Диссертация (Изучение травы Inula Viscosa (L.) с целью создания экстракта и геля для местного и наружного применения), страница 11

Также, сравнительное изучение двух возможных видов сырьяпозволило провести оптимизацию таких значимых факторов для технологиикак степень дисперсностичастицсырья,концентрацияэкстрагента,соотношение сырьё-экстрагент и время экстракции.3.2. Морфология, макро- и микроскопические признаки травы I.viscosaИсследование морфологических признаков травы I.viscosa проводили наосновании анализа цельной и измельченной травы.Внешние признаки цельного сырья (рис. 3.3) сводятся к описаниюследующих морфологических признаков травы I.viscosa, пригодных длядиагностики: смесь цельных или кусков облиственных верхушек побегов,отдельных листьев.

Цилиндрические стебли примерно 30 см длиной, до 3 ммв диаметре, на ощупь липкие. Листья с коротким черешком или сидячие, (рис.3.4) в очертании листовая пластинка продолговато-ланцетной формы, наверхушке слегка заостренные либо округлые, мелкозубчатые по краям, 30-7066мм длиной и 20-30 мм шириной. На пластинке с обеих сторон под лупой виднымногочисленные железистые и крупные простые волоски. Цвет листьев собеих сторон темно-зеленый, стеблей серовато-зеленый. Запах сильный,специфический.Рисунок 3.3.

Трава I.viscosa облиственные стебли,собранные до цветенияРисунок 3.4. Листья I.viscosa досушки.Левый ряд - адаксиальная сторона,правый ряд– абаксиальная стороналистовой пластинкиИзмельченная трава I.viscosa представляет собой сыпучую смесь серозеленого цвета с беловатыми включениями содержащую фрагменты белесыхкусочков стеблей и листовых пластинок, проходящих сквозь сито сотверстиями размером 3,0 мм,Микроскопические признаки травы I.viscosaЛистья. Эпидерма листьев с многочисленными устьицами аномоцитноготипа, состоит из тонкостенных полигональных клеток (рис.

3.5, 3,6). Устьицарасполагаются как на абаксиальной, так и на адаксиальной поверхностяхлистовой пластинки. На эпидерме нижней стороны листьев устьиц больше. На67верхней и на нижней сторонах листьев присутствуют многочисленныетрихомы 3-х типов:1) мелкие железистые трихомы, состоящие из короткой ножки имногоклеточной головки. Головка состоит из 8-10 клеток, апикальная частьголовки состоит как правило из 2-х клеток с коричневатым содержимым. (рис.3.5, 3.6, 3.8)2) Крупные железистые волоски, состоящие из массивной двурядной(иногда однорядной) толстостенной ножки и многоклеточной (6-10 клеток)головки.

Клетки головки, как правило, расположены в 2 ряда и достаточноплоские. Ножка волоска часто покрыта кутикулярными складками. Вапикальных клетках головки часто видны коричневатые включения (рис.3.5,3.6, 3.7).3) Крупные волоски из толстостенных клеток покрыты складчатойкутикулой. В основании 2-4 крупных клетки, сужающиеся по высоте. Всредней части 1-3 толстостенные, чуть спавшиеся, сильно вытянутые клетки.Скругленная апикальная часть (рис. 3.9, 3.10). Плотность железистыхволосков, в среднем, составляет 11 волосков/мм на адаксиальной поверхностии 14 волосков/мм на абаксиальной поверхности листа.Рисунок 3.5. Фрагмент эпидермы нижнейстороны листа.

1.Головчатый волосок наодноклеточной ножке;2.Головчатый железистый волосок смногорядным основаниемРисунок 3.6. Фрагмент эпидермы верхнейстороны листа.1.Головчатый железистый волосок смногорядным основанием;2.Головчатый волосок на одноклеточнойножке;3.Устьица68Рисунок 3.7 Головчатый железистыйволосок с двурядной ножкой имногоклеточной головкойРисунок 3.8.

Головчатый волосок наодноклеточной ножке (профиль)Рисунок 3.9. Головчатый волосок надвухклеточной ножке и многоклеточныйволосок с удлинёнными апикальнымиклетками и расширенным основаниемРисунок 3.10. Простые многоклеточныеволоски с бочонковидными клетками восновании и с удлиненными апикальнымиклеткамиСтебель. Эпидерма стебля состоит из полигональных клеток счетковидными утолщениями стенок и с редкими устьицами (рис. 3.11). Наэпидерме встречаются трихомы тех же типов, которые расположены налистьях.

В том числе, головчатые железистые волоски с многоклеточнойдвурядной ножкой многоклеточной головкой (рис. 3.14). Гиподермальныйслой стебля состоит из цилиндра механической ткани - пластинчатойколленхимы, клетки которой изображены на рисунке 3.12.На рисунках 3.12 и на 3.15 приведены микрофотографии поперечногосреза стебля. На рисунке 3.16 показан срез после проведения гистохимическойреакции на лигнифицированные ткани.69Рисунок 3.11.

Фрагмент эпидермы стебляиз полигональных клеток с четковиднымиутолщениям с устьицемРисунок 3.12. Фрагмент поперечногосреза стебля диаметром 3 мм1 – Паренхима сердцевины;2 – Сосуды древесины3 – Паренхима коры;4 – Склеренхима -пучки лубяныхволокон;5 – Железистые волоскиРисунок 3.13. Фрагмент колленхимы стебляРисунок 3.15. Фрагмент поперечного срезастебля с лучами ксилемРисунок 3.14. Головчатый железистыйволосок с многоклеточной двуряднойножкой и многоклеточной головкой наэпидерме стебляРисунок 3.16.

Фрагмент поперечногосреза стебля после реакции на наличиелигнифицированных тканей70На поперечных срезах стебля видно непучковое строение, небольшая поплощади сердцевина, значительное место в стебле занимает мощная ксилема.Диагностическоезначениеимеютпучкисклеренхимныхволокон,расположенных кольцом в коровой части. На поперечном срезе видно, чтоповерхность стебля покрыта многочисленными волосками.3.3. Качественные реакцииДля выбора наиболее достоверных качественных реакций с цельюустановления подлинности травы I.viscosa были приготовлены нескольковариантов извлечений из сырья – с помощью воды (водное извлечение) иразных концентраций водно-спиртовых смесей. С полученными извлечениямипроводили качественные реакции для подтверждения данных литературы осодержании целевых групп БАС в исследуемом сырье (флавоноидов,дубильных веществ, сапонинов и алкалоидов).

Результаты таких испытанийпредставлены в таблицах 3.6 и 3.7.Таблица 3.6 – Результаты определения групп БАС с помощью качественныхреакций в различных извлечениях из сырья I.viscosaВид реакцииЦианидиновая проба поБриантуС раствором хлоридажелеза (III)С спиртовым растворомщелочи 10%С раствором белкаС железоаммониевымиквасцамиПенообразованиеХимическаягруппасапонинов (пробирки срастворамиHClиNaOH)РезультатЭкстрагентреакцииВода 40%спирт 70%спирт 90%спиртФлавоноидыРазделение на 2++++++++++фазы.

Водныйслой – болееинтенсивноеПреобладание гликозидов над агликонамиокрашиваниеЧерно-зеленое++++++окрашиваниеЖелтое++++++++окрашиваниеДубильные веществаПроявление мути ++++++++Черно-зеленое++++++++окрашиваниеСапониныОбразованиеобильной и+++++++++++устойчивой пеныОбразованиепеныСтойкая пена в обеих пробиркахТритерпеновые сапонины71Примечание: Количество «+» свидетельствует об интенсивностиокрашивания, осадка и величине столбца пены.Качественные реакции на наличие в сырье I.viscosa алкалоидовпроводилисьспомощьюобщеалкалоидныхреактивов.Полученныерезультаты этой работы представлены в таблице 3.7.Таблица 3.7 – Результаты определения наличия алкалоидов в различныхизвлечениях из сырья I.viscosaЭкстрагентВагнераБушардаБурыйцветВодаЭтанол 40%Этанол 70%Этанол 90%++++++++++Название общеалкалоидного реактива / результатОсадочные реактивыЦветные реактивыH2SO4НатрияШейбДрагенРастворконцнитролерадорфатанинапруссидЖелтова ОранжевоФиолетовоеКрасноватоБелыйтыйбурыйпри-коричнеосадокосадокосадокнагреваниивый осадок+++++++++++++++++++++++++++++++Примечание: Количество «+» свидетельствует об интенсивностиокрашивания или осадка.Таким образом, на основании результатов проведенных качественныхреакций установлено, что в сырье I.viscosa присутствуют фенольные вещества,флавоноиды, сапонины, дубильные вещества и алкалоиды.3.4.

Изучение БАС целевого фрагмента метаболома травы I.viscosaДля детальной характеристики некоторых групп БАС, содержащихся втраве I.viscosa, был проведен комплекс исследований, включающих:определение спектральных и хроматографических параметров, изучениефитохимического состава методом УВЭЖХ/МС, определение состава летучихкомпонентов методом ГЖХ/МС.3.4.1 Установление подлинности сырья I.viscosa методами УФспектрофотометрии и ТСХВУФ-спектреизвлечения(70%спиртизЛРСI.viscosa)зарегистрировано два максимума поглощения при длинах волн 298 и 329 нм(рис.3.17). Это обстоятельство позволяет предположить присутствие в сырье72фенольных соединений, в частности фенолкарбоновых кислот и флавоноидов.Полученныйспектрпоглощенияможетслужитьдополнительнойкачественной характеристикой для установления подлинности ЛРС I.viscosa.Рисунок 3.17. УФ-спектр извлечения из сырья I.viscosaC помощью ТСХ проведено изучение состава БАС целевого фрагментаметаболома в сырье I.viscosa в системе н-бутанол-ЛУК-вода (4:1:1).

Зоныадсорбции веществ детектировали в УФ при 365 нм до и после обработкихроматограмм последовательно растворами дифенилборилоксиэтиламина (1%в метаноле) и ПЭО-400 (5% в метаноле).На хроматограмму наносили испытуемое извлечение из ЛРС, при этомв качестве стандартов использовали таковые растворы СО: кофейной кислоты,рутина, галловой и хлорогеновой кислот в этаноле, на рисунке 3.2. приведенырезультаты ТСХ.Растворы стандартов, на хроматограмме, проявляются в виде зон с Rfоколо 0,58 для рутина, с Rf около 0,76 галловой кислоты; с Rf около 0,51хлорогеновой кислоты и с Rf около 0,75 кофейной кислоты.На хроматограмме испытуемого извлечения видны несколько зонголубого цвета (фенолкарбоновые кислоты), самые интенсивные из которых73имеют Rf около 0,51 и 0,75, что идентично хлорогеновой и кофейной кислотамсоответственно.

Зоны коричневатого свечения, сливающиеся с зонамиголубого цвета, одна из которых соответствует стандарту рутина, другаяблизка к зоне стандарта галловой кислоты. Зона красного цвета, хлорофилл,видна ближе к фронту подвижной фазы (рис.3.18).линия фронталиния фронталиния фронталиния старталиния старталиния стартаАБВГпри длине волны 365 нмАБ В Гв дневном светеАБВГпри длине волны 365 нмдо обработки растворамипосле обработки растворамидифенилборилоксиэтиламина и полиэтиленгликоля 400А) извлечение из сырья;Б) раствор СО галловой кислоты и СО рутина;В) раствор СО хлорогеновой кислоты;Г) раствор СО кофейной кислоты.Рисунок 3.18.