Автореферат (Эффекты и механизмы ишемического прекондиционирования и посткондиционирования головного мозга), страница 3

Основные эффекты таких эндогенных цитопротективных воздействий, как ишемическоепрекондиционированиеипосткондиционирование,являютсяоднонаправленнымиуживотных, принадлежащих к разным систематическим группам; видовые различия касаютсялишь степени выраженности эффектов, но не их направленности.3. Различные популяции нейронов головного мозга демонстрируют неодинаковую степеньповышения устойчивости к ишемическому и реперфузионному повреждению под влияниемишемического прекондиционирования и посткондиционирования, причем в целом наиболеевыраженныйцитопротективныйпосткондиционированияэффектотмечаетсядляишемическогонейронов,прекондиционированияобладающихимаксимальнойчувствительностью к ишемии.4. Ишемическое посткондиционирование головного мозга оказывает не только локальныеэффекты, проявляющиеся изменениями фенотипа нейронов, но и системные эффекты,выражающиеся в изменении характера активации иммунной системы.5.

Одновременное применение экзогенной фармакологической нейропротекции в видеприменения цитиколина и способов эндогенной нейропротекции не приводит к взаимному10усилению эффекта этих воздействий, но и не ослабляет нейропротективную эффективностькаждого из них.Степень достоверности и апробация результатов работы. Достоверностьрезультатов проведенного исследования обусловлена достаточным объемом наблюдений на673 крысах Wistar и 417 песчанках монгольских. Кроме того, достоверность определяетсяиспользованием комплекса современных методов оценки, а также корректным применениемстатистических методов обработки данных.Материалы диссертационной работы были представлены и обсуждены на научныхсеминарах и заседаниях проблемной комиссии ФГБУ «Северо-Западный федеральныймедицинский исследовательский центр имени В.А.

Алмазова»; на II, III, IV, V, VI, VIIнаучно-практической конференции неврологов Северо-Западного федерального округа смеждународным участием (Сыктывкар, 2009, 2010, 2011, 2012, 2013, 2014 гг.); наВсероссийскойнаучно-практическойконференциисмеждународнымучастием«Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови иэндокринных органов» (Санкт-Петербург, 2010 г.); на Всероссийской научно-практическойконференции c международным участием "От фундаментальных исследований – кинновационным медицинским технологиям" (Санкт-Петербург, 2010 г.); на Всероссийскойнаучно-практической конференции c международным участием «Алмазовские чтения 2011»,посвященной 80-летию со дня рождения академика РАМН В.А. Алмазова (Санкт-Петербург,2011 г.); на Всероссийской научно-практической конференции «Сосудистые заболеваниянервной системы» (Санк-Петербург, 2011 г.); на III Всероссийской научно-практическойконференции с международным участием«Некоронарогенные заболевания сердца:диагностика, лечение, профилактика» (Санкт-Петербург, 2011 г.); на научно-практическойконференции «Кардионеврология 2011» (Самара, 2011 г.); на VII международном салонеизобретений и новых технологий «Новое время» (Севастополь, Украина, 2011 г.); на VIIIВсемирном конгрессе по инсульту (Brasilia, Brazil, 2012 г.); на Российском национальномконгрессе кардиологов «Интеграция знаний в кардиологии» (Москва, 2012 г.); наВсероссийскойнаучно-практическойконференциисмеждународнымучастием«Инновационные технологии в нейроэндокринологии, нейронауках и гематологии» (СанктПетербург, 2012 г.); на I Национальной конференции с международным участием «Отфундаментальной неврологической науки к клинике» (Москва, 2014 г.); на Всероссийскойконференции с международным участием «Нейрохимические механизмы формированияадаптивныхипатологическихсостояниймозга»(Санкт-Петербург,2014г.);наобъединенном XII конгрессе международной ассоциации морфологов и VII съездеВсероссийского научного медицинского общества анатомов, гистологов и эмбриологов(Тюмень, 2014 г.); на Всероссийском учебно-научном совещании на тему: «Учение о тканях.Гистогенез и регенерация» (Санкт-Петербург, 2015 г.); на III Международной конференции«Heart & Brain» (Paris, France, 2016 г.).11Представленные в диссертации результаты связаны с научно-исследовательскимиработами по гранту Президента России по государственной поддержке ведущих научныхшкол в 2012-2013 гг.

(НШ-2359.2012.7) и в 2013-2014 гг. (НШ-1611.2014.7); гранта РФФИ в2013-2014 гг. (№ НК 13-04-00793/13); гранта Санкт-Петербурга в сфере научной и научнотехнической деятельности в 2012 г. и в 2014 г.Научные результаты, представленные в работе, были отмечены Дипломом за лучшийинновационный проект (рук. Щербак Н.С.) в сфере науки и высшего профессиональногообразования Санкт-Петербурга в 2011 г.

и в 2014 г. в номинации «Лучшая научноинновационная идея».Внедрение результатов исследования в практику. Результаты исследованиявнедрены в научно-исследовательскую работу Института экспериментальной медицины(директор – член-корр. РАН, д.м.н., профессор РАН Галагудза М.М.) ФГБУ «СЗФМИЦ им.В.А. Алмазова» Минздрава России.Публикации. По материалам диссертации опубликовано 45 печатных работ, из них19 статей в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, 1патент на изобретение и 1 патент на полезную модель.Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 310 страницах и состоитиз введения, шести глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, спискалитературы, включающего 49 отечественных и 319 иностранных источников.

Диссертациясодержит 40 таблиц и 41 рисунок.Личный вклад автора в проведенное исследование. Автором лично предложенаосновная идея исследования, определены цель и задачи. Все результаты экспериментальногоисследования, составившие основное содержание работы, получены автором лично или приего непосредственном участии.

Анализ результатов, статистическая обработка, подготовкапубликаций по материалам проведенных исследований были выполнены автором лично.СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериалы и методы исследования. Все эксперименты были проведены всоответствии с рекомендациями этического комитета ФГБУ «СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова»Минздрава России, а также в соответствии с требованиями Постановления Главногогосударственного санитарного врача РФ от 29.08.2014 № 51.Исследование выполнено на самцах крыс Wistar и на самцах песчанок монгольских(Meriones unguiculatus).Экспериментальные модели ишемического и реперфузионного поврежденияголовного мозгаМоделирование ишемии-реперфузии переднего мозга у монгольских песчанок.

Увсех млекопитающих кровоснабжение головного мозга осуществляется посредством двухколлатеральныхсистем:виллизиевакруга(большийобъемкровоснабжения)и12лептоменингеальных анастомозов. Животные, имеющие видовую принадлежность кMeriones unguiculatus, имеют особенность – незамкнутый виллизиев круг, поэтому приокклюзии общих сонных артерий (ОСА) кровоснабжение переднего мозга прекращается иразвивается острая ишемия. Глобальную ишемию переднего мозга моделировали обратимойдвусторонней окклюзией ОСА путем наложения микрохирургических зажимов на артерии.Моделирование фокальной ишемии головного мозга у крыс осуществляли путемпостоянной окклюзии левой средней мозговой артерии (СМА) в сочетании с 30-минутнойокклюзией левой общей сонной артерии (ЛОСА) (Самойленкова Н.С.

с соавт., 2008; ChenS.T. et al., 1986; Fau S. et al., 2007). После иссечения твердой мозговой оболочкивизуализировали топографию СМА. У крыс выделяют три анатомических варианта строениякорковой ветви СМА: магистральный (мСМА), рассыпной (рСМА) и смешанный (сСМА)(Herz R.C. et al., 1996). После определения анатомического варианта строения СМАпроводили необратимую коагуляцию корковой ветви левой СМА и одномоментноосуществляли одностороннюю обратимую окклюзию ЛОСА в течение 30 минут.Моделирование хронической церебральной гипоперфузии у крыс осуществлялипутем постоянной двусторонней окклюзии ОСА. Последовательность фаз ишемическогоповреждения головного мозга, индуцированного постоянной окклюзией ОСА: острая фаза,хроническая фаза, фаза восстановления нормального кровотока (Farkas E.

et al., 2007).Методикавоспроизведенияишемическогопрекондиционированияипосткондиционирования головного мозга. Продолжительность окклюзии, количествоишемических стимулов и интервалов между ними соответствовали разработанномупротоколу для каждого эксперимента. Короткие ишемические воздействия осуществлялиналожением на сосуды микрохирургических зажимов или поднятием артерий на лигатурах.Методика определения размера экспериментального инфаркта головного мозга.Фронтальные сегменты мозга толщиной 3 мм инкубировали при температуре 37°С в 2%растворе 2,3,5 - трифенилтетразолия хлорида (ТТХ) (Sigma, США) (Chen S.T.

et al., 1986).ТТХ окрашивает жизнеспособную ткань с сохраненной активностью НАД–зависимыхферментов в ярко–красный (кирпичный) цвет за счет образования микрогранул формазана,тогда как зона некроза сохраняет нативный бледно-розовый цвет. Размер инфарктарассчитывали планиметрически по площади ТТХ-негативных зон при помощи программыImageJ (ImageJ, NIH, США). Оценивали процентное отношение суммы площадей ТТХнегативных зон к сумме общей площади коры левого полушария мозга (Самойленкова Н.С.