Диссертация (Изменения цитоархитектоники, метаболической активности нейронов и экспрессии эстрогеновых рецепторов в ядрах гипоталамуса и передне-базального комплекса мозга человека при старении, болезни Альцгеймера и сосудистом слабоумии), страница 9

С целью определения топографии ядеркаждый 50-й срез был окрашен 0.5% раствором тионина.Материалом для исследования БЯМ послужили фрагменты головногомозга, содержащие это ядро, от 1) 35 контрольных случаев (16 мужчин и 19женщин) без первичного неврологического или психиатрического заболевания,погибших в возрасте от 20 до 94 лет (54.9  3.5) (клинико-патологическаяинформация представлена в (Ishunina et al., 2000), и 2) от 12 случаев с болезньюАльцгеймера и 12 контрольных случаев от 54 до 94 лет, соответствующих повозрасту, полу, времени фиксации и промежутку между моментом смерти ивзятием материала.

Половые и возрастные различия изучались в первойконтрольной группе, разделенной на 4 подгруппы (мужчины моложе 50 лет,женщины моложе 50 лет, мужчины старше 50 лет, женщины старше 50 лет),тогда как изменения, связанные с БоАл, исследовались во второй группе. Затемизученные контрольные случаи были сгруппированы в 4 возрастные группысогласно классификации ВОЗ: 1) молодые (25-44), 2) средний возраст (45-59лет), 3) пожилые (60-74) и 4) старческий возраст (75-89 лет). С помощьюпрограммы ImageJ на микрофотографиях препаратов вручную обводилиськонтуры перикарионов нейронов и их ядер с последующим определением ихплощади.Ядерно-цитоплазматическоеотношение(ЯЦО)вычислялосьпосредством деления площади ядра на площадь перикарионов нейронов.Иммуноцитохимическое окрашивание проведено в основной части БЯМ,т.е.

вентральной промежуточной группе Ch4 (Mesulam et al., 1983), в которой49при болезни Альцгеймера наблюдается значительная потеря нейронов (Vogelset al., 1990), на основании расположения свода, передней комиссуры,оптического тракта и супраоптического ядра (Salehi et al., 1994; Salehi et al.,2000; Salehi et al., 1996).Рис.

2. Иммуноцитохимическое окрашивание аппарата Гольджи (A) эстрогеновогорецептора  (B) и окраска тионином (C) в части вертикального ядра диагонального поляБрока, где производились измерения (указано стрелками и линиями) при малом увеличенииу мужчины 20 лет. Масштаб = 1мм.50Изучение эффекта старения на цитоархитектонику, метаболическуюактивность нейронов и иммуноцитохимическое окрашивание эстрогеновыхрецепторов в ВЯДБ (Рис. 2) проводилось на материале мозга 23 контрольныхслучаев от 20 до 94 лет (10 мужчин, средний возраст которых составил 53.16.7лет и 13 женщин, средний возраст которых 54.25.8 лет), которые былиразделены на 4 группы по полу и возрасту 50 лет.

Вторая экспериментальнаягруппа, состоявшая из 10 случаев с БоАл (5 мужчин и 5 женщин, среднийвозраст которых 73.5 3.9) и соответствующих им по возрасту, полу идлительности фиксации 11 контрольных случаев, средний возраст которых71.53.8 лет, была разделена с учётом возраста 70 лет, т.е. середины возрастнойгруппы пациентов с БоАл и контрольных случаев для изучения эффектастарения на связанные с БоАл изменения в ВЯДБ.Половые и возрастные различия в ТМЯ изучались в группе 1) 29контрольныхслучаев(15мужчини14женщин)безпервичногоневрологических и психических заболеваний в возрасте от 20 до 94 лет.Дополнительно, с целью исследования изменений при БоАл отобрана группа из16 случаев с БоАл (7 мужчин и 9 женщин), соответствующих по полу, возрасту,длительности фиксации и промежутку между моментом смерти и взятиемматериала 16 контрольным случаям (8 мужчинам и 8 женщинам) (Таблица 2).Возрастные и половые различия в ММЯ изучались на материале мозга 21контрольного случая (10 мужчин и 11 женщин) в возрасте от 20 до 76 лет.Изменения при БоАл изучались в группе 11 случаев с БоАл (5 мужчин и 6женщин) и соответствующим по возрасту, полу и длительности фиксации 11пожилых контрольных случаях (5 мужчин и 6 женщин).

Женщин назаместительной терапии эстрогенами в этих группах не было.Возможныеизмененияэкспрессииэстрогеновыхрецептороввдорсолатеральной части СОЯ изучались на материале мозга 16 пациентов сБоАл (7 мужчин и 9 женщин) и 16 контрольных случаев (8 мужчин и 8женщин), соответствующих им по возрасту.Таблица 2Клинико-патологические сведения о контрольных случаях в эксперименте по окраске аппарата Гольджив туберомамиллярном ядреВозрастПолВ.

М. И.В.Ф.APOEПричина смерти1) 20м1490 8.0082н.о.сердечная недостаточность, фибризно-геморрагическая пневмония2) 28жн.о.5.2544н.о.кардиогенный шок3) 29ж1150 13.10 60н.опечёночная кома4) 31ж1330 18.43 30н.о.дорожно-транспортное происшествие, множественные травмы5) 32ж1280 30.00 45н.о.бронхопневмония, отёк лёгких6) 33м1410 18.45 32н.о.дорожно-транспортное происшествие7) 33ж1250 22.45 65н.о.астматический бронхит, отёк лёгких, гипоксия, кома8) 36м1750 28.40 42н.о.хориокарцинома яичка с метастазами, односторонняя гонадэктомия9) 48м1500 5.304232сахарный диабет 1-го типа, эвтаназия10) 49ж1260 <41.00 32н.о.карцинома лёгких, острая почечная недостаточность11) 49ж1253 <17.00 806 н.о.опухоль лёгких с метастазами, обширная тромбоэмболия12) 50м1573 <9.00 52н.о.карцинома мочевого пузыря с метастазами, сепсис, отёк лёгких13) 56м1357 5.003533опухоль в области лица, лапаротомия14) 58ж1221 6.4528н.о.пост-операционная кома15) 58м1408 <17.00 96н.о.рассечение аорты, артериальная гипертензия16) 60жн.о.8.0087н.о.карцинома яичников17) 61ж1311 5.152832глиобластома, кома18) 63м1368 1.4065н.о.пневмония, желудочковая тахикардия19) 63м1154 26.45 2932инфекционное поражение лёгких, абсцесс в брюшной полости20) 64м1448 8.093022лейкемия, тромбоцитопения, субарахноидальное кровотечение21) 69ж1074 8.303133инфаркт миокарда, лёгочная эмболия, тампонада сердца22) 69ж1264 6.153133кардиогенный шок23) 72м1383 6.453443острая сердечная недостаточность24) 74м1317 8.006032инфаркт миокарда25) 76ж1226 <7.35 270 н.о.аденокарцинома яичников, отёк лёгких, гидронефроз26) 80ж1087 6.153442стенокардия, сахарный диабет, дегидратация27) 80м1380 6.563333дыхательная недостаточность, эмфизема лёгких28) 87м1379 7.253433остановка сердца29) 94ж1118 6.102933бронхопневмония, сепсисСокращения: м – мужчина; ж - женщина; В.М.

– вес мозга; И. – интервал между моментом смерти и взятием материала (в часах и минутах);В.Ф. – время фиксации (количество дней); APOE – генотип аполипопротеина E; н.о. – параметр не определён.Метаболические изменения в ВЯДБ, БЯМ, СОЯ, ИНФ, ТМЯ, ММЯ приСС изучались на материале мозга 11 пациентов (5 мужчин и 6 женщин ввозрасте 76.92.8 лет) и соответствующих им по возрасту, полу и длительностификсации 11 контрольных случаев (5 мужчин и 6 женщин, средний возрасткоторых 76.72.7 лет) (Таблица 32). Диагноз «вероятной СС» был установленнаоснованиикритериевнейропатологическомNINDS-AIRENисследовании(RomanпациентовсetССal.,1993).обнаружены:При1)атеросклероз крупных сосудов основания мозга умеренной или выраженнойстепени, 2) диффузно расширенные желудочки мозга, 3) лакуны, 4) «старые»или «недавние» инфаркты, 5) некротические повреждения и атрофия извилин иокружающего белого вещества, 6) множественные кровоизлияния и ихпоследствия, 7) разрежение и мацерация белого вещества, приобретающего видпятнистого и рыхлого, 8) état criblé в хвостатом ядре, покрышке, бледном шареи таламусе.

В височной, теменной, затылочной и иногда лобной коре, в пояснойизвилине, хвостатом ядре, покрышке, бледном шаре, внутренней и наружнойкапсуле, мозжечке и мосте наблюдались инфаркты. Во всех случаях с ССприсутствовали лишь незначительные инволютивные изменения, а стадия Бракне превышала II. Дополнительно, была отобрана группа из 13 пациентов с БоАл(6 мужчин и 7 женщин, средний возраст которых 75.72.8 лет) для сравненияметаболической активности нейронов между группами с СС и БоАл.Иммуноцитохимическое окрашивание АГ проводилось и количественнооценивалось в центральной части 1) ВЯДБ, располагающегося рострально отгипоталамуса на уровне nucleus accumbens (Ishunina and Swaab, 2003), 2) БЯМили вентральной промежуточной доле Ch4 (Salehi et al., 1994), 3) основнойдорсолатеральной части СОЯ, расположенной дорсолатерально по отношениюк оптическому тракту (Swaab, 2003), 4) ИНФ (Swaab, 2003), 5) основнойвентральной крупноклеточной группы ТМЯ в туберальном и заднемгипоталамусе, соответствующей классическому ТМЯ (Swaab, 2003), 6) ММЯ,образующем каудальную границу гипоталамуса и легко определяющегося на53препаратах благодаря хорошо выраженной волокнистой капсуле (Ishunina et al.,2003; Swaab, 2003) (Рис.

3).Рис. 3. Нейроанатомическая диаграмма, указывающая расположение участков ядер, вкоторых производилось исследование, выполненная на основании оригиналов фронтальныхсрезов от ростральных (A) к каудальным (D) отделам из числа изученных случаев. Стрелкивнутри ядер соответствуют направлению метаболических изменений, т.е. ↓ = снижение, ↑ =повышение. Сокращения: ACC – nucleus accumbens, CDT – хвостатое ядро, CI – внутренняякапсула, dl-SON – дорсолатеральная часть супраоптического ядра, F – свод, III V – третийжелудочек, INF – инфундибулярное ядро, ISC – островки Кахаля, LV – боковые желудочкимозга, MMN – медиальное мамиллярное ядро, NBM – базальное ядро Мейнерта, OT –оптический тракт, PVN – паравентрикулярное ядро, SA – subcallosal area, TMN –туберомамиллярное ядро, VDB – вертикальное ядро диагонального поля Брока, VMN –вентромедиальное ядро, vm-SON – вентромедиальная часть супраоптического ядра.

L =левый, R = правый.54Цитоархитектоническое исследование БЯМ при СС проведено на материале9 случаев с установленным клиническим и нейропатологическим диагнозомсосудистой деменции и 9 контрольных случаев, соответствующих им по полу ивозрасту. Область мозга, содержащая базальное ядро Мейнерта, фиксироваласьв 10% растворе формалина в фосфатном буфере, дегидратировалась в спиртахвосходящей концентрации и ксилоле и заливалась в парафин. Каждый 100-йсерийный срез толщиной 6 мкм окрашивался 0.5% раствором крезиловогофиолетового ацетата в равных условиях. В качестве индикатора клеточнойгибели рассматривалась плотность расположения нейронов и глиальныхклеток. Для оценки метаболической активности нейронов определяли размерыперикарионов нейронов, а также интенсивность окраски по Нисслю и размерыглыбок вещества Ниссля, свидетельствующих о состоянии гранулярнойэндоплазматическойсети.Морфометрическийанализосуществлялсяпосредством винтового окуляр-микрометра МОВ 1х15.