166697 (Методики анализа витаминов), страница 2

Раствор витамина В12 имеет характерный спектр поглощения в ультрафиолете с максимумами при 278, 361 и 548 нм и коэффициентами поглощения в указанных точках соответственно 115, 207 и 64, причем коэффициент поглощения при 361 нм для препаратов обычной очистки превышает в 2,8—3,4 раза коэффициент поглощения при 548 нм.

Количественное определение

І.Спектрофотометрический метод. В растворах ампулированных препаратов в кювете спектрофотометра (в 1 см толщины) определяют коэффициент поглощения при 548 нм. Содержание витамина В12 в 1 мл испытуемого раствора вычисляют по формуле. Количество витамина В12 в микрограммах где Е — наблюдаемый коэффициент поглощения; 64 — коэффициент поглощения для 1%-ного раствора витамина В12, т. е. при содержании 1000 микрограммов в 1 мл; 104 — коэффициент пересчета концентрации витамина В12 с 1% в микрограммы на 1 мл.

2. Колориметрический метод. При отсутствии спектрофотометра пользуются фотоэлектроколориметром с зеленым светофильтром. Содержание витамина В12 в испытуемом образце определяют путем измерения коэффициента поглощения. По найденному коэффициенту, пользуясь калибровочной кривой, устанавливают какое количество витамина В12 ему соответствует. Для составления калибровочной кривой для колориметра ФЭК берут растворы чистого витамина В12 с содержанием 10, 15, 20, 25 и 30 мкг в 1 мл и определяют коэффициенты поглощения, пользуясь кюветами в 1 см толщиной.

Откладывая по оси абсцисс содержание витамина В12, а по оси ординат коэффициенты поглощения, строят калибровочную кривую, по которой и отсчитывают, какому количеству витамина В12 соответствует коэффициент поглощения испытуемого образца.

Витамин С (Аскорбиновая кислота)

(Мол. вес 176,12)

Качественные реакции

1. Растворяют 0,1 г аскорбиновой кислоты в 2 мл воды и приливают 0,5 мл раствора нитрата серебра. Выпадает осадок металлического серебра.

2. Раствор аскорбиновой кислоты (0,1 г в 2 мл) в воде остается бесцветным от прибавления 1 капли раствора йода или хлорида железа.

Количественное определение

Йодометрический метод основан на окислении аскорбиновой кислоты йодом с превращением ее в окисленную дегидроформу:

Растворяют 0,3 г препарата (точная навеска) в 25 мл воды и титруют до появления неисчезающей желтой окраски 0,1 н. раствором йода, 1 мл которого соответствует 0,0088 г аскорбиновой кислоты.

Вместо йода можно применять йодат калия. Навеску препарата с содержанием 0,01 г аскорбиновой кислоты растворяют в 100 мл воды. К 10 мл раствора прибавляют 5 мл 5%-ного раствора йодида калия, 5 мл 2%-ной соляной кислоты, 50 мл воды и 10 мл 0,004 н. раствора йодата калия и оставляют в темном месте в течение 30 минут. Не вошедший в реакцию свободный йод оттитровывают 0,004 н. раствором тиосульфата натрия (индикатор раствор крахмала). 1 мл 0,004 н. раствора йодата калия соответствует 0,000352 г аскорбиновой кислоты. Рассчитывают по формуле (а—b) · 0,000 352, где а — количество раствора йодата калия в миллилитрах, b — количество раствора тиосульфата натрия в миллилитрах. Аскорбиновую кислоту можно определять по реакции восстановления 2,6-дихлорфенол-индофенола, но этот метод мало применим при контроле рецептуры.

Витамин D2 (Кальциферол)

Качественные реакции

1. К 2 мл раствора препарата в сухой пробирке добавляют 5 капель раствора пирогаллола. Растворитель отгоняют, нагревая пробирку на водяной бане, и оставляют лишь несколько десятых миллилитра раствора. Затем прибавляют 3 капли раствора хлорида алюминия и снова нагревают на водяной бане. Несколько выше дна пробирки начинает появляться красно-фиолетовая корочка, окраска которой достигает наибольшей интенсивности примерно через 4 минуты. Окрашенное вещество можно растворить в 5 мл спирта. Такой раствор, налитый в пробирку, закрытую резиновой пробкой, сохраняет интенсивность окраски в течение часа. Реакция удается лишь при условии применения совершенно безводных реактивов, тщательно высушенной посуды и при строгом соблюдении порядка прибавления реактивов. Необходимы реактивы: 1) 0,1%-ный раствор пирогаллола в абсолютном спирте и 2) 10%-ный раствор сублимированного хлорида алюминия.

2. К 1—2 мг препарата добавляют равное количество сахарозы и растворяют смесь в 1—2 мл абсолютного спирта. После добавления 2 капель концентрированной серной кислоты появляется красная окраска, переходящая в синюю от добавления 6 капель разбавленной серной кислоты.

3. К 0,2 мл раствора препарата D (2 мг кристаллического витамина D в 1 мл хлороформа) добавляют 4 мл раствора хлорида сурьмы. Появляется оранжево-красная окраска, быстро достигающая максимальной интенсивности и дающая резкую полосу поглощения при 500 ммк одинаковой силы для витаминов D2 и D3.

Витамин Е (б-токоферол)

Качественные реакции

При действии азотной кислоты токоферол образует соединение, окрашенное в яркий красный цвет (реакция характерна).

Количественное определение

Токоферол количественно окисляют раствором хлорида золота в 80%-ном спирте; титруют потенциометрически.

Витамин РР (Никотиновая кислота и никотинамид)

(Мол. вес 123,11)

Качественные реакции

1. Растворяют 0,01—0,02 г препарата при нагревании в 3 мл воды. К теплому раствору приливают 3 капли уксусной кислоты и 1 мл 5%-ного раствора ацетата меди. Выпадает осадок синего цвета.

2. В растворе никотиновой кислоты от реактива Зонненшейна (фосфорно-молибденовая кислота) выпадает желтый осадок, а от реактива Драгендорфа красный осадок.

3. Никотиновая кислота и ее амид дают с 2,4-динитрохлор-бензолом соли пиридиния, которые при действии щелочей расщепляются с образованием производных глутаконового альдегида, окрашенных в желто-красный цвет.

В 100 мл воды растворяют 10 мг никотиновой кислоты; 5 мл раствора выпаривают досуха на водяной бане в стаканчике емкостью 30 мл, затем добавляют 1 мл 10%-ного спиртового раствора 2,4-ди-нитрохлорбензола и после 2-часового стояния при комнатной температуре выпаривают снова досуха на водяной бане и держат еще в течение 10 минут при той же температуре. После охлаждения до 25° к остатку приливают 10 мл охлажденного до 10° 0,1%-ного спиртового раствора едкого натра. Раствор окрашивается в интенсивный желто-красный цвет.

Количественное определение

1. Сульфат меди осаждает в нейтральной среде осадок (C6H4O2N)Cu2; избыток меди определяется йодометрически.

Несколько порошков с содержанием 0,3—0,4 г (точная навеска) никотиновой кислоты растворяют в 25 мл свежепрокипяченной горячей воды и по охлаждении нейтрализуют (индикатор — фенолфталеин) сначала 0,5 н., а под конец 0,1 н. раствором едкого натра, переливают в мерную 100 мл колбу, прибавляют 10 мл раствора медного купороса, доводят до метки, перемешивают, дают стоять 10—15 минут и отфильтровывают через сухой фильтр в сухую колбу. К 50 мл фильтрата в конической колбе с притертой пробкой прибавляют 10 мл разведенной соляной кислоты, 2 г йодида калия, закрывают пробкой и дают стоять в темном месте 10 минут. Выделившийся йод титруют 0,1 н. раствором тиосульфата натрия (индикатор — крахмал), 1 мл которого соответствует 0,02462 г никотиновой кислоты.

Проводится контрольный опыт. Разность между вторым и первым титрованиями перечисляют на никотиновую кислоту.

1. В отсутствии мешающих веществ кислого или щелочного характера никотиновая кислота в спиртовом растворе может быть оттитрована 0,1 н. раствором едкого натра (индикатор—фенолфталеин).

Количественное определение никотиновой кислоты по циано-генбромидному методу основано на образовании никотиновой кислотой при взаимодействии с бромцианом бромцианпроизводного, которое в присутствии ароматических аминов (анилина и др.) распадается с образованием интенсивно окрашенного продукта — производного

Растирают в ступке 10—20 штук драже, взвесив для установления среднего веса, отбирают навеску в количестве 1—3 г на техно-химических весах и растворяют при нагревании в 10—15 мл перегнанной воды. По охлаждении раствор переливают в мерный цилиндр, разбавляют водой с таким расчетом, чтобы в 5 мл разведения содержалось 0,5—1 мг никотиновой кислоты, хорошо перемешивают содержимое цилиндра и фильтруют через складчатый фильтр.

К 5 мл фильтрата в стаканчике добавляют 1 каплю 2%-ного раствора щелочи, 2 мл роданбромидного раствора, 11 мл спиртового раствора анилина, хорошо перемешивают и оставляют на 1—2 часа. После этого смесь отфильтровывают от выпавшего осадка и появившуюся желтую окраску раствора сравнивают со стандартным раствором никотиновой кислоты в колориметре Дюбоска, устанавливая стандартный раствор всегда на 10 мм.

Для приготовления стандартного раствора навеску кристаллического никотин-амида или никотиновой кислоты растворяют в горячей воде с таким расчетом, чтобы в 1 мл раствора содержался точно 1 мг никотиновой кислоты. К 1 мл раствора в стаканчике добавляют 4 мл воды и 1 каплю 2 н. раствора щелочи. В дальнейшем стандартный раствор обрабатывают так же, как описано выше, и одновременно с испытуемым раствором.

Для приготовления роданбромидного раствора в коническую колбочку с 10 мл н. раствора химически чистого роданида калия добавляют 1 г бромида калия и после полного растворения — 1 мл соляной кислоты (разведенной водой 1 : !), а далее из бюретки прибавляют по каплям 2,5 мл брома (уд вес 3,2) при постоянном помешивании содержимого колбочки.

Рутин

(Мол. вес 610,35, безводный)

Качественные реакции

1. Спиртовый раствор рутина при добавлении магниевых стружек и 2—3 капель ледяной уксусной или соляной кислоты окрашивается в пурпурно-красный цвет; образуется антоцианидин:

2. При добавлении к спиртовому раствору рутина ацетата свинца выделяются желтые игольчатые кристаллы.

3. Спиртовые и водные растворы рутина при действии хлорида железа окрашиваются в зеленый цвет (реакция на фенольный гидрок-сил).

4. Рутин легко восстанавливает аммиачный раствор серебра.

5. К 1 мл раствора, содержащего 0,005 г рутина, прибавляют 2 мл 10%-ного водного раствора нитрита натрия, 0,5 мл 50%-ной серной кислоты, 25 мл 1 н. раствора карбоната калия и 100 мл воды, Появляется красно-коричневое окрашивание.

6. К 5 мл раствора рутина прибавляют 2 мл 10%-ного раствора молибдата аммония и воды до 100 мл. Появляется лимонно-желтое окрашивание.

7. При действии кислот рутин разлагается на кверцетин (I), глюкозу (II) и рамнозу (III):

Количественное определение

Основано на выделении и взвешивании выделенного кверцетина. 1. К 1 г препарата (точная навеска) в конической колбе емкостью в 200 мл приливают 100 мл 0,5%-ного раствора соляной кислоты и кипятят с обратным холодильником на сетке или электрической плитке в течение 30 минут. По охлаждении собирают образовавшийся осадок на взвешенный стеклянный фильтр (№ 3 или 4), промывают 3—4 раза по 10 мл перегнанной воды (до отсутствия реакции на хлор-ион), высушивают при температуре 110° до постоянного веса. Полученный вес умножают на 2,019.

Для количественного определения в таблетках таблетки растирают, извлекают спиртом, к раствору прибавляют раствора хлорида аммония и ацетата калия (для усиления окраски) и через 40 минут определяют спектрофотометром поглощение при 445 нм; результат сравнивают с калибровочной кривой. Метод применяли к исследованию смесей рутина с аминофиллином, люминалом и аскорбиновой кислотой.

Литература

1. Девятнин В.А.Методы химического анализа в производстве витаминов// М.: Медицина – 1964. – 182 с.

2. Державна фармакопея України// Харків – 2001. – 527 с.

3. Перельман Я.М.Анализ лекарственных форм//Ленинград: Медгиз – 1961. – 618 с.