Автореферат (Разработка состава и технологии лекарственных форм с экстрактами эвкалипта прутовидного (eucalyptus viminalis labill.) и эхинацеи пурпурной (Echinacea purpurea Moench) для лечения воспалительных заболеваний полости рта), страница 3

- концентрация ПАВ 0,1%,растительных экстрактов 0,3%).Полученныерезультатыпоказывают,чтосувеличениемконцентрациирастительных экстрактов наблюдается увеличение размера мицелл в водной фазе.11Дальнейшее их увеличение может привести к снижению устойчивости системы.Концентрация смеси ПАВ, близкой к ККМ и равной 0,1% связана с требованиемминимизации содержания ПАВ в растворе.Таким образом, для сохранения устойчивости мицеллярного раствора приконцентрации ПАВ 0,1%, суммарная концентрация экстрактов не должна превышать0,2%.Технология получения мицеллярного раствора с растительными экстрактамиэвкалимин и эстифан осуществляется добавлением в предварительно приготовленный их0,2% спиртовый раствор 0,1% смеси ПАВ (твин 20/твин 80 1:4), с последующимдобавлением к ним 3% водного раствора МЦ-100 или АН, что позволяет получить узкоераспределение мицелл по размерам при высокой степени солюбилизации растительныхэкстрактов в них.

Мицеллы, полученные в указанных условиях, имеют размеры впределах 80 нм, что обеспечивает коллоидную устойчивость лекарственного препарата впроцессе его хранения, так как такого размера мицеллы, участвующие в броуновскомдвижении, седиментационно устойчивы.Б)Микроэмульсия.Другимспособомобеспечениявысокойэффективностивзаимодействия БАВ растительных экстрактов с поверхностью бактериальных клеток,является использование микроэмульсионной системы из смеси соевого лецитина (СЛ)(фосфолипиды) и водорастворимых ПАВ.

Ранее использованная смесь твин-20/твин-80(1:4) показала свою эффективность при получении мицеллярного раствора. Этот же составбыл использован для получения микроэмульсии на основе СЛ, введение которого вмицеллярный раствор смеси твинов приводит к образованию нового типа смешанныхмицелл, солюбилизирующих растительные экстракты. На Рисунке 4 показана зависимостьразмеров мицелл в микроэмульсии от концентрации растительных экстрактов.а)б)в)Рисунок 4 – Распределение мицелл в микроэмульсии по их размерам (а) - концентрацияПАВ - 0,1%, СЛ - 0,1%, растительных экстрактов - 0,1%; (б) - концентрация ПАВ - 0,1%;СЛ - 01%, растительных экстрактов - 0,2%; (в) - концентрация ПАВ - 0,1%, СЛ - 0,1%,растительных экстрактов - 0,3%.).12Полученные результаты показали, что увеличение содержания экстрактов до 0,3%вызывает резкий рост размера мицелл, порядка 200 нм, что может привести к потереагрегативной устойчивости.

Следовательно, оптимальным составом микроэмульсии являетсясодержание смеси ПАВ - 0,1%; СЛ - 0,1%; растительных экстрактов - 0,2%. Размеры мицеллпри этом находятся в пределах 100 нм (Рисунок 4, б).Технология получения микроэмульсии включает те же основные стадии, что и умицеллярного раствора, с дополнительным введением СЛ в смесь спиртового раствораэкстрактов и ПАВ, в количестве 1:1 по отношению к суммарному количеству твинов.Учитывая микробную нестабильность систем с водной дисперсионной средой, вразработанные составы ЛФ - введено 0,05% нипагина. Далее до 100,0 % добавляется 3%водный раствор МЦ-100 или АН.

Обе ЛФ представляют собой однородные густоватыежидкости светло-коричневого цвета, со слабым специфическим запахом, которые былииспользованы для дальнейших сравнительных исследований.Адгезивные свойства разработанных составов лекарственных формНа текстурометре Brookfield СТ3 (США) определены адгезивные свойства поусилиям отрыва индентора от тонких пленок, полученных из 4% раствора муцина (модельповерхности слизистой), мицеллярных растворов и микроэмульсий на основе МЦ-100 иАН. Усилие отрыва индентора от пленки, полученной из 4% раствора муцина, составляет6,8±0,5∙103 Па. Для мицеллярных растворов на МЦ-100 и АН – 5,8±0,7∙103 Па и 6,8±0,8∙103Па (соответственно). Для микроэмульсий на МЦ-100 - 4,3±0,5∙103 Па и АН - 6,3±0,7∙103Па. Таким образом, разработанные лекарственные композиции имеют близкие кмуциновому раствору адгезивные свойства, следовательно, являются мукоадгезивными.Разработка методик оценки подлинности и количественного содержания основныхгрупп БАВ в ЛФКачественную и количественную оценку ЛФ осуществляли по фенольным соединениям,являющихся доминирующей группой БАВ в растительных экстрактах эвкалимин иэстифан.

Качественное обнаружение фенольных соединений осуществляли методом ТСХи спектрофотометрии. В качестве критериев подлинности при ТСХ выбраны - наличие зонадсорбции с Rf около 0,60 (РСО цикориевой кислоты), с Rf около 0,70 (РСО эвкалимина)(Рисунок 5) и характерных максимумов поглощения при спектрофотометрии (длина волн280±1 нм (эвкалимин), 392±1 нм и плечо при 328±1 нм (эстифан) (Рисунок 6).13Рисунок 5. Хроматограмма испытуемых растворов ЛФ и РСО: 1на основе АН; 2 – на основе МЦ-100, раствор РСО цикориевойкислоты (3), раствор РСО эвкалимина (4) в системе н-бутанолвода-уксусная кислота (40:10:10).

Обнаружение в УФ-свете при365 нм.ТСХ – анализ показал, что на хроматограммах испытуемых11234растворов наблюдаются зоны адсорбции на уровне стандартныхобразцов эвкалимина и цикориевой кислоты. Дополнительных зон адсорбции необнаружено ни в одном из исследованных растворов.абРисунок 6. УФ-спектры: а: 1 - раствор РСО эвкалимина, 2- раствор РСО цикориевойкислоты, 3 – ЛФ с АН, 4 - плацебо ЛФ с АН; б- 1 – ЛФ с МЦ-100; 2- ЛФ с АН; 3 – плацебоЛФ с МЦ-100; 4 –плацебо ЛФ с АН.Определение количественного содержания проводили спектрофометрически в кювете столщиной слоя 10 мм: суммы фенолоальдегидов в пересчете на эвкалимин – при длиневолны 280±1 нм; суммы фенолкарбоновых кислот (эстифан) в пересчете на цикориевуюкислоту – при длине волны 328±1 нм.

Для расчета количественного содержания в ЛФсуммы БАВ в пересчете на РСО в процентах (Х) использовали формулуX (1)A  m0  50  2 100,A0  m  50  25где А0 - оптическая плотность раствора РСО;А - оптическая плотность испытуемого раствора;m0 - масса РСО, г,m - масса ЛФ, г.Содержание суммы фенолоальдегидов в пересчете на эвкалимин в образцах ЛФ сАН и МЦ-100 составило от 0,039 до 0,051%.

Установлено, что относительная погрешностьсреднего результата разработанной методики не превышает ±2,2%.14Содержание суммы фенолкарбоновых кислот в пересчете на цикориевую кислоту вобразцах ЛФ с АН и МЦ-100 составило от 0,0030 до 0,0045%. Относительная погрешностьсреднего результата разработанной методики не превышает ±4,6%. Валидационныерезультаты методик анализа оценивают их положительно по параметрам: правильность,прецизионность, сходимость, воспроизводимость, линейность, специфичность.Высвобождение БАВ из ЛФ in vitro через полупроницаемую мембрану по методуЛ.

Крувчинского проведено в трех повторностях для водорастворимых фенолкарбоновыхкислот. По полученным значениям оптической плотности диализной жидкости (Рисунок7) рассчитывали концентрацию БАВ. Установлено, что высвобождение суммыфенолкарбоновых кислот (в пересчете на РСО цикориевой кислоты) из микроэмульсий наоснове МЦ-100 и АН на 18% больше, чем из мицеллярных растворов на тех же основах.Концентрация, мг%1,51,52аб110,50,5113015304526090120318001530456090120180Рисунок 7 – Профили высвобождения суммы фенолкарбоновых кислот из микроэмульсий(а) и мицеллярных растворов (б) за 180 мин эксперимента (№1 основа – МЦ-100; №2 –основа – АН, 3 - плацебо).Исследование специфической активности ЛФПрипроведенииразведений»микробиологическихустановлено,чтоисследованиймикроэмульсиянаметодамиосновеАН«серийныхоказывалабактериостатическое действие на Staphylococcus aureus АТСС 6538 (209-P) в разведении1:64 (19,5 мкг/мл в пересчете на эвкалимин); а на Esherichia coli АТСС 25922, Proteusvulgaris ATCC 6896 и Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027- в разведении 1:4-1:8 (312-156мкг/мл).

Микроэмульсия на основе МЦ-100 показала активность в разведении 1:16 (78мкг/мл) на Staphylococcus aureus АТСС 6538 (209-P); а на Esherichia coli АТСС 25922,Proteus vulgaris ATCC 6896 и Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027- в разведении 1:4-1:8(625 -156 мкг/мл). Мицеллярные растворы проявили активность в разведении 1:2-1:4 вдозах625-312мкг/мл. Полученные результатыантимикробнойактивностиЛФсвидетельствуют о перспективности именно микроэмульсии на основе АН.С помощью ферментной биотест-системы на основе индуцибельной NO-синтазы вусловиях in vitro по влиянию на скорость ферментативной реакции, определяемой поизменению оптической плотности исследуемых растворов, установлено достоверное15ингибирование скорости iNОS-реакции в присутствии раствора растительных экстрактовна 27-32% независимо от концентрации по сравнению с контролем, что свидетельствует опротивовоспалительнойактивностисмесирастительныхэкстрактовэстифан,эвкалимин в спиртовом растворе при их соотношении 1:1 в диапазоне концентраций 2,0мг/мл – 0,2 мг/мл.Для подтвержденияиммуностимулирующейактивностиЛФ, проводилисравнительную количественную оценку величины активирующего влияния изучаемыхобъектов на скорость НАДФН оксидазной реакции in vitro.

В ходе исследований скоростиНАДФН-оксидазной реакции по изменению оптической плотности растворов изучаемыхобразцов, установлено, что микроэмульсия на основе АН в количестве 10 мклувеличивала скорость НАДФН-оксидазной реакции на 31,8% от эффекта препаратасравнения - протимозина-α.

Другие образцы показали активность в пределах 9,6-27,7%.Указанный состав микроэмульсии выбран нами как окончательный и назван«Эстилин» (Таблица 1).Таблица 1Состав микроэмульсии «Эстилин»Ингредиентыэвкалипта прутовидного экстракт сухой (эвкалимин)эхинацеи пурпурной экстракт сухой (эстифан)спирт этиловый 96%смесь ПАВ твин 20 и твин 80 в соотношении 1:4соевый лецитинальгинат натриянипагинвода очищеннаяКоличество, %0,100,101,000,100,102,960,0595,59Для первичной упаковки разработанного состава микроэмульсии (в качестве спрея)использованы стеклянные матовые спрей-флаконы 15/35 мл с механическим насосом,предназначенные для распыления водного содержимого флакона.При определении дозы в распыле установлено, что в среднем распыляется 0,120 г.микроэмульсии, что составляет по 0,100 мг каждого экстракта.