Диссертация (Патофизиологическое значение ацетилхолина в пролиферации опухолевых клеток толстой кишки in vitro и in vivo), страница 2

Концентрация ацетилхолина в образцах тканей может бытьиспользована в качестве маркера фазы воспаления слизистой оболочкитолстой кишки. Разработанные модели могут быть использованы вэкспериментальной онкологии.Методология и методы исследования1.Методы поиска, анализа и обобщения литературных данных: перевод исоздание библиотеки по материалам конференций, лекций и статей;теоретический анализ и обобщение специализированной литературы;2.Методымоделированияиветеринарнойработы:наблюдение,оперативное вмешательство и послеоперационный уход;3.Методы работы с клетками эукариот;4.Биохимические методы исследования: титрование по Хестрину вмодификации Трубицыной И.Е.;5.Методыработынапроточномцитометре:реакцияпрямойиммунофлюорисценции, детекция и создание шаблонов-оригиналов, работа свитальными красителями для работы с клетками эукариот;6.Методы аналитической химии: приготовление растворов, измерениеоптической плотности растворов, измерение рН среды;7.Методы математической обработки полученных экспериментальныхданных: анализ данных на распределение, проведение исследования внутриэкспериментального массива, сравнение между сериями экспериментальныхданных.Внедрение результатовРезультаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс на кафедреобщей патологии и патологической физиологии медицинского институтаРУДНОсновные положения, выносимые на защиту1.

Ацетилхолин оказывает влияние на опухолевые клетки SW620 in vitro. Взависимости от дозы он может как стимулировать рост клеток, так и вызыватьих гибель.112. Ацетилхолин in vitro в низких концентрациях (от 10-4М и ниже) способенвлиять на синтез интрацеллюлярных молекул эпидермального фактора роста иматриксных металлопротеиназ 3 и 9 типов.3. Разработанные экспериментальные модели позволяют изучать начальныеэтапы роста опухоли толстой кишки у крыс.4. Концентрация Ах в первые трое суток от начала воспаления определяетнормальную пролиферативную активность клеток в зоне альтерации.Предложена возможность использования концентрации ацетилхолина какмаркера воспаления слизистой оболочки толстой кишки крыс.Степень достоверности полученных данныхКлетки линии SW620 были использованы согласно договора обезвозмездном научном сотрудничестве между ЦНИИГ и Федеральнымгосударственным бюджетным учреждением «Российский онкологическийнаучный центр им.

Н. Н. Блохина» Минздрава России. Для работы наклеточнойкультуреиспользовалистандартнуюпроизводственнуюпитательную среду и кондиционирующие добавки, телячью эмбриональнуюсыворотку, сертифицированную для работы с культурами клеток (всепроизводства ПанЭко, РФ). Пластик и расходные материалы использовалиодноразовый. Посуду из стекла использовали только для кратковременногохранения растворов и воды для разведения.

Для экспериментов in vivoиспользовали белых лабораторных крыс Wistar из разведения питомникаФИБХ им. Овчинникова-Шемякина РАН (МО г. Пущино-на-Оке).Для оценки статистически значимых различий использовали данныеполученных в сериях экспериментов. Оценку проводили после определениятипа распределения данных, и использовали непараметрические критериисравнения как парных зависимых (внутри эксперимента), так и парныхнезависимыхизмененийкритерии.выборокисследуемых(серияэкспериментов).параметровприменялиПриоценкединамикимногопараметрические12Личное участие автора в проведенных исследованияхАвтором самостоятельно выполнен основной объем экспериментов,проведеныобработкаианализполученныхданных,подготовлениллюстративный материал, описаны и сформулированы основные положениядиссертации, составляющие ее новизну и практическую значимость, а такжеподготовлены материалы публикаций в научных журналах.Апробация работыРезультаты диссертационной работы были представлены в форме докладов итезисов на ежегодных сессиях ЦНИИГастроэнтерологии, ГБУЗ МКНЦ ДЗМ41-я Научная сессия ЦНИИГ XXXIX сессия ЦНИИ гастроэнтерологии"Мультидисциплинарный подход к гастроэнтерологическим проблемам»2012г «Расширяя границы» 5-6 марта 2015 год, «Принципы доказательноймедицины в клиническую практику» 2-3 марта 2016 года симпозиум«Фундаментальная наукадля практическоймедицины»конференцияхФГБУ«РОНЦ им.

Н. Н. Блохина» МЗ России: Белорусско-Российская научнопрактическая конференция с международным участием «Отечественныепротивоопухолевые препараты» Минск, 23 - 25 мая 2013 года, ХIIвсероссийской научно-практической конференции с международным участием«Отечественные противоопухолевые препараты» 2015г EPC meeting-2015,Toledo; Гастроэнтерология Санкт-Петербурга 2012 год, материалы 14-огоМеждународного Славяно-Балтийского научного форума «Санкт-Петербург –Гастро 2012», на расширенном заседании кафедры общей патологии ипатологической физиологии РУДН с привлечением сотрудников ГБУЗ МКНЦДЗМ.ПубликацииПо материалам диссертации опубликовано 17 печатных работ, в томчисле 4 статьи и 13 тезисов в журналах, входящих в перечень, утвержденныйВАК Министерства образования и науки РФ.13Объем и структура диссертации.Диссертация построена по традиционному принципу и включает разделы:введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты и их обсуждение,заключение и выводы.

Материалы изложены на 146 листах машинописноготекста, содержат 25 рисунков и 22 таблицы. Библиографический списоквключает 197 работ.14Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ1. Рак толстой кишки. Современные представления о патологииВ структуре онкологической заболеваемости в странах Западной иСеверной Европы, Северной Америки, Австралии и Японии рак толстойкишки (РТК) составляет 7-14% и 14% для России [6].

Отмечается увеличениезаболеваемости в период 2000-2010 годов: среди женщин - 9,2 тысяч, умужчин - 11,6 тысяч человек в год на сто тысяч населения. В крупных городахотмечают тенденцию к омоложению заболевания, что делает это заболеваниесоциальнозначимым [6].УчитываяданныеВсемирнойОрганизацииЗдравоохранения факторами риска для его развития кроме возраста,генетической предрасположенности, наличия хронических очагов воспаленияи нерационального питания; является отсутствие полноценной физическойактивности;чрезмерноеупотреблениеалкоголя,курение;воздействиевредных факторов окружающей среды и производственные вредности;длительный стресс [10; 11; 20; 119].

При условии выявления РТК на раннейстадии прогноз лечения положительный, однако в силу особенностейдиагностических манипуляций на обследование больные в нашей стране идутне охотно, а получение материала при фиброколоноскопии часто носитсубъективный характер [4; 6; 7]. По указанной причине с конца ХХ векаразрабатывают методы менее инвазивных процедур, диагностики РТК,которыепозволятпоказателей,провестиуровеньопределениекоторыхмолекулярно-биологическихизменяетсяприразвитииРТК [5; 11; 45; 66; 81; 160; 131].Одной из причин отсутствия простого неинвазивного метода диагностикиявляется то, что метаболизм, пролиферация, дифференциация и другиефизиологические процессы, происходящие в клетках эпителия слизистойоболочки(СО)множествомжелудочно-кишечногобиологическитрактаактивных(ЖКТ);регулируютсявеществ(БАВ)нейроиммуноэндокринного происхождения, которые до настоящее времени15рассматривались преимущественно как нейромедиаторы [59; 81; 130; 131].Было показано, что они обладают и более широким спектром биологическогодействия [139].В обеспечении слаженной деятельности слизистых оболочек ЖКТ, итолстой кишки в частности, ацетилхолину (Ах) отводится центральная рольрегулятора физиологических функций [81].

По мнению ряда отечественныхпатофизиологов (Трубицына И.Е., (1999); Коротько, (2009) органы ЖКТ ицентральная нервная система (ЦНС) тесно взаимосвязаны благодаря особойинтегрирующей системе (Amine Precursor Uptakeand Decarboxylation, APUDсистема) , которая была описана в 1968 году А. Пирсом и до сих пор активноизучается [33]. Клетки данной системы - апудоциты) способны синтезировать,накапливатьидекарбоксилироватьбиогенныеамины,вырабатыватьпептидные гормоны, оказывая разнообразные регуляторные действия наорганы и ткани [89; 90; 113]. БАВ данной системы по принципу «прямойобратной связи» регулирует деятельность парасимпатической нервнойсистемы, где ацетилхолину отводят центральное положение регуляторасосудистого тонуса, и, таким образом, он может рассматриваться как один изглавных регуляторов функций репаративного аппарата клеток слизистыхоболочек [81; 86; 185]. Ах может быть как нейронального, так и такназываемого «не-нейронального», тканевого синтеза и/или местоположения(тАх) [51; 59; 131; 157] что оказалось характерно для опухолевых клеток[44; 71; 81].