Диссертация (Сравнительная иммуноморфологическая и спектроскопическая характеристика опухолей почек)

Федеральное государственное автономное образовательное учреждениевысшего образованияПервый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации(Сеченовский Университет)На правах рукописиАлександров Николай СергеевичСравнительная иммуноморфологическая испектроскопическая характеристика опухолей почек14.03.02 – Патологическая анатомиядиссертация на соискание ученой степеникандидата медицинских наукНаучный руководитель:доктор медицинских наук,доцентКириллов Ю.АМосква - 2019ОГЛАВЛЕНИЕВведение……………………………………………………………………. 4ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Современный алгоритм дооперационнойдиагностики опухолей почек ………………………………………………..

91.1.Инструментальные методы диагностики опухолей почек ………….. 91.2.Морфологические методы исследования опухолей почек ………… .131.3. Современные возможности рамановской спектроскопии в диагностикеонкологических заболеваний ……………………………………………….. .20ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ……………. 282.1. Материал исследования ……………………………………………….282.2.

Гистологический метод исследования ……………………………….. 302.3. Гистохимический метод исследования ………………………………. 302.4. Иммуногистохимический метод исследования ………………………312.5. Раман-флуоресцентная спектроскопия ……………………………….322.6. Статистические методы исследования ………………………………..35ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ …...... 363.1. Результаты иммуноморфологического и спектроскопическогоисследований образцов светлоклеточного почечно-клеточного рака .. 363.2.Результатыиммуноморфологическогоиспектроскопическогоисследований образцов папиллярного почечно-клеточного рака…….. 513.3.Результатыиммуноморфологическогоиспектроскопическогоисследований образцов хромофобного почечно-клеточного рака …… 613.4. Результаты морфологического и спектроскопического исследованийобразцов контрольной группы ……………………………………………673.5. Анализ эффективности раман-флуоресцентной спектроскопиидиагностике почечно-клеточного рака …………………………………..

692вГЛАВА4.ОБСУЖДЕНИЕРЕЗУЛЬТАТОВСОБСТВЕННОГОИССЛЕДОВАНИЯ ………………………………………………………… 71ВЫВОДЫ …………………………………………………………………... 83ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ………………………………….. 84СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ………………………………………………… 863ВВЕДЕНИЕАктуальность проблемыБолезни почек и мочевыводящих путей традиционно относятся ккатегории наиболее распространенных заболеваний человека. Вместе с тем,опухоли почек в структуре заболеваемости и смертности населенияРоссийской Федерации до недавнего времени составляли 3- 5%. Однако,всего за 12 лет (2000 – 2012 гг.) в большинстве стран мира, включая РФ,наметилась устойчивая тенденция к резкому повышению заболеваемостионкоурологическими болезнями на 15 – 31,4% [5] при безусловномдоминировании злокачественных вариантов опухолей в этой группе [16]. Вотличие от новообразований других локализаций опухоли почек чаще и втечение более длительного времени развиваются бессимптомно и лишь в 10 –15%случаевпроявляютсебяклассическойтриадойсимптомов:пальпируемым объёмным образованием в поясничной области, гематурией иболью в пояснице [110].

Злокачественные опухоли почек обычно и чаще посравнению с опухолями других органов проявляют себя в периодмаксимальной реализации опухолевого потенциала, распространеннымметастазированием, прорастанием опухоли в паранефральную клетчатку,развитием паранеопластического синдрома [98].

Социальное значениеопухолейпочекобусловленопреимущественнымпоражениемлицработоспособного возраста (30 – 50 лет), трудностью их ранней диагностики,а для злокачественных форм ещё и резистентностью к лучевой ихимиотерапии,низкойпятилетнейвыживаемостьюбольныхпослепроведенного лечения и резким ухудшением качества жизни [34]. Следуетподчеркнуть, что, несмотря на достигнутые определенные успехи вморфологическойдиагностикеопухолейпочек,вопросынаучногообеспечения создания новых высокоточных и эффективных методов ранней4диагностикиопухолейпочекпредставляютактуальнуюпроблемусовременной урологии, нефрологии и морфологии.Цель исследованияПровести сравнительную характеристику некоторых доброкачественных излокачественныхопухолейпочекнаоснованиирезультатовиммуноморфологического и спектроскопического исследования.Задачи исследования:1.Получить спектральные характеристики различных вариантов почечно-клеточного рака с помощью метода раман-флуоресцентной диагностики.2.Сопоставить данные спектроскопического анализа участков почечнойткани, пораженных опухолевым процессом, с результатами их традиционногостандартного морфологического и иммуногистохимического исследования,подтверждающего наличие опухоли в почечной ткани.3.На основании анализа спектроскопических оптических характеристикпочечно-клеточного рака определить значение метода раман-флуоресцентнойдиагностики,объединяющегофлуоресцентнуюспектроскопиюиспектроскопию комбинационного (рамановского) рассеяния света для егодооперационной диагностики.Научная новизна исследованияНаучная новизна данного исследования заключается в том, что в немвпервыенаоснованиииспользованияметодараман-флуоресцентнойдиагностики для идентификации опухолей почек определены специфическиеоптические спектральные опухолевые маркеры, характерные для различныхвариантов почечно-клеточного рака различной степени дифференцировки.При этомзаключение о характере и распространенности опухолевогопроцесса было подтверждено стандартным морфологическим исследованием.Данное научное исследование является морфологическим сопровождением и5обоснованием применения метода раман-флуоресцентной спектроскопии дляболееточнойдиагностикипочечно-клеточногорака.Наоснованииполученных данных впервые разработаны алгоритмы действий и выработаныстандартные режимы работы лазера (мощность, время эксплуатации, времявычисления светового и темнового спектров и др.).Практическая значимостьРезультаты проведенного исследования убедительно свидетельствуют овозможности использования в алгоритме диагностики опухолей почек методараман-флуоресцентной спектроскопии.

На основании спектрального анализаобразцов различных вариантов почечно-клеточного рака стало возможнымопределить степень дифференцировки опухоли, наличие или отсутствиевторичных изменений в опухолевом узле. Поскольку диагностика опухолиосуществляется в режиме реального времени, появляются перспективыинтраоперационного применения метода для диагностики опухолей и другихлокализаций.Основные положения, выносимые на защиту1.

Спектральный анализ биоптата почечной ткани, пораженной опухолевымпроцессом, позволяет выявить и зарегистрировать своеобразные «отпечатки»молекул различных веществ и соединений, которые могут быть отнесены коптическиммаркерамподтверждаютсяопухоли.стандартнымРезультатыспектральногоиммуноморфологическиманализаисследованиемобразца опухолевой ткани, проводимом в установленном порядке.2. В связи с гетерогенностью почечной ткани, как в норме, так и припатологии, и наличием в ней паренхиматозного и стромального компонентовспектральныехарактеристикиисовокупностьоптическихмаркеров,характеризующих состояние почечной ткани в норме и патологии могутсущественно отличаться.3.

Неоднородность строения опухолевого узла и наличие в нем вторичных6изменений обуславливает необходимость проведения анализа спектральныххарактеристик, полученных из разных участков опухолевого узла, с цельюисключениякакложноположительных,такиложноотрицательныхзаключений.Апробация диссертационного материалаМатериалы диссертации доложены на научно-практической конференции«Применение лазерной рамановской спектроскопии в медицине, народномхозяйстве и промышленности» (Москва, 2014), Всероссийской научнопрактической конференции с международным участием «Актуальныевопросыморфогенезавнормеипатологии»(Москва,2016),Международной конференция «Annual International Conference on Research,Education and Teaching by Russian Academics» (Афины, 2016), XXVIIIЕвропейском патологическом конгрессе (Кёльн, 2016), Научно-практическаяконференция с международным участием «Применение лазеров в медицине.Фотодинамическая терапия» (Москва, 2016), V съезде Российского обществапатологоанатомов (Челябинск, 2017), Международной научно-практическойконференции молодых ученых «Горизонты медицинской науки» (Москва,2017), Интернациональном обществе оптики и фотоники (Страсбург, 2018),международнойконференции«Информационныетехнологииинанотехнологии» (Самара, 2018), Российском обществе патологоанатомов(Москва, 2018), научно-практической конференции «Многопрофильнаябольница современного города: вчера, сегодня, завтра» (Москва, 2018).Апробация диссертации состоялась на научной конференциикафедрыпатологической анатомии им.

акад. А.И. Струкова Первого МГМУ им. И.М.Сеченова «28» января 2019 года.7Соответствие диссертации паспорту научной специальностиДиссертация соответствует паспорту научной специальности 14.03.02–патологическая анатомия, а также области исследования согласно пунктам 1,2, 3 и 4.Публикации результатов работыПо теме диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе 4 работы((2- оригинальных, 2- обзорных) в журналах, рекомендованных ВАК, и 3публикации в зарубежных изданиях.Объем и структура исследованияДиссертацияпостроенапомонографическомтипуиизложенана99 страницах машинописи, содержит 9 таблиц, 26 рисунков, 1 диаграмму.Диссертация состоит из введения, глав, заключения, выводов, практическихрекомендаций и списка литературы, включающего 51 отечественных и68 иностранных источников.8ГЛАВА 1.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫСовременный алгоритм дооперационной диагностики опухолей почек1.1. Инструментальные методы диагностики опухолей почекВ настоящее время медицинарасполагаетмножеством различныхметодов и технологий, позволяющих с большей или меньшей долейвероятности диагностировать объёмные патологические образования почек,к числу которых относятся опухолевые и опухолеподобные заболевания ипатологическиесостояния.Применениеииспользованиеэтихдиагностических методов и приемов осуществляется в строгом соответствиисо стандартами диагностики и лечения больных с данным видом патологии,утвержденнымивустановленномпорядкеМинздравомРоссийскойФедерации и территориальными органами управления здравоохранением.Основным инструментальным методом дооперационной диагностикиопухолейпочкидонастоящеговременипродолжаетоставатьсяультразвуковое исследование органов брюшной полости (УЗИ) [4, 7].Ультразвуковое исследование позволяет идентифицировать в почке фокустканевойакустическойплотности,сбольшойдолейвероятностисвидетельствующий о наличии опухоли, а в сочетании с изменением контурапочки, наличием гипоэхогенных участков, свидетельствующих о развитиивторичных изменений в узле (некроз, распад) -существование опухолиможно считать доказанным [31].