Диссертация (Блокаторы медленных кальциевых каналов новые возможности использования в качестве регуляторов образования соединительной ткани)

ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ«ОМСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИНа правах рукописиСкальский Сергей ВикторовичБЛОКАТОРЫ МЕДЛЕННЫХ КАЛЬЦИЕВЫХ КАНАЛОВ:НОВЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯВ КАЧЕСТВЕ РЕГУЛЯТОРОВ ОБРАЗОВАНИЯ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ14.03.06 – Фармакология, клиническая фармакологияДИССЕРТАЦИЯна соискание ученой степени доктора медицинских наукНаучный консультант:Зырянов Сергей Кенсаринович –доктор медицинских наук, профессорОмск – 20182ОГЛАВЛЕНИЕВВЕДЕНИЕ .………………………………………………………………………7ГЛАВА 1 БЛОКАТОРЫ МЕДЛЕННЫХ КАЛЬЦИЕВЫХ КАНАЛОВ ВРЕГУЛЯЦИИОБРАЗОВАНИЯСОЕДИНИТЕЛЬНОЙТКАНИ(обзорлитературы) …………………………………………………………………..…1.1.

Механизмымежклеточныхвзаимодействийна23территориисоединительной ткани……………………………………………………231.1.1. Фибробласты – основные функционально активные клеткисоединительнойткани–каквозможныйобъектфармакологического воздействия……………………………………241.1.2. Макрофагально-фибропластическое взаимодействие ……………271.1.3. Основы фиброгенеза. Воспаление как стереотипная реакция……291.1.4. Физиологические основы кальциевого гомеостаза: каналы инасосымембранфибробластов,внутриклеточныекальций-связывающие белки……………………………………………………331.2.

Блокаторы медленных кальциевых каналов (антагонисты кальция) каквозможный инструмент воздействия на функцию фибробластов……..1.2.1. Фармакологическиекальциевыхканаловсвойства(антагонистовблокаторовмедленныхкальция).Возможностииспользования для регуляции функции фибробластов……………1.2.2. Классификация органических антагонистов кальция…………….1.2.3. Фармакологическиеэффектыблокаторовблокаторовмедленныхкальциевых3839медленныхкальциевых каналов…………………………………………………1.2.4. Влияние38каналовнаэкспрессию транскрипционного фактора NF-kB в культуре413активированных фибробластов………………………………………421.3.

Актуальные области клинического использования модулирующейактивности антагонистов кальция на функции фибробластов…………441.3.1. Клиническое обоснование целесообразности фармакологическойрегуляции образования соединительнотканных перитонеальныхспаек…………………………………………………………………….451.3.1.1. Современные представления о методах профилактикиобразования и рецидива послеоперационных перитонеальныхспаек………………………………………………………………..1.3.1.2. Клинико-патогенетические48особенностигипертрофических и келоидных рубцов………………………521.3.1.3.

Клиническое использование антифиброгенного действияБМКК………………………………………………………………62Резюме .………………………………………………………………………63ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ…………………651.1. Общая характеристика экспериментального и фармацевтическогоматериала…………………………………………………………………..671.2. Экспериментальное обоснование доз БМКК при спайкообразованииin vivo и in vitro…………………………………………………………1.2.1. Подбордозовогорежима интроперитонеального75введенияверапамила крысам…………………………………………………751.3. Методы исследования……………………………………………………761.3.1. Культуральные методы…………………………………………761.3.2. Морфологические и иммуноцитохимические методы…………791.3.3. Биохимические методы……………………………………………811.3.4.

Иммунологические методы………………………………………821.3.5. Электрофизиологические методы………………………………821.4. Фармацевтические исследования………………………………………831.4.1. Разработка верапамилсодержащего крема………………………831.4.2. Фармакотехнологические методы………………………………8441.4.2.1. Метод получения модели биологической мембраны………841.4.2.2. Метод диализа через полупроницаемую мембрану……….841.4.2.3. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии…851.4.3. Способ приготовления антирубцового крема…………………….861.5.

Характеристика материала при моделировании патологическихрубцов кожи……………………………………………………………861.5.1. Характеристика рубцовых повреждений кожи…………………871.5.2. Биомикроскопия кожи……………………………………………881.6. Методы статистического анализа полученных результатов………….88ГЛАВА 3 МОДЕЛИРОВАНИЕ СПАЕЧНОГО ПРОЦЕССА БРЮШНОЙПОЛОСТИ И КРИТЕРИИ ОЦЕНКИ ЕГО ВЫРАЖЕННОСТИ………………3.1. Степеньвыраженностиспаечногопроцесса,макро-91имикроскопическая характеристика спаек при гемоперитонеуме у крыси кроликов……………………………………………………………….3.2. Функциональнаяактивностьперитонеальныхфибробластов91имакрофагов при развитии спаечного процесса в брюшной полости…3.2.1. Биохимическаяхарактеристикапроцесса96перитонеальногоспайкообразования………………………………………………….963.2.2.

Содержание провоспалительных цитокинов в перитональнойжидкостикрыснаэтапахпролиферацииизавершениявоспалительного процесса при гемоперитонеуме……………….99Резюме .……………………………………………………………………101ГЛАВА 4 ОЦЕНКА ДОЗОЗАВИСИМОГО ЭФФЕКТА РЕГУЛЯЦИИАКТИВНОСТИМАКРОФАГОВПЕРИТОНЕАЛЬНЫХБЛОКАТОРАМИФИБРОБЛАСТОВМЕДЛЕННЫХИКАЛЬЦИЕВЫХКАНАЛОВ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ КЛЕТОЧНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ……4.1.

Морфо-функциональнаяхарактеристикаперитонеальныхфибробластов и макрофагов в культуре клеток………………………4.2. Сравнительнаяоценкаклассических103блокаторовмедленныхкальциевых каналов верапамила , дилтиазема и нифедипина в1035качестве регуляторов функции перитонеальных фибробластов имакрофагов; дозозависимый эффект…………………………………1084.3. Оценка влияния классических БМКК верапамила, дилтиазема инифедипина на активность ядерного фактора транскрипции NF-kB..Резюме .………………………………………………………………………..115122ГЛАВА 5 ВЕРАПАМИЛ КАК СРЕДСТВО ПРОФИЛАКТИКИПЕРИТОНЕЛЬНОГО СПАЙКООБРАЗОВАНИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ……..5.1. Подбордозовогорежимаинтраперитонеального124введенияверапамила……………………………………………………………….1245.2. Влияние верапамила на формирование спаек в брюшной полостикрыс и кроликов при гемоперитонеуме…………………………………1305.3.

Воздействие верапамила на синтез фибробластами компонентовмежклеточного матрикса при моделировании спаечного процесса вбрюшной полости………………………………………………………….1335.4. Коррекция цитокинсинтетической активности макрофагов крыс пригемоперитонеуме с использованием верапамила……………………….Резюме.………………………………………………………………………..ГЛАВА6ФАРМАКОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕИССЛЕДОВАНИЯ137140ПОРАЗРАБОТКЕ ОПТИМАЛЬНОГО СОСТАВА АНТИРУБЦОВОГО КРЕМАС ВЕРАПАМИЛОМ……………………………………………………………1416.1. Обоснование выбора действующего вещества антирубцового крема –верапамила…………………………………………………………………1426.2. Выбор оптимальной основы для антирубцового крема………………...1426.3.

Биофармацевтическое изучение процесса высвобождения верапамилаиз различных количественных композиций антирубцового крема…144Резюме .………………………………………………………………………..148ГЛАВА 7 ВЕРАПАМИЛ КАК СРЕДСТВО РЕМОДЕЛИРОВАНИЯПАТОЛОГИЧЕСКОГО КОЖНОГО РУБЦА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ…..1497.1. Характеристика патологических кожных рубцов и их изменений приэкспериментальной терапии………………………………………………14967.2.

Данные биомикроскопии рубцовых изменений кожи………………….1527.3. Сравнительная морфологическая характеристика патологическихрубцов у крыс после экспериментальной терапии верапамилом всоставе антирубцового крема и водно-вазелин-ланолиновой основойкрема………………………………………………………………………..1537.3.1. Структура кожи спины контрольных крыс……………………….1537.4. Формирование рубцов после иссечения кожного лоскута……………1607.5. Изучениеэффективностидействияверапамиланапроцессокончательной трансформации патологического рубца………………170Резюме.……………………………………………………………………..179ГЛАВА 8 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ…………….181ЗАКЛЮЧЕНИЕ …………………………………………………………………..195ВЫВОДЫ.…………………………………………………………………………199СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ .……………………………………………………202УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ.…………………………………………………..203ВВЕДЕНИЕАктуальность темы исследованияПроблема избыточного образования соединительной ткани в медицинезатрагивает фактически все сферы: актуальна в клинике внутренних болезней,хирургии, комбустиологии, косметологии, офтальмологии.

Почти 45% всехслучаев смерти в развитых странах мира приходится на хроническиефибропролиферативныезаболевания[561].Частнымслучаемфибропролиферативных состояний являются послеоперационные спайки игипертрофические/келоидные рубцы [478, 570]. Спайки развиваются у 50-100%больных после общехирургических абдоминальных операций и у 70-97%пациенток после гинекологических оперативных вмешательств [13, 189, 558].Особое место среди потенциальных последствий спайкообразования занимаютабдоминальная и тазовая боли, кишечная непроходимость, сложность повторныххирургических вмешательств и интраперитонеальной химиотерапии, у женщинбесплодие, повышенный риск внематочной беременности. Распространенностьгипертрофических/келоидных рубцов после ожогов составляет около 67% [302].Чрезмерное рубцевание является ведущей причиной снижения качества жизниобожженных.Ожоговыебольныереабилитации.

Значительнаяфункциональнымичастотребуютдлительногочасть восстановительной фазыкосметическимограничениям,периодаотносится кнакладываемымгипертрофическими и келоидными рубцами, включающим сокращение диапазонадвижения конечностей, интенсивный кожный зуд и непереносимость высокой илинизкой температуры, нарушающие физическую и социальную активностьпациентов [313].8Степень разработанности проблемыПроблеме повышения качества лечения больных с перитонеальнымиспайкамиисгипертрофическимиикелоиднымирубцамипосвященымногочисленные современные работы отечественных и зарубежных авторов [1,15, 26, 31, 34, 301, 304, 312, 391, 455]. Однако, несмотря на современныедостижения и разнообразие способов профилактики и лечения спайко- ирубцовообразования результаты их нельзя признать удовлетворительными [34,189,234].Перспективнойпредставляетсяфармакологическаякоррекцияключевых звеньев патогенеза процессов спайко- и рубцовообразования наклеточном и молекулярном уровне.

Однако, патогенез спаек и келоидных рубцовдо сих пор недостаточно изучен [332], отсутствуют и достоверные методикимоделирования спаек, а следовательно, не существует терапии, эффективнопрепятствующей избыточному фиброгенезу.Возможностиантифибрознойтерапииопределяютсясовременнымизнаниями о клеточно-молекулярных механизмах фиброгенеза. Известно, чтоосновой фиброгенеза являются фибробласты при активации синтезирующиебольшое количество внеклеточного матрикса [304, 389, 462]. При этомфиброгенез прогрессирует, пока фибробласты остаются в ране; апоптоз этихклеток определяет переход от грануляций к заживлению с формированием рубца[323].