Диссертация (Изучение травы Inula Viscosa (L.) с целью создания экстракта и геля для местного и наружного применения), страница 10

На третий деньэксперимента, животным в апоневроз вводили 0,05 мл 1% формалина, и послеэтого еще раз испытуемый образец.Исследованиепротивовоспалительнойактивности«Жэтривис» ипрепарата сравнения проведено в дозах 10 мг/кг и 100 мг/кг, в четырех группахживотных по 10 особей. I группа (контроль) получала воду, II группа –«Жэтривис» доза 10 мг/кг, III – «Жэтривис» доза 100мг/кг, IV – «Ротокан» доза1000мг/кг - препарат сравнения. На пике развития воспаления, через три часа,Рк – Ро% угнетения отёка = --------Где:Рк – разность масс лапок с отёком и без отёкав контроле;-Рк хРо - разность масс лапок с отёком и без отёка, уживотных, получавших препараты.100животныхподвергали эвтаназии с помощью углекислого газа.

У мышей ампутироваликонечности и фиксировали массу (мг) здоровых и с развившимся отеком, затемрассчитывали прирост объёма экссудата. О развитии отёка судили по разницев массе лапок у контрольных и опытных животных и рассчиталипротивоэкссудативный эффект по формуле:2.2.5.4.2 Методика оценки репаративной активности «Жэтривис-гель»Оценка репаративной активности «Жэтривис-гель» проведена на моделитермическогоожога,вкачествепрепаратасравненияиспользовалиаппликационную форму в виде геля, содержащего 10% препарата «Ротокан».В опыте использовали 40 нелинейных белых мышей (самцы 20-24 г),разделенных на 4 группы по 10 животных.

Первая группа контроль - ожог безлечения, вторая – «Жэтривис-гель», третья - препарат сравнения, четвёртая образец основы (плацебо).57Термическийожогу животных вызывалинадепилированнойповерхности кожи с помощью специальной установки, аппликаторомнагретым, до 105 °C в течение 7 секунд [40,129]. Сразу же начинали лечение,апплицируянапораженнуюповерхность«Жэтривис-гель»,препаратсравнения и плацебо. Лечение осуществляли 1 раз в сутки в течение 21 дня[160]. Состояние раны оценивали визуально. С использованием компьютернойпрограммы Paint (Windows 7.0) измеряли площадь ожогового поражения в см2,сравнивали количество пикселей на ожоговой поверхности и контрольномквадрате площадью 1 см2.2.2.6 Статистическая обработкаСтатистическая обработка проводилась согласно ОФС.1.1.0013.15.

, атакжеосновываясьнамонографии«Математическаястатистикавэкспериментальной и клинической фармакологии» [48]. Обработку данныхосуществляли с помощью программы Microsoft Excel 2016 и ПО Statistica 10.0(Stat Soft, США). Достоверность различий между группами оценивали покритерию Манна – Уитни.58Заключение по главе 2Вспомогательные вещества и стандартные образцы БАС, представленыпродуктами, разрешенными в России для использования, в составефармацевтических продуктов.Для установления подлинности, определения показателей качества итехнологическиххарактеристиксырья,атакжедлястандартизациилекарственных форм, использованы современные методы, описанные вгосударственной фармакопее.С целью получения жидкого экстракта использовались классическиеметоды: дробная мацерация (ремацерация), дробная мацерация по типупротивотока и перколяция.

Также была разработана модифицированнаяметодика, основанная на классических методах экстрагирования, котораябудет описана в Главе 4.Изучение биологической активности проводилось с использованиемкомплекса методов in silico, in vitro и in vivo, обеспечивающих всестороннееизучение свойств объектов.Дизайн исследованияЭкспериментальные исследованияТеоретические исследованияИзучение сырья и разработка препаратовБотаническаяхарактеристикаInula viscosa L.Состав БАСInula viscosa L. иих биологическаяактивностьЛП на основе БАСрастительногопроисхожденияФармакогностическоеизучение Inula viscosa L.Морфологоанатомические признакиЧисловые показателиИзучение ЦНФМInula viscosa L.СтандартизацияСтандартизацияЛРСМетодики качественного иколичественного определенияПроект инструкциипо сбору и сушкетравы Inula viscosa L.Проект НД Inulaeviscosae herbaIn silico обоснование разработки ЛП на основе БАС Inula viscosa L.Жидкий экстракт изтравы Inula viscosa L.in vitro и in vivoобоснованиеразработки геляс экстрактомРазработкаметодики полученияСтандартизация,изучение стабильности ибиологических свойствПроект НД«ЭкстрактЖэтривис»Противовоспалительная активность с помощью СФБТСАнтимикробная активностьПротивовоспалительное действие на модели острой фазыГель с жидким экстрактомInula viscosa L.Разработка составаи технологииСтандартизация, изучениестабильности и биологическихсвойств геляin vitro фармацевтическая доступность БАС; in vivo репаративное действиеПроектНД«Жэтривис гель»ГЛАВА 3.

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТРАВЫINULA VISCOSAВысушенные листья I.viscosa населением в Сирии используются вкачестве средства народной медицины для получения водных извлечений,которые применяют для местного лечения ран. Учитывая, выявленные поданным научной литературы сведения о богатом составе БАС целевогофрагмента метаболома I.viscosa и их высокой биологической активности,наиболее целесообразным признана разработка жидкого экстракта дляполученияпромышленнойстандартизованнойлекарственнойформыпрепарата для местного применения. В качестве исходного ЛРС I.viscosa приполучении жидкого экстракта было предложено использование всегооблиственного побега растения – травы, как вида сырья с менее трудоемкойстадией при промышленной заготовке ЛРС.3.1 Обоснование выбора вида сырья I.viscosaРезультаты анализа данных народной медицины Ближнего Востока,оценка возможных химиотерапевтических и фармакологических активностейБАС, содержащихся в метаболоме растения, проведенные собственныефитохимические исследования сырья, показали перспективы использования вмедицинских целях травы I.viscosa (рис.3.1).

Использование этого сырья дляразработки технологии получения жидкого экстракта из него явилосьоснованием для разработки методик установления подлинности и показателейкачества высушенной травы растения. Создание макета проекта нормативногодокумента на траву I.viscosa проводилось согласно требованиям ГФ РФ ХIIIизд. к лекарственному растительному сырью аналогичной морфологическойгруппы.61Рисунок 3.1. Заросль I.viscosaКак правило, при получении морфологической группы ЛРС «Herba»облиственные побеги травянистых растений заготавливают в фазу цветения.Однако нами были рассмотрены перспективы использования двух вариантовзаготовки травы I.viscosa.Для обоснования выбора сырья I.viscosa проведено сравнение по составубиомассы высушенного сырья, по содержанию экстрактивных и действующихвеществСтебли 42%А.

Трава, собранная до началапериода цветенияЛистья26%Б. Трава, собранная посленачала периода цветенияРисунок 3.2. Фракционный состав двух возможных видов сырья,представленных травой I.viscosa62На рисунке 3.2 представлены диаграммы фракционный состав двухвозможных видов сырья I.viscosa: травы, собранной до цветения, и травыдевясила, собранной в фазу цветения растения. В народной медицине Сириииспользуются листья этого растения.

Фракция листьев в траве, собранной доцветения, составляет около 60%. В траве, собранной в фазу цветения, этойчасти растения содержится в 2 раза меньше.3.1.1. Оценка содержания экстрактивных веществ в траве I.viscosaВ качестве экстрагентов использовали воду и водно-спиртовые смеси сизвестной концентрацией спирта. При этом была проведена работа с другимтипом сырья девясила травой, собранной во время цветения, в сравнительномаспекте.Результатывыявлениянаиболееоптимальногоэкстрагентапредставлены в таблице 3.1.Таблица 3.1 – Содержание экстрактивных веществ, извлекаемых различнымирастворителями, в образцах травы I.viscosaЭкстрагентВода очищенная40%Спирт70%Спирт90%СпиртСодержание экстрактивных веществв двух видах сырья I.viscosa, %Трава, собранная в фазуТрава, собранная до цветенияцветения31,22 ± 1,2231,12 ± 0,7131,27 ± 0,5632,20 ± 0,4727,28 ± 0,5332,10 ± 0,3423,61 ± 0,4226,52 ± 0,87Из представленных в таблице 3.1.

данных видно, что при проведенииэкстракции водой и 40% спиртом наблюдается максимальное извлечениеэкстрактивных веществ, что связано с интенсивным переходом полярныхвеществ. При экстракции сырья водно-этанольными смесями с высокойконцентрацией спирта наряду с частью гидрофильных соединений переходяти менее полярные представители метаболома растения, что по даннымлитературы, позволяет предположить в них действующие вещества [41].633.1.2 Изучение содержания целевых БАС в сырье I.viscosaКак известно, фенольные соединения являются наиболее значимойгруппой БАС, которая отвечает за антиоксидантное действие препаратов излекарственногорастительногофлавоноиды являютсясырья.Средиответственными зафенольныхпроявлениесоединенийбиологическихэффектов, описанных в научной литературе.

Для экспресс-определениядействующих веществ определяли содержание фенольных соединений впересчете на хлорогеновую кислоту методом УФ-СФМ (табл.3.2).Таблица 3.2 - Влияние концентрации спирта на выход фенольных веществ издвух видов сырья I.viscosaКонцентрация Содержание фенольных веществ в пересчете на хлорогеновую кислотуспирта, %Трава, собранная в фазу цветенияТрава, собранная до цветения3,022 ± 0,013,322 ± 0,013,345 ± 0,023,351 ± 0,013,350 ± 0,0153,316 ± 0,014050607080907,584 ± 0,027,592 ± 0,017,589 ± 0,027,604 ± 0,027,350 ± 0,017,352 ± 0,02Из данных представленных в таблице 3.2. видно, что содержаниефенольных в траве, собранной до цветения выше практически в два раза, а приэтом их максимальное содержание наблюдается при экстрагировании 70%спиртом.Таблица 3.3 - Влияние соотношения сырьё: экстрагент на извлечениефенольных веществ из ЛРС I.viscosaСоотношениесырье:экстрагентспирт 70 %Содержание фенольных веществ в пересчете нахлорогеновую кислотуТрава, собранная в фазуТрава, собранная доцветенияцветения1:52,083±0,015,652±0,011:101:201:301:501:1001:1503,309±0,013,322±0,013,329±0,013,352±0,013,351±0,013,352±0,017,513±0,017,523±0,017,585±0,017,604±0,027,602±0,027,602±0,0264Согласно данным, представленнымв таблице 3.3.

содержаниефенольных соединений также выше в два раза, в траве, собранной до цветения,и выявляется как максимально возможное при соотношении сырье:экстрагентот 1:10. При увеличении соотношения, выход их, для технологии полученияпрепаратов практически не значим.При изучении влияния измельченности сырья I.viscosa использоваличастицы сырья, проходящие через сито с отверстиями размером 0,2; 0,5; 1; 2 и3 мм.Таблица 3.4 - Влияние степени измельчения сырья на извлечение фенольныхвеществИзмельченность,мм0,20,5123Содержание фенольных веществ в пересчете на хлорогеновуюкислоту, %Трава, в фазу цветенияТрава, до цветения3,351±0,013,350±0,013,351±0,023,349±0,023,342±0,027,603±0,017,604±0,027,598±0,017,600±0,027,555±0,01Данные, из таблицы 3.4 по выходу фенольных соединений взависимости от измельченности растительного сырья, показали соответствиезначений, полученным для двух видов сырья в предыдущих экспериментах.Установлено, что дисперсность в диапазоне 0,2-3 мм мало влияет наизвлечение фенольных веществ из ЛРС.Таблица 3.5 - Влияние времени экстракции на извлечение фенольныхвеществ из сырья I.viscosaВремя экстракции,мин1530456075Содержание фенольных веществ в пересчете на хлорогеновуюкислоту, %Трава, собранная в фазуТрава, собранная до цветенияцветения3,118±0,013,244±0,013,349±0,013,351±0,013,351±0,027,348±0,027,409±0,017,598±0,027,603±0,017,602±0,0165Из результатов, представленных в таблицах 3.2 - 3.5, следует, чтосодержание фенольных веществ в траве I.viscosa, собранной до цветения,превышает тот же показатель для травы, собранной в фазу цветения, более чемв 2 раза.

Так как фенольные соединения являются одной из целевых группБАС, подтверждена целесообразность выбора в качестве сырья и объекта длядальнейших исследований трава I.viscosa, собранная до цветения.Таким образом, оптимальными условиями экстракции фенольныхсоединений из ЛРС I.viscosa являются: соотношение сырья и экстрагента 1:10,экстрагент - 70 % этанол, степень измельчения 0,2-3,0 мм, время экстракции –60 мин.Полученныеданныенеобходимы дляразработки методикколичественного определения БАС в ЛРС.Такимобразом,наоснованииизучениясоставабиомассы,экстрактивных веществ, извлекаемых водой и 70% спиртом оба вида сырьясопоставимы, но показатель содержания фенольных соединений около 7% втраве, собранной до цветения, подтверждает целесообразность выбора ее вкачестве ЛРС.