Диссертация (Разработка состава и технологии лекарственных форм с экстрактами эвкалипта прутовидного (eucalyptus viminalis labill.) и эхинацеи пурпурной (Echinacea purpurea Moench) для лечения воспалительных заболеваний полости рта), страница 6

При элюации применяли 0,1%-й водныйраствор муравьиной кислоты и 0,1%-й раствор муравьиной кислоты вацетонитриле. Скорость элюации составляла 0,3 мл/мин.36Детектирование проводили при 275 нм. УФ-спектры фенольных соединенийв области 210 – 400 нм регистрировались автоматически на вершине каждогопика. Использовали объем хроматографируемых образцов экстрактов поотдельности по 5 µл, а в смеси растворов (соотношение 1:1) – 10 µл. Подобранныеусловия были оптимальными для хроматографического разделения фенольныхсоединений обоих экстрактов.При идентификации фенольных соединений использовали систему дляультра-эффективной жидкостной хроматографии, которая включала жидкостныйхроматограф Agilent 1200 с масс-спектрометрическим детектором BRUKERmicrOTOF-Q-MS и диодным детектором (УЭЖХ-ДД-МС). ХроматографическиеусловиябылианалогичныусловиямВЭЖХ-ДДанализа.Объемхроматографируемых исходных образцов экстрактов составил 10 µл. Регистрациюмасс-спектрометрических данных и их последующую обработку проводили сиспользованием программы «DataAnalysis 4.0» (BRUKER Daltonics).

Калибровкумасс-спектрометра осуществляли для каждой хроматограммы после окончанияразделения метаболитов с использованием 5 мМ раствора формиата натрия(NaCOOH).Выражаем благодарность д-ру биолог. наук, гнс ФГБНУ ВИЛАР ОсиповуВ.И. за помощь и содействие при проведении экспериментальных исследований.Спектрофотометрию использовали для качественного и количественногоанализа содержания БАВ в ЛФ, а так же для оценки противовоспалительной ииммуностимулирующей активности исследуемых объектов.Качественныйиколичественныйанализразработанныхлекарственных форм с экстрактами эвкалипта прутовидного (эвкалимин) иэхинацеи пурпурной (эстифан)За основу методов стандартизации разработанных лекарственных формвзяты известные методики.37Выражаем благодарность сотрудникам ФГБНУ ВИЛАР – гнс, д-ру фарм.наук, профессору РАН Зилфикарову И.Н., внс, канд.фарм.

наук Копытько Я.Ф. запомощь и содействие при проведении экспериментальных исследований.Определение подлинности:– ТСХ; на хроматограмме испытуемого раствора наблюдаются зоны адсорбции науровне зон адсорбции стандартных образцов растворов эвкалимина и эстифана;- УФ-спектрофотометрия (использовали спектрофотометр «Cary 100 Scan»(Varian, США); при длине волны (280 ± 1) нм испытуемый раствор имеетмаксимум поглощения.Методика количественного определения суммы фенолальдегидов впереcчете на РСО эвкалимина в ЖЛФОколо 5,0 г (точная навеска) ЖЛФ помещалив стеклянный стаканчиквместимостью 50 мл, прибавляли 25 мл спирта 96% и перемешивали стекляннойпалочкой в течение 5 мин.Проводили фильтрование при пониженном давлении в колбе Бунзена черезбумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 50 мл. Остатки исследуемогообразца с фильтра количественно переносили в ту же колбу с помощью 20 мл 95%этилового спирта и перемешивали в течение 5 мин; доводили до метки 95%этиловым спиртом (раствор А).Анализировали полученные растворы образцов.

По оптической плотностипри длине волны 280±1 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм рассчитываликоличество БАВ. Раствором сравнения служил 96% этиловый спирт. Параллельноизмеряли оптическую плотность раствора РСО эвкалимина.Использовали мерную колбу на 50 мл и 96% этиловый спирт, в которомрастворяли около 0,01 г (точная навеска) РСО эвкалимина.Отбирали 2 мл из полученного раствора и помещали в мерную колбу на 25мл. Объем раствора до метки доводили 96% этиловым спиртом.38Для расчета количественного содержания суммы фенолальдегидов впересчете на эвкалимин в процентах (Х) использовали формулу:X(2)A  m0  50  2  100,A0  m  50  25где А0 - оптическая плотность раствора РСО раствора эвкалимина;А - оптическая плотность испытуемого раствора;m0 - масса эвкалимина, г,m - масса ЛФ, г.Определение количественного содержания суммы фенолкарбоновыхкислот проводили в пересчете на цикориевую кислотуПробоподготовка аналогична, что и для методики определения суммыфенолоальдегидов.Оптическую плотность исследуемого раствора определялипри длиневолны 328 нм.Раствором сравнения служил 95% этиловый спирт.Параллельно измеряли оптическую плотность раствора РСО цикориевойкислоты.Количественное содержание суммы фенолкарбоновых кислот в пересчетена цикориевую кислоту рассчитывали в процентах по формуле:X(3)A  m0  50  2  100A0  m  50  25где А0 - оптическая плотность раствора РСО раствора цикориевой кислоты;А - оптическая плотность испытуемого раствора;m0 - масса РСО цикориевой кислоты, г,m - масса ЛФ, г.39Определение количественного содержания фенолкарбоновых кислот втаблетках для рассасыванияГотовили раствор А из 2,0 г (точная навеска) из измельченных таблеток,которые помещали в мерную колбу на 25 мл.

В нее прибавляли 5 мл воды иподвергали нагреванию при температуре не выше 300С в течение 1 мин наводяной бане. После снятия с водяной бани перемешивали еще 10 мин.Прибавляли 0,5 г щавелевой кислоты, перемешивая еще в течение 1 мин. далеедобавляли 15 мл спирта 96 , продолжая перемешивание в течение еще 1 мин.затем доводили объем спиртом 96  до метки и перемешивали. Около 10 млраствора помещали в центрифужную пробирку и подвергали центрифугированиюв течение 10 мин при скорости вращения барабана 3000 об/мин.На листе фильтровальной бумаги (15×15см) отмечали стартовую линию, накоторую наносили по 0,05 мл раствора А в виде двух полос, шириной около 3 смкаждая. После высыхания пятен их границы отмечали графитовым карандашом.Далее хроматограмму поместили в хроматографическую камеру с хлороформом.После прохождения фронта растворителя около 5см - вынимали из камеры исушили в течение 30 мин в вытяжном шкафу.Приготовление раствора Б.

Отмеченные участки стартовых пятен вырезалии помещали в конические колбы на 25 мл со шлифом; приливали по 10 млрастворахлористоводороднойкислоты0,1моль/л.Перемешивалиналабораторном встряхивателе в течение 30 мин и отфильтровывали, каждый поотдельности, через бумажный фильтр «синяя лента» (раствор Б).5 мл испытуемого раствора помещали в кювету с толщиной слоя 10 мм иизмеряли оптическую плотность при длине волны 328 нм. Раствором сравненияслужила 0,1 М хлористоводородная кислота.Количественное содержание суммы оксикоричных кислот в пересчете нацикориевую кислоту рассчитывали в миллиграммах по формуле:(4)40где D – оптическая плотность испытуемого раствора;а – навеска препарата, г;b – средняя масса таблетки, г; 782 удельный показатель поглощения цикориевой кислоты в условиях анализа.Содержание суммы оксикоричных кислот в одной таблетке должно быть неменее 4,5 мг.Определение количественного содержания эвкалимина в таблетках длярассасыванияПорошок измельченных таблеток, массой 4,0 г (точная навеска) помещали вконическую колбу на 100 мл.

Добавляли 20 мл хлороформа и перемешивали 3мин. Фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу на 100 мл со шлифом.Количественно переносили остаток и доводили объем до метки (раствор А).Отбирали 80 мл (точный объем) полученного раствора и помещали вкруглодонную колбу вместимостью 200 мл. Упаривали на водяной бане подвакуумом до получения 3-5 мл. Остаток с помощью 3-5 мл хлороформаколичественно переносили в стеклянный бюкс высушенный до постоянной массыи взвешивали с точностью до 0,0001г, упаривали под вакуумом досуха и сушилидо постоянной массы при температуре (100 – 105) ºС. Затем определяли массусухого остатка.Количественное содержание эвкалимина в одной таблетке рассчитывали поформулегде m – масса сухого остатка, г;а – навеска препарата, г;b – средняя масса таблетки, г.(5)41Содержание эвкалимина в одной таблетке должно быть от 21,25 мг до 28,75 мг.Приготовление раствора РСО эвкалимина осуществляли в мерной колбе на 50мл, растворяя 0,1 г в 96% спирте этиловом (Раствор А).

Отбирали 2 млполученного раствора и переносили в мерную колу на 25 мл. Объем доводили дометки 96 % этиловым спиртом.Фармацевтическую доступность БАВ из спреяв опыте in vitroопределяли методом равновесного диализа. Концентрацию БАВ определяли пооптической плотности диализной жидкости при длине волны 328 ± 3 нм.В эксперименте использовали стеклянные трубки с внутренним диаметром25 мм ± 0,1 мм и высотой 100 мм. Полупроницаемую мембрану (целлофан)фиксировали на один конец трубки.