Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - 2001), страница 7

1993) ап|1 (2) сЬап8!п8 йе ехргевяоп чес|ог Егош опе соп|а|пш8 |Ье ). р ргогпо|ег со опе сопла!шп8 |Ье Т7 ргоп|осег. А!йои8Ь йе геви1|в оЕ гееп8!пеег!п8 йе рго|е|п аге 8гаг!Еу!п81у 1о8!са1, П !в !шровв!Ые |о ипс)егвлапс) лчЬу йе ехргевв!оп вув|еш вЬои1и |1гагпабсаПу !пйиепсе |Ье во!иЬПпу оЕГЬе рго|е!и ргос!исп Ав Е|егЬувЬ!ге е| а1. (1993) ро|п| ои|, й|в геви1| "егпрЬаявев |Ье !8погапсе оЕ |Ье Еасгогв йа| !пйиепсе рго|е!и очегргос)ис|юп ап|1 |Ье пеей !п с!!ЕЕ|си!г савев...|о лев| а гап8е оЕ ехргевяоп вувгешв, !пг)исг!оп ргососо1в апд рипйса6оп вггале8!ев." Ав сПвсивве|1 еагПег, а сопипоп в|га|е8у |о ачо!с) вопле оЕ |Ье ргоЫешв аввос!а|ей |чПЬ !пс1ияоп ЪосПев апл) рго|е!и геЕо1сПп8 !в со ехргевв |Ье ргосеш оЕ |п|егев| !и а Еивюп вуяе|п. 1п воше савев, рго|е|пв |Ьа| Еопп шс)ияоп ЬосПев лчЬеп ехргевве6 а!опе ш Е.

соП аге во!иЫе ъчЬеп ехргеввес! ав Еияоп рго|е!пв. ТЬе Еияоп раг|пегв оЕ сЬоке Еог ргобисг!оп оЕ во!иЫе рго|е|пв аге 5с)|!в!олог||а 81и|а|Ьюпе-5-|гапвЕегаве (5ш!|Ь ап|1 !оЬпвоп !988), Е соП ша1|ове-Ъ!пг)!п8 рго|е|п (Ма1Е) ЕМа!па ес а1. 1988), апс) Е со1|' йюге|1ох!и (ггхА) Е1,аЧаП!е е| а1. 1993; 5асЬ|)еч ап|1 СЬ!г8|ч!и 1998). ТЬеве вуяешв Паче ап абсП6опа! абчапга8е !п йа| йе Еияоп рагспег епдолчв |Ье Еоге!8п рго|еп| ч6|Ь врес!Еле ЪюсЬеписа1 ргорегбев |Ьа| 8геа|1у я|прПЕу рипйсабоп. Рог ехашр!е, Еияоп ргосешв соп|ашш8 Е соП йюгес!ох!и ассиши!а|е а| |юпев оЕ алев!оп Ъегччееп 15.10 С таргет 15.

Ехртеятап оЕ С1опес) Сепет сп ЕасЬепсЬта со1т ТАВЕЕ 15-4 Еуяа оЕ Вастепа Сои!а|и)пВ !ос!па|оп Воспеа 5асто ет а|, с)987); ВеИет ес а), (1988) Ооедс|е| ес а|. |1979Ь 8сЬшпасЬет ес а!. 1)986) 8сЬе)п апс) Ь)осеЬотп (1988) Со1)8ет апс) КоЬетта |! 987) Вопкатсоп РгепсЬ Ртея Ртееге-ТЬам Ьутогуте тЬе тппег апс| оитег итешЬгапеа оЕ тЬе Ъассепа1 епче!оре, |тоти мчЬеге тЬеу сап Ье ге1еааес| Ьу ояио6с 8Ьос)с ог Егеегшц апс| тЬачппц.

Лп а1тегпати е тпейос1 то стгсшпчепт Еопиатюп оЕ тпс1ияоп ЬосПеа ь со ехргея йе рготе|п !тоти а местот тЬат сопташа а рго1сатуобс яВпа! аес|иепсе. ТЬе пемм1у ауптЬеа|гес| рготе|п 18 тЬеи с)еПчегес| со тЬе репр1аапис арасе, счЬеге П шау Ье ао!иЫе. ТЬ|а тпетЬос1 смог)са Ьеат см|тЬ рготе|па йат аге попиаПу сгапа!осасес| што тЬе тестетогу ратЬсчау оЕ еи|сагуотк сеПя Рог ехашр1е, В|Р, тЬе ша)ог с1тарегопе оЕ йе еи1сагуобс епс|ор1ааппс гетки|ити, ь сошр1ете1у шао!иЫе мтЬеп ехргеааес) !и тЬе сутор1аяи оЕ Ьастепа, Ъит П сап Ъе гесочегес! !и а Ью!ок|саПу ас6че Еотш счЬеп ехргеааес| Етош а рго)сагуо6с аесге6оп честот |В1опд-Е1ВшпсП ес а1. 1993). Реар|те йетг сотпр|ех аттис!иге, |пс1ияоп ЪосПеа аопзе6тпеа ой:ег оррогтии!т|еа со ехтгаст Еоге|цп ргосе|па тп ап асбме апс| риге Еотш. ТЬе Ьаяс яерх тп йь ргосес|иге аге оп!Пиес| тп В|Вите 15-3 апс1 |и Ртотосо1 8.

ТЬе с||ЕЕтсст1т атера |и йь асЬетпе аге с1еаг1у тЬе ейк|епс 801иЬ|- Пгат|оп оЕ раг6аПу с|епатигес| аВВгеВатеа апс1 аиЬаес)иепт ЕоЫшВ оЕйе ро1урертЫе |иго а пат|че Еотш. Весасье ечету рготе|п 18 ссп|с|ие, по иптчегаа1 ает оЕ сопсПтюпа ехьь |о ассотпр!ьЬ тЬеае цоа!я Носчечег, дибич йе раас 20 уеагя аиссеыуи1 рготосо18 Ьаче Ьееп с|ечьес) то теЕ016 а !агре ишиЪег оЕ шсПчЫиа1 рготетпя апс) Еготп тЬеае, а ает оЕ Ьаыс ВшбеПпеа оЕ йе шетЬос|8 пюат П)се1у то аиссеес| Ьаа ешегаес!. Рог ехсеПепс тюигсеа оЕ Вепега1 астчтсе оп аП атацеа оЕ риг|Псатюп апс| гесочегу оЕ рготе|па Еготи |пс!ияоп ЬосПея р!еаае аее йе семсего агт|с1еа Ьу Мага!оп (1986) аттс| Мага!оп апс! Натт1еу (1990). 015тор6оп оЕ Вас|ет|а СопЕа|п|щ |пс|о5юп Войе5 Сеп|пЕттца||оп апд ЪЧа5|т|пц 1п тпоат сааея |пс!тыщи ЬосПеа сап Ье гесочегес1 Еготи йе Ьастепа1 1уаасе Ьу !осч-ареес! септпйцатюп (10,000 — 20,0009 ат 4"С).

Сопташ!пат|пВ рготе|па апс| пис1ек ас!сЬ сап Ье гепточес| Ьу ммааЬ!пд йе реПет сч|!Ь сю106опа сопта|пшд ЕРТА, с|етегкептя апс|lог РЫаае. Айет смааЬ|пВ, тЬе |пс|ияоп ЬосПеа 8Ьои16 Ье яьрепбед тп геЕо1сПпВ Ьийег 1асЫпВ йе ао|иЬт1ггабоп аВепт. ТуркаПу, тЬеае Ьийел соптатп ТпяС1 (рН 7.2), МаС! (50 шм), ЕРТА |1-5 тим), апс) а сос1стаП оЕ ртотеаае тпЬтЬттол (аее ТаЫе 15-5). 1Е |Ье патгче рготетп соптаиь по сПял1Пс1е Ъопс!я сПтЬю йгетто! |2 тпМ) йоиЫ а!80 Ье |пс106ей ТАВЕЕ 15-5 Сошропепо оЕ 'тАтааЫпВ 501ипопа Еот |пс1ияоп Воспеа Матяоп (1986] ВеЫет ет а!.

(1988) Ртоте8а ВооИет оп Ртотпю сутогутпе ЕНОТА т)еохусЬо)асе от Титоп Х-100 РЬ)аде Еуа!8 оЕЬастепа сопташ|пВ шс!тьюп ЬосПеа сап ВепегаПу Ье ассотпр1ьЬес| Ъу атапс|агс) шетЬосЬ, ргеаептес) ш ТаЪ|е 15-4. ТЬе сЬо|се ашоиц ЕЬеае шетЬосЬ ь тьиаПу сПстатед Ьу йе гапВе оЕ ес|и|ршепт тЬат ь ачат1аЪ|е апс| тЬе ргечюсь ехрег|епсе оЕ йе шчеат|Васот, гатЬег йап йе ргорегт!еа оЕ йе рготе)п ипс1ег атис)у. 'АритсЬечет 1уяа шетЬос| ь сЬоаеп, П ь мету пирогтапт то мчит)с с)шсИу апс) то еттаиге йас тЬе тешрегашге оЕ йе ргерага6оп с|оеа пот ехсеес| 4 С.

15.12 СЬаргег 15: Ехргеьыоп оЕ С1опед Сепеыи ЕьсЬегкЫа соП ьес)иепсе, 5 — 9 пис!ео|Ыеь ш 1епд|Ь, т|егас|ычПЬ 1Ье 3' епд оЕ 165 К!ч!А (ВЬше апд Е)а1дагпо 1974; дге(гх апд 1а)сеь 1975; дге!1х 1979). ТЬе йЯапсе Ьеочееп |Ье 5Ь!пе-13а1дагпо ьег)иепсе апд |Ье !п)6а6пд АТС сос)оп аЕЕесп |Ье |гапь)абоп еЕВс!епсу. 1п чессогь !п ччЬ~сЬ ап ореп геайпд Егагпе !ыпьег|е|1 доччпягеат Его|и ап !п|пабпд АТС, |Ье йыапсе Ъегъчееп |Ье Яипе-13а!дагпо ьес)иепсе ап|1 йе ии6абпд со|!оп чдП а!геа|1у Ьаче Ъееп орбт!хед. Но|чечег, (Е |гапь1а|юп оЕ йе с1опед ореп геайпд Егагпе !ь !п)г!агед а| |и о|чп АТС, йеп |Ье (п!г!аг!пд содоп ьЬои1д Ье роя6опе|1 5 — 7 пис1ео|Ыеь до|чпь|геат Его|и йе 8Ь!пе-13а!дагпо ье|1иепсе (К)пщи!ы е| а1. 1992).

ТЬе ьесопдагу ыгис|иге оЕ йе |гапь!а6оп !тба6оп гед(оп а1ю айес1ь йе еЕП|с!епсу оЕ депе ехргеььюп (де дои| апд чап Е)и!п 1994а,Ь). 1п ьечега! саьеь, сЬапд!пд |Ье ьециепсеь ирыгеат апд догчпыгеат Егогп йе 5Ь!пе-Е)а1дагпо ьес)иепсе |о гедисе ьесопдагу ь|гисгиге Ьаь !псгеаьед депе ехргеьяоп (е.д., р1еаье ьее СЬеп е| а1. 1994). 5)пп1аг1у, |гапь!а6опа1 соирПпд, |чЫсЬ (пчо1чеь р!асшд йе сойпд гед(оп оЕ |Ье депе оЕ ш|егеьг до|чпыгеат Егот а ггапь)агед ьес)иепсе, Ьаь!ед со Ь!дЬ-1ече1 ехргеьяоп оЕ а пи|пЪег оЕ депеь (Ма)соЕЕ апд дтаПччоод !990; Капдчча!а е| а!. 1992).

Сое(оп !.)Ваке ТЬе депебс соде В гедипдап|, ияпд 61 содопыо ьрес(Еу 20 апипо асЫь. Оп1у гччо апипо асЫь (Ме| апд Тгр) аге ьрес|йед Ьу а япд1е содоп, |чЬегеаыЬе гета|п|пд 18 аге еасЬ ьрес(дед Ъу пш16Р1е содопь. ТЬе ьупопутоиь содопыЬа| ьрес!Еу а япд!е апипо асЫ аге по| иьед члй е|)иа! Егесрлепсу (Сгапйагп ес а1. 1980а,Ь, 1981). 1Е йе сойпд гед!оп сои|а!пь а Ь~дЬ !ече) ог а с1иьгег оЕ гаге содопь, гетота) оЕ |Ье гаге содопь Ьу геьуп|Ьеяь оЕ йе депе ог Ъу пш|адепеяь сап !псгеаье ехргеьяоп (Капдчча!а е| а!. 1992). Рагиси1аг ргоЫегпь Ьаче Ъееп оЬьегчед |чЬеп йе |агде| ье|)иепсе сои|а!пь |Ье гаге содопь АСА апд АСС, япсе йеу а)ьо сап 1опп Еог|ш|оиь 8Ь!пе-13а)дагпо ьес!иепсеь гч!й!п йе сойпд гед(оп (1чапоч е| а1. 1992).

ТЬе Е))ь(А ьес)иегке епсойпд йе апипо гегт!пиь оЕ |Ье Еоге!дп рго|е!п сап дгагпабсаду !пйиепсе ехргеьяоп )ече)ь (Вагпеь е| а1. 1991). Рог |Ь!ь геаюп, й |ь ьоте|ипеь песеяагу |о иье |Ье ро1угпегаье сЬаш геас6оп (РСК) ог я|е-йгес|ед ти1адепеыь (СЬар|ег 13, Рго|осо!ь 4 — 6) |о сЬапде |Ье ЕЗУСА ьег)иепсеь оЕ |Ье Вгы ьечег| ог е!8Ьг содопь оЕ йе ехргеььед депе |о |Ьоье |поьг Егес)иеп|1у иьед |п Е. соП (Веппегхеп апд НаП 1982). ТА|Ьегечег роьяЫе, |Ье (С+С) соп|еп| оЕ йе 5' епд оЕ йе |агде| депе ьЬои!д Ье гедисед Со (40оуо Ьу йеье ргоседигеь. Ор6птиа1!оп оЕ Сгочйп Сопе!!6оп8 Еггеьрес6че оЕ йе ехргеььюп ьуь|еп| иьед, |1гатабс ййегепсеып ехргеьь|оп 1ече1ь аге оЕ|еп геа1- |хед ш ЖЕЕегепг п|ейа (ЪЧек)сегг е| а!.

1996). А ыапдагд тейшп ьисЬ аь ЬВ сап Ье иьед |о еь|аЬ- ПьЬ |Ье депега1 рагап|е|егь оЕ ехргеьь!оп, Ьи| ор|ипшп ехргеыюп, Ьоччечег, и ия|аду асЬ~ечед оп!у аЕ|ег тойдса|юп оЕ йе дго|ч|Ь сопй6опычЬкЬ гпау )пс!иде ияпд а пип!п|а1 ьа!|ь тейшп якЬ аь М9 (р!еаье ьее Аррепйх 2), |1едпед ьа)гыпейшп ьисЬ аь !пдис|юп п|ейшп (Рго|осо1 4), ог псЬ п|ейа ьисЬ аь Тегпдс Вго|Ь, г'Т, ог Ь(г.С'г'М (Аррепйх 2). Рог Еиг|Ьег |п(оггпа6оп, р!еаье ьее йе рапе1 оп ТКО11ВЕЕБНООТ1й1С Айп ОРТ1М1УАТ!Ой ОЕ РКОТЕВ|1 ЕХРКЕ5- 51О!ь| ЕКОМ Ай!!|101|С1ВЕЕ РКОМОТЕК а| йе епд оЕ Рго|осо1 1.

1пс ойигппп 15.13 ТЬ!ь еЬарсег дегкг!Ьеь спесЬода Еог сопасгпссш8 апд ргосЬлссп8 6ляоп ргосеша апд шсасс попЕпяоп ргосе!па лп Ьаесегда пяп8 а чапесу оЕ д!ЕЕегепс чессогя ЬсопЕпяоп ргосе!па сап Ъе ргодпсед лп Ьассег!а Ьу р!асш8 а асгоп8 геВп1асед ргошосег апд ап ейксепс гЕЬоаогпе-Ьспд!п8 ясе прасгеаш оЕ сЬе с!опед депе. Рпяоп ргосешь сап Ье шаде ш 1аг8е ашосспся аге еаьу со рпг1Еу, апд сап Ье паед со е1кЬ а геаропае ш ппшппо1о8!с ог Ь!о!о81са! аьаауя Еп!гагуоск ргосеспа ехргеааед ш Ьассег!а! вуасешыпау 1ас!с шлрогсапс ргосеясп8 ог шод1Елеасюп гелсшгед Сог ргорег Еппсссоп.

Ехргеааюп ауасеша Ьааед оп ЕЬе пае оЕ Ьаеп1очсгпа чессогь Ьаче ргочеп Со Ье Сгешепдопа1у пае6л! сог СЬе ЕасСЬ6л! ргодпсйоп оС Еоге18п рголешя 6ляоп ргосешя апд яшп1сапеопа ехргеаяоп оЕ слчо ог пюге (пр со Еоог) ргосеспя Рог 6лгсЬег деса!!я р1еаае аее ЕЬе ЕпЕогшасюп рапе! оп ВАССЛСОЧСКСЛ5Е5 А!90 ВАССЛЕОЧСЙСС5 ЕХРЙЕ55!ОМ 5Ч5ТЕМ5 ш СЬарсег 17.

Ргосоео1ь Еог ЕЬе оае оЕ сЬе Ьасп1оч!гпа ехргеаа!оп ауасеш шау Ъе Еоппд !п 5рессог ес а1. !1998; СЬарсег бб оЕ СеПя А ЕпЬогагогу Мапиа!1. Рго1осо! 1 Ехрге~ьюп ог С!опес1 Сепеь ~п Е сой Быпц ! РТС-~пс1ис~Ые Ргогпо1егь )АЗМ!о5 сАккч)нс )5оккокчь))-о-тнюсА)Асто5ве (!РТС)-)пг)ис)Ые ргошогега аге сараЫе оЕ ехргеаа!п5 ргосе)па ас!ече15 !Ьаг ехсеег) 3096 оЕ гога! шаха оЕ Ьасгег)а! рго!еш. ТЬеае р)аяп)г)а аге чче!1-ашгег) Еог япа!1-вса)е 1аЬогагогу ехрег!шепгя Ъиг ЕЬе Ь)ВЬ соаг оЕ 1РТС ргечепга гЬе)г иае Еог )агке-ьса1е ргог)исгюп о1 Еоге!кп ргогешя Чаг)аЫеа ЕЬаг )пЕ)иепсе гЬе еЕ)1с!епсу оЕ ехргеаяоп оЕ Еоге)кп ргоге!па 1гош гЬеае апг) оЕЬег ехргеааюп р!аяп)г)а аге г))асиааег) !п гЬе рапе1 оп ТВОЕ)- ВЕЕ5НООТ!)х)С А)х0 ОРТ!М!ЛАТ!ОГх ОГ РКОТЕ!Гх ЕХРКЕ55!О)х) ГКОМ Ай !)ЧОЕ)С!ВЕЕ РКОМОТЕК аг ЕЬе епг) оЕ гЬ)а ргогосо1.

Е!СЕ)КЕ 15-4 СЕМ-ЗУ. Чес!ог ТЬе рСЕМ-Зс чес)ог гпау Ье иаег) Еог )и чгпо сгапаспркоп апВ ргоге!и ехргеаа)оп. ТЬе чесгог епсог)еа )Ье ЕасЛ а рераг)е ргесег1ег! Ьу Iас орегоп аег)иепсея ЕЬе ТУ апг1 5Р6 ро)угпегаае ггапаспргюп !п)г!аг)оп ьег)иепсеа Е!апК!пк ТЬе гпи!Вр!е с!оп!пц яге, апд )Ье В-!асгагпаае-сог)!пд аег)иепсе ЕЬаг сопЕега агпргс)!!)и геа)а)апсе.

)Мог)!Е!ег), чч!ГЬ регш)аа)оп, Егош Ргошека Согрога)юп.) 15.16 СЬаргег !5: Ехргевя)оп оЕС1опес) Сепея Гп ЕясЬепсЬ!а со1| МЕТНОев Соп5$гос6оп оЕ а Ягагп оЕ Е. сой Соп$аяп!пе 6|е Кесоп|Ь!папЕ Ехрге55юп тГес$ог 1. Мос)!ЕуЬу РСК ГСЛаргег 8, Рго|осо1 7), ог !во!ага Ьу гея|пс|юп епгугпе 6!рея!!оп, а ЕгаВшеп! оГ Е)ЪГА саггу!пВ 5'- а|Ы 3'-гея|гк6оп епгуше ы|ея со|пра6Ые чч!ГЬ я|ея |п ап 1РТО- !пс1ис!Ые ехргеяяоп чес|ог. Мсы ГРТО-шсисаие ехргевяоп чес|оь соп|аш аП оГ йе сопсгоП)пП е!еп|епь гес)и)гес) Гог ехргевяоп оГ Гоге)ап рго|е|пв. Г)ве РСК |о гпос)|Ту йе епс)в оГ |Ье сЕ)ЫА)аепе со Ье ехргеввес) во йа| по ех|гапео|ь Пал)с)па вес)иепсея аге )ис!ис)ес) ш йе сопя|гас|. Перепсппц оп йе чес|ог апс! рге1ип|пагу гехи!|п о|Ьег гехи!а!игу вес)иепсев сап Ье ас)с)ес) |о |Ье епс)в |о Гасана|в ехргевв!ои !р!саве яее |Ье рапе! оп ТКОГ)ВЕЕ5НООТПЧС А)с)О ОРТ!М!ЛАТ!ОЫ ОЕ РКОТЕПс) ЕХРКЕ5- 5!О)с) ЕКОМ А~Ч !ЫОЕ)С!ВЕЕ РКОМОТЕК а| П|е епс! оГ|Ь|е рго|осо!).