нарушения кроовобращения сердцабез подъёма ST [188].

Чувствительность определения ДЭК для диагностикиданной патологии была несколько ниже, чем при определении тропонина I(соответственно 53,3% и 61,7%). Специфичность обоих маркеров составляла100%.В.И. Козловский и соавт. (2008), с помощью регрессионного анализа наоснове многофакторных моделей прогноза развития событий у больных сартериальной гипертензией определили прогностическую ценность повышениячислациркулирующих(чувствительностьмоделиДЭК:78%,прогнозированиеспецифичностьлетального99%;исходаинформационнаязначимость 96%), прогнозирование инфаркта в миокарда (чувствительностьмодели76%,специфичность88%;информационнаязначимость78%),прогнозирование инсульта (чувствительность модели 76%, специфичность 92%;информационная значимость 88%) [48].Таким образом, цитология десквамированных эндотелиоцитов являетсяпрямым диагностическим тестом поражения эндотелия.

Десквамация – маркернеобратимых изменений в клетке, и количественная характеристика этихизменений является объективным критерием деструктивных изменений в интимесосудов. Перспективным представляется детальное исследование морфологииДЭК, метод идентификации структурных изменений на клеточном уровне,позволяющий получить больший объем информации о состоянии сосудистойсистемы. Современная техника визуализации и математической обработки50биологическогообъектадаётколичественнойхарактеристикивозможностьклеточныхполученияультраточноймикроструктур,регистрацииизменений, сопряженных с «предболезнью», нарушением гомеостаза на самыхранних стадиях заболевания.

Новые диагностические технологии должны бытьнаправлены на повышение точности и объективизацию полученных результатов,что включает не только качественный, но и детальный количественный анализпараметров биологического объекта.1.4.Морфометрия в диагностике патологии эндотелияНа сегодняшний день одной из стратегических задач в медицине являетсяпоиск диагностических методов, фиксирующих наиболее ранние проявленияпатологическогопроцесса,определениемаркеров«предболезни»,идентифицирующих минимальные отклонения гомеостаза и позволяющихпроводить превентивные мероприятия по профилактике изучаемой патологии.Многие методики, применяемые сегодня в медицине, сложны, дорогостоящи итрудоемки, что диктует необходимость поиска таких объектов исследования,которые были бы легкодоступны и имели высокую диагностическую ценность насамых ранних этапах заболевания.Одним из методов исследования в медицине является биологическаяморфометрия – раздел морфологии, использующий математический анализизменений формы изучаемых биологических объектов на базе системнойгеометрии и стереометрии [36].

Использование для этих целей системногоанализа расширяет возможности морфологического исследования качественных иколичественных изменений, дает возможность глубже раскрыть и точнеевыразить общие и частные закономерности [1].Целью количественной морфологии является максимальная объективизацияизучения качественных и количественных проявлений патологических процессов,с исключением погрешностей измерений, а также субъективизма исследователя.Исследования, основанные на количественной оценке любых признаковпатологическогопроцесса,даютвозможностьотбиратьдлянаучнойи51практической деятельности только те результаты, которые обладают наибольшейнадежностью и дают представление о возможной ошибке исследования.

Крометого, полученные данные имеют определенную точность, т.е. высокую степеньприближения к истинным значениям, а также достаточную достоверность [1].Совершенствованиепрограммного обеспечения, применение статистическихметодов исследования в медицине обеспечивают возможность работы сбольшими массивами изучаемых параметров и максимальной объективизацииполученных результатов исследований. С учетом современных тенденций вразработке и производстве диагностического оборудования, совершенствованиетехнологий визуализации морфогенеза на ранних, доклинических стадияхпатологического процесса должно являться приорететнейшим из направленийнаучногопоиска.Синтезклассической цитоморфологииисовременныхкомпьютерных технологий с новыми методами медицинской статистики выводитнауку на новый уровень понимания патологического процесса, возможностиисследования минимальных отклонений физиологического состояния, повышенияточностииспецифичностидиагностическогопроцесса.Применениевысокоточных оптических систем анализа изображений позволяют ускоритьобработку большого массива количественных параметров, а также датькачественно новую оценку биологическому процессу, практически недоступнуюпри использовании традиционной оптической и электорнной микросокпии.Огромный объем естественного разнообразия биообъектов требует использованияболее совершенных систем анализа изучаемого материала.В 90-ых годах прошлого столетия введено понятие компьютернойморфоденситометрии(КМДМ)–информационнойбиотехнологии,заключающейся в цифровой обработке изображения биологического объекта,конкретизирующей его морфофункциональное состояние в норме и припатологии с использованием методов компьютерного распознавания образов.КМДМ-анализ является единой информационной технологией взаимосвязанныхэтапов изучения объекта от подготовки препарата и его представления вцифровойформедополучениявысокоточныхколичественных52морфофункциональныххарактеристик,формирующихполнуюсистемуколичественных морфоденситометрических параметров биологического объекта[36].Известно большое количество работ по анализу изображения клетки спомощью компьютерных систем распознавания образов, использующих методикуморфоденситометриинаосновеавтоматизированныхцитоанализаторов.Приоритет отводят методам, обеспечивающим минимальную инвазивность идостаточную оперативность исследований, которые проводят с помощьюновейших оптических компьютерных систем.В литературе описывается морфометрическое исследование нейронов корыголовного мозга [19], изучение морфологии синовиоцитов при патологии сутавов[122], морфометрия клеток эндометрия при гиперпластических процессах [116],исследование клеток плаценты при акушерской патологии [56] и т.д.Достаточно распространен морфометрический метод исследования вгематологии.Чаще всего в гематологических исследованиях используютсяклетки периферической крови, как наиболее доступные для выделения ивизуализации.

Компьютерная морфометрия не только позволяет получитьматематические характеристики клеточной популяции, но и дает возможностьсудить об активности внутриклеточных процессов.В работе Е.Н. Колосовой и соавт. (2011) проведена витальная компьютернаяфазовая морфометрия клеток периферической крови, которая показала, чтоморфометрические показатели (диаметр, периметр, и площади) отражаютморфологические особенности и функциональную полноценность клеток [49]. Влитературе можно найти научные работы с применением морфометрииэритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов [16; 31; 49; 113 и др.]. Кроме того, естьработы по изучению морофметрических параметров бластных клеток костногомозга [86].В научной литературе использование морфометрического метода висследовании циркулирующих ДЭК имеет отражение лишь в единичных работах.Простым и доступным методом идентификации и исследования морфологии53апоптозных клеток является световая микроскопия [71].

В.И. Козловский и соавт.(2008) исследовали морфологию циркулирующих ДЭК с помощью световоймикроскопии. В работе показано увеличение количества клеток с признакамиапоптоза у больных с артериальной гипертензией [48].Влитературедесквамированныхупоминаетсяметодикапроточнойцитометрииэндотелиоцитов, которая используется для определенияколичества «зрелых» ДЭК и исключения клеток с измененной геометрией [123;Метод175].проточнойцитометрииоснованнафиксациисигналовсветорассеяния и флюоресценции луча лазера от исследуемого биологическогообъекта. В работе деформированные и поврежденные клетки исключали изанализа, таккак они дают слабое рассеивание. Увеличение же в кровисодержания «зрелых» ДЭК связывали с патологией в ответ на повреждениестенки сосуда.В зарубежной литературе мы нашли ссылку на метод сортировкициркулирующих ДЭК, активированных флюоресценцией, и расчета соотношениямеждуапоптознымиклеткамиэндотелия(СD-146)иклетками-предшественниками (CD-34), как показатель степени поражения эндотелиальнойсистемы [202].Научных работ с детальным исследованием морфометрических параметровциркулирующих ДЭК периферической крови в доступной литературе наминайдено не было.

Тем не менее, морфоденситометрическое исследованиециркулирующих ДЭК представляется перспективным направлением диагностикипатологииэндотелия.Изучениепатогенезаэндотелиальнойдисфункциипозволяет рассматривать минимальные отклонения в структуре эндотелиоцитовкак важные маркеры необратимых изменений, своевременная регистрациякоторых является важным шагом в диагностике сосудистой патологии.1.5.