Диссертация (Фармакогностическое изучение комплексных лекарственных растительных средств), страница 11

Однако более качественныемикропрепараты были получены согласно методике, разработанной и апробированной нами впредыдущих исследованиях [24]:Около 0,1 г порошка помещали в химический стакан на 50 мл, приливали 5-10 мл 1 или2,5 %-ного раствора NaOH и кипятили в течение 30-60 секунд, после чего порошок дробнопромывали 100-150 мл дистиллированной воды методом декантации при условии практическиполного осаждения частиц сырья. Последний раз воду осторожно сливали, лопаточкой илискальпелем порошок переносили в каплю включающей жидкости (раствор глицерина (1:1) илираствор хлоралгидрата), накрывали покровным стеклом, слегка надавливали на него обратнойстороной препаравальной иглы для равномерного распределения жидкости под стеклом ирассматривали под микроскопом.Микроперапараты порошка бадяги готовили по следующей методике: несколькокусочков сырья (размером 3-5 мм) или около 0,1 г порошка помещают в химический стакан на50 мл, приливают 10 мл 2,5 % раствора NaOH и кипятят в течение 1 минуты.

Затем 3-4 разапромывают дистиллированной водой методом декантации до исчезновения окраски жидкости(при промывании порошка необходимо добиваться его полного осаждения). Кусочекпросветленного сырья или порошка помещают в каплю включающей жидкости (глицерин-вода(1:1) или раствор хлоралгидрата), накрывают покровным стеклом, слегка надавливают на него51обратной стороной препаравальной иглы и исследуют под микроскопом.Для приготовления микропрепаратов порошка грудного щита сепии использоваласьфармакопейная методика ОФС ГФ XI "Техника микроскопического и микрохимическогоисследования лекарственного растительного сырья" для порошков [169]. Однако болеекачественныемикропрепаратыбылиполученысогласнометодике,разработаннойиапробированной нами в предыдущих исследованиях [24]:Около 0,1 г порошка помещали в химический стакан на 50 мл, приливали 5-10 мл 1 или2,5 %-ного раствора NaOH и кипятили в течение 30-60 секунд, после чего порошок дробнопромывали 100-150 мл дистиллированной воды методом декантации при условии практическиполного осаждения частиц сырья.

Последний раз воду осторожно сливали, лопаточкой илискальпелем порошок переносили в каплю включающей жидкости (раствор глицерина (1:1) илираствор хлоралгидрата), накрывали покровным стеклом, слегка надавливали на него обратнойстороной препаравальной иглы для равномерного распределения жидкости под стеклом ирассматривали под микроскопом.Проводились гистохимические и микрохимические реакции на запасные полисахариды(слизь, крахмал, инулин, целлюлозу, гликоген), одревесневшие (лигнифицированные) элементы,липофильные вещества (эфирное и жироное масло), дубильные вещества (гидролизуемые иконденсированные).Использовали следующие реактивы: глицерин (чда, ГОСТ 6259-75), раствор Люголяспециальный, для гистологических работ, кислота хлористоводородная (ГОСТ 14261-77),натрия гидроксид гранулированный (хч, ГОСТ 4328-77 изм.

1,2), флороглюцин (CAS № 108-736, ТУ 6-09-3741-79), Судан III 0,3% раствор (чда, ТУ 609323478),-нафтола спиртовой раствор20%, серная кислота концентрированная, серной кислоты раствор 25%, хлоралгидрата раствор.Характеристика биометрических параметров оценивалась по абсолютной величинепризнаков и частоте их встречаемости на единицу площади. Измерения проводились спомощью окуляр-микрометра.Статистическую достоверность влияния размера частиц ЛРС на его диагностичностьоценивали методом дисперсионного анализа для однофакторных комплексов.Микроскопические исследования проводились на микроскопах: БИОЛАМ-С11, МБИ-6(окуляры х7, х15, объективы х8, х40), «ЛОМО МИКМЕД – 1» (окуляр 7х и объективы: 3,7х, 10х,20х, 40х), «МИКМЕД – 6» (окуляр 10х и объективы: 4х, 10х, 40х, 100х); фотосъемка – сиспользованием пленочной фотонасадки (фотопленки "Тасма", "Свема" (ФН-32, ФН-64,"Микрат-орто"), Kodak Gold 100) и цифровой фотокамеры Canon Digital IXUS 80 IS; обработкаснимков проводилась с использованием программы Microsoft Office Picture Manager.52Глава 3.

Изучение микроскопических маркеров природного сырья отечественнойи зарубежной медициныВключениевсоставкомплексныхлекарственныхпроисхождения предполагает наличие достоверныхсредствсырьяприродногоспособов оценки подлинности ипостоянства состава подобных препаратов. Доступным и надежным методом стандартизациирастительного сырья и препаратов на его основе является микроскопический анализ. Онпозволяет дифференцировать сырье от растительных экстрактов, смол, компонентов иногопроисхождения (животного, минерального); а также доказать наличие тех или иныхморфологический групп сырья, и при наличии высоко специфичных диагностическихпризнаков – биологических маркеров - подтвердить присутствие в препарате отдельныхкомпонентов.Использование в медицине сырья природного происхождения не ограничивается толькорастительными объектами.

И в европейской, а особенно в восточной медицине находятприменение грибы и животные организмы. Характеристики подлинности подобного сырья,безусловно, должны присутствовать в нормативной документации, несмотря на определенныеособенности и трудности проведения микроскопического анализа. Микроскопическаяидентификация сырья животного и грибного происхождения многократно возрастает в случаевключения его в многокомпонентные лекарственные средства.В настоящее время микроскопическая идентификация актуальна и для идентификациисырья в так называемых курительных смесях («спайсах») при проведении судебнобиологической экспертизы.3.1.

Растительное сырье различных морфологических группСовременные требования к микроскопическому исследованию ЛРС включают изучениеи цельного, и измельченного сырья, а также порошка. Их анатомо-диагностическая картина,очевидно, будет варьировать из-за различной техники приготовления микропрепаратов ивлияния измельченности на анатомическую структуру растительного сырья. Возникаетпотребность в определении ключевых анатомических признаков – микроскопических маркеров,позволяющих определить подлинность ЛРС различного способа переработки.В настоящей главе проведены результаты микроскопического исследования поопределению основных анатомо-диагностических признаков цельного, измельченного ипорошкованного сырья различных морфологических групп. Для объектов исследования53традиционной восточной медицины и наркотического сырья – шалфея предсказателей такиеисследования были проведены впервые.3.1.1. ЛистьяДля определения основных биологических маркеров микроскопической идентификации15 видов листьев различной измельченности были использованы материалы собственныхисследований, научных публикаций и нормативные документы [40, 54, 116, 133, 151, 194, 196].Результаты представлены в таблице 11 и документально подтверждены фотоиллюстрациями,часть из которых представлена в работе, остальные опубликованы в печатных трудах [48, 152].Таблица 11.

Вариабельность микроскопических биологических маркеров ЛРСморфологической группы «листья»Название ЛРСБиологические маркеры(специфические анатомо-диагностические признаки) ЛРСЦельноеИзмельченноеПорошок12341. Листья мать-и- Верхнийэпидермисскрупными Дополнительное значениемачехимногоугольными клетками с прямыми, приобретаютэпидермисиногда четковидноутолщенными стенками, черешка с удлиненнымикутикуласильно морщинистая; мелкие клетками; участки листа вклетки нижнего эпидермиса с извилистыми поперечномсечениисстенками;кутикулатонкая,слабо аэренхимой. Участки жилокморщинистая; устьица аномоцитного типа (в соспиральнымииосновномнанижнейстороне); лестничными сосудамимногочисленныепростыебичевидныеволоски только с нижней стороны,образованы 3-6 небольшими клетками восновании и длинной конечной, сильноизвилистой терминальной клеткой (до 4000мкм); редко встречаются головчатые волоскина одноклеточной ножке с овальнойвытянутой многоклеточной головкой; вмезофилле – аэренхима, вдоль жилок –удлиненные вместилища.2.

Листья шалфеяКлеткиверхнегоэпидермисасо Дополнительное значениеслабоизвилистыми стенками, нижнего – с приобретаютфрагментыизвилистыми;кутикуламорщинистая; листавпоперечномустьичный комплекс диацитного типа; сеченииэфирномасличные железки округлой формыс просвечивающей ножкой и трудноразличимыми, радиально расходящимися 6-8выделительными клетками (диаметр 20-60мкм, частота 0-35 на мм2); многочисленные54простые многоклеточные волоски (длина до1100 мкм, частота 700-900 мм2) с 2-4короткимитолстостенныминижнимиклеткамиисдлинной,изогнутой,тонкостенной конечной клеткой; головчатыеволоски мелкие (диаметр головки 8-12мкм,частота 0-35 на мм2), состоят из короткой 1-3клеточной ножки и шаровидной 1-2клеточной головки3.