1625912753-33d3075dece9dd1a3113958db5af5c8f (Х3)

Х-3. Разделение смеси нуклеозидов
методом тонкослойной хроматографии на силикагеле

Приборы и реактивы:
1) камера для хроматографии
2) листы силуфола УФ-254 150*50мм
3) ультрахемископ
4) пипетка для нанесения растворов веществ
5) система растворителей: хлороформ-метанол-вода (4:4:1)
6) 1% водный раствор смеси нуклеозидов
7) 1% водные растворы урилина, тимидина, цитидина, аденозина

Экспериментальная часть

Разметили пластинку карандашом, отметили линию старта и подписали нуклеозиды.

Нанесли тремя касаниями кончиками носиков пипеток 1% растворы веществ с диаметром ≈ 2мм. Пластинку поместили в камеру с системой растворителей и плотно закрыли камеру. Глубина погружения пластинки в растворитель ≈5 мм, а уровень жидкости не касался старта.

Оставили на 20 минут, дождались, чтобы пробег растворителя был равен примерно 2/3. Затем достали пластинку и высушили под тягой. Далее по поглощению в УФ-свете на ультрахемископе отметили пятна веществ и линию фронта.

Обработка результатов

Рассчитали подвижность веществ по формуле , где H₀ - путь фронта, H₁ – путь, пройденный компонентом. Путь, пройденный компонентом, отмечали по точкам, расположенным в центре пятна компонента.

Выводы

Данный метод тонкослойной хроматографии основан на различной адсобции нуклеозидов с силекагелем, что обеспечивает разную скорость движения и, следовательно, разный путь. В ходе эксперимента получили нуклеозидный ряд с возрастанием скорости движения: C

Проанализировав маркеры, можно сказать, что в исследуемой смеси находились нуклеозиды U и C. Нуклеозид А отсутствует, иначе не было б разделения на 2 пятна. Т имеет больший путь прохождения.

Х-1. Разделение смеси аминокислот методом хроматографии на бумаге

Приборы и реактивы:
1) Хроматографическая камера
2) хроматографическая бумага FN-3, листы 550*140мм
3) пипетки для нанесения растворов
4) карандаш, линейка
5) готовая система растворителей: н-бутиловый спирт – уксусная кислота (ледяная)- вода (4:1:5).
Смесь тщательно встряхивали, выдерживали не менее 48 часов, отделяли и использовали органический слой
6) проявитель: 0,2% раствор нингидрина в этаноле
7) Исследуемый раствор аминокислот (концентрация каждой аминокислоты 1%)
8) водные 1% растворы свидетелей: глицина, аланина, валина, аспаргиновой кислоты

Экспериментальная часть

Лист бумаги размером 550*150 мм разметили. Места нанесения веществ отметили карандашом.

Исследуемый раствор и растворы свидетелей нанесли тремя касаниями на линию старта при помощи носиков пипеток, причем диаметр капель был ≈7мм. Пятна высушили на воздухе при комнатной температуре.

Согнули лист по линиям сгиба и заправили его в лодочку, в которую залили на ¾ объема систему растворителей, используемых в качестве подвижной фазе. Оставили нашу установку на 24 часа. Затем осторожно достали из лодочки и высушили на воздухе. Обработали хроматограмму раствором нингидрина в этаноле для обнаружения пятен. Хроматограмму высушили на воздухе