Автореферат (Молекулярно-генетические аспекты развития гестоза у женщин северо-западного региона Hоссии), страница 7

Это согласуется с данными литературы об ассоциации аллели T сметаболическим синдромом у детей [Juárez-Meavepeña et al., 2012].Также rs5888 SCARB1 (1050C>T) вместе с rs328 гена LPL (1595С>G) показали ассоциацию суровнем антитромбина III крови. У пациенток, гомозиготных и гетерозиготных по аллели T,уровень антитромбина III был ниже (86,9±5,1% и 89,6±8,2%), чем у гомозигот CC по гену SCARB1(102,2±10,1%) (p=0,0076 и p=0,0903). Более низкий уровень антитромбина III отмечался и упациенток с генотипом CC (92,0±4,9%) и CG (77,7±9,4%) по сравнению с гомозиготами GG погену LPL (111,0±13,5%) (p=0,0649 и p=0,0022). Снижение концентрации антитромбина III можетспособствовать активации свертывающей системы крови [Демьяненко и др., 2013] и, какследствие, развитию гестоза.Для пациенток с гестозом, гомозиготных по аллели C rs2695121 гена NR1H2 (-103C>T), всравнении с гомозиготами TT и гетерозиготами TC отмечено снижение уровня альбумина(25,1±1,3 г/л против 28,1±2,1 г/л и 28,0±1,1 г/л) (р=0,0859 и р=0,0108).

Уменьшение концентрацииальбумина в крови влечет за собой появление отеков, может служить основой развития синдромаэндогенной интоксикации и свидетельствует о прогрессировании гестоза [Мороз и др., 2005;Gojnic et al., 2004; Сидорова, 2007].СОДЕРЖАНИЕ МИКРОРНК В ПЛАЦЕНТЕ ПРИ ГЕСТОЗЕ И В НОРМЕРезультаты секвенирования. В результате секвенирования кДНК-копий малых РНК былополучено 3744045 чтений (нуклеотидных последовательностей отсеквенированных фрагментовДНК), из них 1502484 чтений для образцов плацент пациенток с гестозом и 2241561 чтений дляобразцов плацент женщин группы сравнения.

Средняя длина чтений варьировала от 19 до 24нуклеотидов. Чтения, прошедшие фильтрацию по длине и качеству, составили 1502484 длягруппы с гестозом и 2241561 - для группы сравнения, соответственно. Среди них напоследовательности микроРНК были картированы 606821 и 805102 чтений для группы больных ивыборки женщин без осложнений беременности. Число картированных чтений было более 5 для466 и 522 выявленных микроРНК в образцах плаценты от женщин с гестозом и женщин безосложнений беременности. Наибольшее число чтений было картировано в областях генома,соответствующих генам микроРНК. Доля микроРНК среди всех секвенированныхпоследовательностей для образцов плацент женщин с гестозом составила 73,9%, для женщин безосложнений беременности - 71,0%.МикроРНК, содержание которых изменено в образцах плаценты при гестозе посравнению с нормой.

Подсчет чтений, картированных на гены микроРНК, позволил сравнитьобразцы плацент при гестозе и в норме по содержанию микроРНК. Выявлены 22 микроРНК,содержание которых статистически значимо различалось в образцах плацент от пациенток сгестозом и женщин без осложнений беременности с учетом поправки Бенжамини-Хохберга(pcor<0,05). Обнаружены 15 микроРНК, уровень которых повышен (miR-515-3p, miR-31, miR-210,miR-518a, miR-524, miR-518c, miR-520a, miR-515-5p, miR-516a-5p, miR-519e*, miR-193b, miR4532, miR-518f, miR-527 и miR-518e) и 7 микроРНК, уровень которых снижен в плацентах сгестозом (miR-135b, miR-195, miR-let-7f, miR-34c, miR-1, miR-98, miR-223) (рисунок 2).miR-223miR-1miR-98miR-34cmiR-518emiR-527miR-518fmiR-4532miR-193bmiR-519e*miR-516a-5pmiR-515-5pmiR-520amiR-518cmiR-524miR-518a-2miR-210-3p-1miR-310miR-515-3pLog 2 FC1let-7fmiR-135b2miR-1953-3Рисунок 2 - Кратность изменения уровней 22 микроРНК в образцах плаценты при гестозеотносительно образцов группы сравнения (pcor <0,05) [из статьи Vashukova et al., 2016]Примечание - Log2FC (FC - fold change) отражает кратность изменения содержания микроРНК вплацентах пациенток с гестозом по сравнению с нормой.18Изменение содержания 17-и микроРНК (miR-515-3p, miR-515-5p, miR-516a-5p, miR-518c,miR-518f, miR-519e*, miR-520a, miR-524 miR-210, miR-195, miR-223, miR-1, miR-34c, miR-193b,miR-let-7f, miR-98 и miR-31) ранее было зарегистрировано в работах других исследователей[Pineles et al., 2007; Zhu et al., 2009; Enquobahrie et al., 2011; Yang et al., 2011;Bai et al., 2012;Ishibashi et al., 2012; Wang et al., 2012; Choi et al., 2013; Luo et al., 2014; Weedon-Fekjær et al., 2014;Xu et al., 2014].Для 5-и микроРНК (miR-518a, miR-527, miR-518f, miR-135b и miR-4532) связь с гестозомобнаружена впервые.

МикроРНК miR-515-3p, miR-515-5p, miR-518a, miR-518e, miR-527, miR518c, miR-519e*, miR-524, miR-210, miR-223, miR-34c, miR-let-7f и miR-135b в работах другихавторов были выявлены в крови беременных [Gilad et al., 2008; Chim et al., 2008; Miura et al., 2010;Gunel et al., 2011; Yang et al., 2011; Zhang et al., 2012; Li et al., 2013; Xu et al., 2014], что позволяетрассматривать их в качестве потенциальных биомаркеров гестоза.ЗАКЛЮЧЕНИЕВ настоящем молекулярно-генетическом исследовании была изучена ассоциацияполиморфных сайтов 20 генов, относящихся к различным функциональным и метаболическимсистемам, с развитием гестоза у женщин, проживающих в Северо-Западном регионе России.

Врезультате анализа найдены варианты и сочетания изученных полиморфных сайтов, которыевносят вклад в общую предрасположенность к гестозу. При разделении группы пациенток взависимости от клинических вариантов течения гестоза выявлены маркеры повышенного рискаразвития тяжелых форм гестоза с подъемом АД≥160/110 мм.рт.ст. и раннего гестоза (до 34 неделибеременности). Определены варианты и сочетания изученных полиморфных сайтов,ассоциированные с развитием гестоза на фоне различных заболеваний. Согласно проведенномуROC-анализу, выявленные генетические маркеры риска раннего гестоза, гестоза на фонезаболеваний почек, гипертонической болезни, заболеваний щитовидной железы и сахарногодиабета могут быть использованы в клинической практике.

Получены сведения,свидетельствующие об ассоциации вариаций большинства из изученных генов с изменчивостьюнекоторых клинически значимых признаков у больных с гестозом.Помимо оценкироливариацийпоследовательностиДНКв формированиипредрасположенности к гестозу, нами было проведено исследование по изучению содержаниямикроРНК в плаценте при данном осложнении беременности с помощью технологииполногеномного секвенирования. В результате анализа получены сведения об изменениисодержания микроРНК в плаценте при гестозе у женщин Северо-Западного региона. Определены22 микроРНК, уровень которых отличается в образцах плаценты пациенток с гестозом от женщинбез осложнений беременности.Представленные результаты нуждаются в дальнейшей верификации.

Тем не менее, ужесегодня они представляют несомненный интерес для дальнейших исследований молекулярногенетических механизмов развития гестоза и разработки методов ранней диагностики ипрофилактики этого грозного осложнения беременности.ВЫВОДЫ1. Изученные варианты генов PAI1 и F7, а также сочетания вариантов генов PAI1, AGT, AGTR2 иADRB2 ассоциированы с риском гестоза у женщин Северо-Западного региона России.2.

Риск тяжелого гестоза повышен у гомозигот TT (rs1126643) по гену ITGA2, риск раннегогестоза - у гомозигот AA (rs4938303) по гену APOA1.3. Определенные варианты генов ITGA2, MTHFR, AGTR2, LPL, SCARB1 и NR1H2 относятся кфакторам риска гестоза на фоне различных заболеваний.4. Сочетание аллелей гена PAI1 с аллелями генов ITGA2, MTHFR и LPL усиливает риск гестозапри наличии фоновых заболеваний.5. Показана ассоциация между изученными вариантами генов FGB, ITGB3, REN, AGT, AGTR1,AGTR2, BKR2, ADRB2, NOS3, PAI1, NR1H2, SCARB1, LPL и клинико-лабораторнымипоказателями при гестозе.6.

Развитие гестоза сопровождается повышением содержания в плаценте 15-ти микроРНК иснижением 7-и микроРНК.19СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИПубликации в журналах, рекомендованных ВАК:1. Вашукова, Е. С. Современные подходы к диагностике наследственных форм тромбофилий / Е.С. Вашукова, А. С. Глотов, Т.

Э. Иващенко [и др.] // Российский педиатрический журнал. - 2008. №. 5. - С. 48-53.2. Бикмуллина, Д. Р. Профилактика интраоперационных коагулопатических кровотечений пригестозе / Д. Р. Бикмуллина, Е. С. Вашукова, М. С. Зайнулина // Журнал акушерства и женскихболезней. - 2009.

- Т. LVIII, вып. 4. - С. 3-8.3. Шабанова, Н. А. К вопросу о медикаментозной и хирургической профилактикетромбоэмболических осложнений при беременности / Н. А.Шабанова, М. С. Зайнулина, Н. А.Гордеев, Е. С. Вашукова // Журнал акушерства и женских болезней. - 2010. - Т. LIX, вып. 3. - С. 312.4. Вашукова, Е. С. Наследственная тромбофилия и риск развития гестоза у беременных женщинРоссии / Е. С. Вашукова, А. С.

Глотов, Д. Р. Бикмуллина [и др.] // Медицинская генетика. - 2011. Т. 9, № 11. - С. 39-45.5. Вашукова, Е. С. Исследование полиморфизма генов системы свертывания крови ифибринолиза у условно здоровых беременных России и Украины / Е. С. Вашукова, А. С. Глотов,М. Д. Канаева [и др.] // Экологическая генетика. - 2011.

- Т. 9, № 1. - С. 70-80.6. Глотов, А. С. Исследование ассоциации полиморфизма генов APOE, LPL и NOS3 с рискомсосудистой патологии у детей и беременных женщин / А. С. Глотов, Е. С. Вашукова, М. Д.Канаева [и др.] // Экологическая генетика. - 2011. - Т. 9, № 4. - С. 25-34.7. Марочкина, Е. Ю. Методы диагностики полиморфизма генов метаболизма липидов человека /Е. Ю. Марочкина, Е. С.