Диссертация (Изменение реактивности организма животных под действием высокомолекулярного полисахаридного комплекса), страница 6

Препарат обладает активностью при герпесе, цитомегаловирусе,гриппе, клещевом энцефалите, кори, вирусе бешенства и гепатите С[Моисеенко О.М. [и др.,] 2006; Witter R., Stenberg U., Hesse S., Kondo T., etal., 2006]. Вначале название растительному препарату на территории РФ2627было присвоено: «Картофеля побегов экстракт».

В 2011 годубыл подвергнутперерегистрации ипрепаратназвание было изменено на:«Полисахариды побегов Solanum tuberosum», затем «Панавир» и дляветеринарии «Форвет». Действующим веществом вышеназваных препартовявляетсясубстанциявысокомолекулярный«GG17»,котораяполисахаридпредставляет[ПерепелкинаО.В.,собойМаркинаН.В.,Полетаева И.И., 2006; Witter R., Stenberg U., Hesse S., Kondo T., et al.,2006]. Предложенные препараты повышают неспецифичсскую резистентность организма, в тоже время в последующем были выявлены и другиесвойства [Перепелкина О.В., Маркина Н.В.,Полетаева И.И.,ОстровскаяР.У.,2006; Witter R., Stenberg U., Hesse S., Kondo T., et al., 2006]. Втерапевтических дозах препаратыаллергизирующего,хорошо переносятся и не оказываютэмбриотоксического, мутагенного, тератогенного,канцерогенного действия[Стовбун С.В., Литвин А.А., Якимук Л.В.,Сергиенко В.И., 2008; Stovbun S.V., Kolbukhina L.V.,.

Nosik N.N, MerkulovaL.N. et al., 2009].Противовоспалительное действие показано на моделиэкспериментального экссудативного отека. При внутривенном введенииполисахаридыуже через 5 минут захватываются клеткамипечени иселезенки [Стовбун С.В., Колобухин Л.В., Носик Н.Н., Меркулова Л.Н., идр., 2009; Stovbun S.V., Kolbukhina L.V.,. Nosik N.N, Merkulova L.N. etal.,2009]. Выведение препарата начинаетсяполисахаридыобнаруживаютсявчерез 20 – 30 минут, когдамочеивыдыхаемомвоздухе.Характерными особенностями панавира и форвета является повышениежизнеспособности клеток в присутствии вирусов в культуре клеток,снижение титров вирусов, увеличение латентного периода развитияэкспериментальной вирусной инфекции[Грибенча С.В., Литвин А.А.,Кохнович М.А., Сергиенко В.И., и др., 2009; Stovbun S.V., Kolbukhina L.V.,.Nosik N.N, Merkulova L.N.

et al.,2009].Уникальность препаратовзаключается в способности проявлять одновременноесинтеза вирусных белков и иммуномодулировать27блокирование[стимулируя синтез28интерферонов] неспецифические факторы. Обработка клеток препаратомпанавир за 24 часа до инфекции приводит к снижению инфекционныхтитров ВГС [Климова Р.Р., Кущ А.А., Федорова Н.Е., Литвин А.А., 2009;Stovbun S.V., Kolbukhina L.V.,.

Nosik N.N, Merkulova L.N. et al., 2009;Стовбун С.В., Колобухин Л.В., Носик Н.Н., Меркулова Л.Н. [и др.] 2009].Был изучен антивирусный эффект препарата призаражениикультурыклеток большей дозой ВГС и изучено развитие инфекции в динамике[Стовбун С.В., Колобухин Л.В., Носик Н.Н., Меркулова Л.Н. [и др.] 2009;Stovbun S.V., Kolbukhina L.V.,. Nosik N.N, Merkulova L.N. et al.,2009;Федорова Н.Е., Кущ А.А., Соколова Т.М., 2010]. Для обработки клетокиспользовали препарат в дозах 20, 10, 5, 2,5 и 1,25 мкг/200 мкл, которыйвводили в момент заражения клеток [Сафронов Д.Ю., Сафронов С.В.,Кучеров В.А., и др., 2011; Стовбун С.В., Берлин А.А., Михайлов В.И.,Сергиенко В.И., и др., 2012; Stovbun S.V., Skoblin A.A.,2012 ]. В частностипоказано, что в пробах среды, отобранных на 4-й день после инфекции ВГС,обработанных и необработанных препаратом культур, титры ВГС равнялисьнулю, в то время, как в контрольных опытах титры ВГС уже составляли 1,5lg ТЦД50/20 мкл [Стовбун С.В., Берлин А.А., Михайлов В.И., СергиенкоВ.И., и др., 2012;Stovbun S.V., Kiselev A.V., A.M.

Zanina, A.I. Mikhailov etal.,2012; Стовбун С.В., Яковенко Л.В., 2014]. Доза препарата, равная 1,25мкг, не приводитк подавлению инфекционной активности ВГС.Аналогичные результаты были получены и при учете результатов на 5-йдень после заражения культур клеток [Стовбун С.В., Берлин А.А., МихайловВ.И., Сергиенко В.И., и др., 2012;Чернова Н.И., Перламутров Ю.Н., СтовбунС.В., Кучеров В.А., и др., 2014].

Получены данные, свидетельствующие отом, что препарат панавир обладает способностью тормозить репликациюВГС в инфицированных культурах клеток SW – 13 и приводит ксущественномуснижениютитровинфекционнойактивностивируса[Стовбун С.В., Берлин А.А., Михайлов В.И., Сергиенко В.И., и др., 2012;Чернова Н.И., Перламутров Ю.Н., Стовбун С.В., Кучеров В.А., и др., 2014].2829Показано также, что препарат панавир повышает жизнеспособность ВГСинфицированных клеток [Стовбун С.В., Берлин А.А., Михайлов В.И.,Сергиенко В.И., и др., 2012; Чернова Н.И., Перламутров Ю.Н., Стовбун С.В.,Кучеров В.А., и др., 2014].

В этих концентрациях, а также в дозах до 150мкг препарат панавир не обладает цитотоксическим свойством, чтокоррелирует с результатами о противовирусных свойствах препарата,подтвержденных на других моделях опасныхинфекций [Стовбун С.В.,Яковенко Л.В., 2014; Чернова Н.И., Перламутров Ю.Н., Стовбун С.В.,Кучеров В.А., и др., 2014]. Герпесвирусная инфекция является одной изсамых распространенных, представляетсобой серьезную проблему дляорганизма [Стовбун С.В., Яковенко Л.В., 2014; Чернова Н.И., ПерламутровЮ.Н., Стовбун С.В., Кучеров В.А., и др., 2014].

Экспериментальныеисследования показали высокую противовирусную эффективность панавирав условиях in vitro[Чернова Н.И., Перламутров Ю.Н., Стовбун С.В.,Кучеров В.А., и др., 2014; Стовбун С.В., Яковенко Л.В., 2014]. Доказанылечебные свойства отечественного противовирусного препарата панавира ифорвета [Чернова Н.И., Перламутров Ю.Н., Стовбун С.В., Кучеров В.А., идр., 2014; Стовбун С.В., Яковенко Л.В., 2014].

Два режима внутривенноговведения растворов подвергались исследованию однократно или двукратнос периодичностью в 48 часов. Схемы введения исследовали с интервалом 7суток, курсовая доза составила 15 мл, а суточная доза – 5 мл[Чернова Н.И.,Перламутров Ю.Н., Стовбун С.В., Кучеров В.А., и др., 2014; Стовбун С.В.,Яковенко Л.В., 2014]. Панавири форветне изменяютуровеньсывороточного IFN, в то время как уровень лейкоцитарного IFNувеличивают.

Динамика индукции лейкоцитарного IFN имеет двухфазныйхарактер [Чернова Н.И., Перламутров Ю.Н., Стовбун С.В., Кучеров В.А., идр., 2014; Стовбун С.В., Яковенко Л.В., 2014]. Практика подтвердилаправильностьприменениякомплексной терапиипанавирапривирусныхинфекцияхв[Чернова Н.И., Перламутров Ю.Н., Стовбун С.В.,Кучеров В.А., и др., 2014; Стовбун С.В., Яковенко Л.В., 2014]. Однако2930следует учитывать прииммунотерапиииммунологический статус, чтоважно для достижения цели [Чернова Н.И., Перламутров Ю.Н., СтовбунС.В., Кучеров В.А., и др., 2014; Стовбун С.В., Яковенко Л.В., 2014].

Впоследние годы получены данные о механизмах защиты при ВПГ, методахиммунологического контроля, учете медленного синтеза капсидных белков[Чернова Н.И., Перламутров Ю.Н., Стовбун С.В., Кучеров В.А., и др., 2014;Стовбун С.В., Яковенко Л.В., 2014], онкобелков Е7, интерферона-α приизбирательном блокировании большинства генов.1.6. СВОЙСТВА ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНОГО ПОЛИСАХАРИДНОГО КОМПЛЕКСАGG (ФОРВЕТА)Физико-химические свойства растворов GG могут быть объясненысуществованием трехмерно связанных наночастиц размером 350 нм[Скрипкин Ю.К., 2003; Баринский И.Ф., Алимбарова Л.М., Лазаренко А.А.

[идр.],2003]. Внутреннее пространство наночастиц бесструктурно, они имеютмолекулярную массуM = 108 – 109 Дальтон и нескомпенсированныйотрицательный заряд и вплоть до концентраций насыщенного раствора слабовзаимодействуют и не агрегируют [Ведясова О.А.,2003; Скрипкин Ю.К.,2003]. Наночастицывизуализируются как правильные сферы примерноодинакового диаметра, а разработанная промышленная нанотехнологияполучениямонодисперсныхчастиц,обладающихфармакологическойактивностью, характеризуется высокой воспроизводимостью [СкрипкинЮ.К., Матушевская Е.В., Сабирова Л.М., Чистякова Т.В., 2004; Salvucci M.E.,Crafts – Brandner S.J., 2004]. Следовательно, в одной терапевтической дозенаночастиц содержится 1010÷1011 штук, эта величина соответствует и дажесущественно превышает количество вирусных частиц в организме.

Основныепараметры, определяющие биологическую безопасность наночастицы —размер и нескомпенсированный отрицательный заряд [Климова Р.Р.,Федорова Н.Е., Козлов А.Ю., [и др.] 2004; Salvucci M.E., Crafts – BrandnerS.J., 2004; Стовбун С.В., Лепехин А.В., Ратников Л.И., Литвин А.А. и др.,30312007]. Экспериментально определили величину предельной растворимостиGG при температуре 36,6 Со и pH = 7.Оказалась, что коэффициентрастворимости равен 0,13. Раствор GG состоит из отрицательно заряженныхкластеров размером — 350 нм, разделенных частично поляризованнымислоями молекул воды, которые обеспечивают взаимное скольжениенаночастиц и вязкость близкую к вязкости воды [Стовбун С.В., Литвин А.А.,Якимук П.В., Сергиенко В.И., 2008; Kolbukhina L.V.,. Nosik N.N, MerkulovaL.N.

et al.,2009]. Внутреннее пространство наночастицGG представленосильно связанными (физическими и химическими связями) трехмернымибесструктурными (изотропную и однородную) молекулярными решетками[Грибенча С.В., Литвин А.А., Кохнович М.А., Сергиенко В.И. и др., 2009;Kolbukhina L.V.,. Nosik N.N, Merkulova L.N.

et al.,2009]. Пептиды, фосфорприводят к образованию электронейтрального соединения [Стовбун С.В.,Берлин А.А., Михайлов А.И., Сергиенко В.И., и др., 2012; Stovbun S.V.,Kiselev A.V., A.M. Zanina, A.I. Mikhailov et al.,2012]. Технология получениясубстанции основана на использовании особенностей полихронной кинетикисверхмедленных молекулярно–динамических процессов [105 ÷ 107 сек], сфизико- химическимисредахпревращениямив диффузионно – неоднородных[Стовбун С.В., Берлин А.А., Михайлов А.И., Сергиенко В.И. [идр.]2012; Stovbun S.V., Kiselev A.V., A.M. Zanina, A.I. Mikhailov et al.,2012].1.7. МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ ФОРВЕТАФорвет создан на основе противовирусного препарата панавир и имеетнизкую токсичность [Ld50=3000] и относятся к противовирусным ииммуномодулирующим средства.

Уже через час после введения центральнаянервная система активируетзащитный ответ [Алиев К.А., БабаджановаМ.А., Бабаджанова М.П., Давлятназарова З.Б., 2001; Singh A.K., SinghaJ.S.,2001]. Препаратывоздействуют на мембрану клеток ив 1,5 разаповышаютбелки теплового шока [БТШ], соответственнозащитныемеханизмыклетки [Шаркова В.Е., 2001; Singh A.K., Singha J.S.,2001].3132Происходитувеличениепериферической крови,содержанияиндуцированиеСD95-позитивныхклетоквапоптоза у клеток-мишеней[Лепехин А.В., 2007]. Гибель инфицированных клеток возможно идет и попути некроза, когда апоптотические механизмы не могутограничить ниразмножения вируса, ни его распространения [Перепелкина О.В., МаркинаН.В.,Полетаева И.И.,Островская Р.У.,2006; Witter, R., Stenberg U., Hesse S.,Kondo T., Koch F.T., Ulrich A.,2006; Стовбун С.В., Лепехин А.В., РатниковЛ.И., Литвин А.А.

[и др.]2007]. Увеличение количества СD95-позитивныхклеток при терапии может рассматриваться как иммунный ответ на вирус.Даже однократное введение форветаприводит кувеличетнию уровнялейкоцитарного интерферона [ИНФ] в 2,7-3 раза в течение24 часов[Стовбун С.В., Колобухин Л.В., Носик Н.Н., Меркулова Л.Н., и др., 2009;Kolbukhina L.V.,. Nosik N.N, Merkulova L.N. et al.,2009]. Исследования вветеринарной клинике «МиВ» показаалиэффективность форвета прилечении кошек разного пола и породы в возрасте от 2,5 мес до 14 лет сгерпесвирусной инфекцией [Польшкова Е.В., 2012; Stovbun S.V., KiselevA.V., A.M.