Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - 2001), страница 9

ТЬе у|еЫ оГ р!аяиЫ РХА (то|и якЬ ктгашк, а1ЪеК ге|1исед, Ь киГГтс)епт Гог и|оя ригрокек |п шо!еси1аг с!ошп8. 1Г |Ьеге Ь геакоп со кикрест йа| а р!аяпЫ тпау саггу гереа|ед РХА кес)иепсек |Ьа| аге киЬ- яга|ек Гог |Ье 8епега1 гесошЬ!па|юп кук|етпк о( Е. со18 сопядег йе рокяЬ|1!|у оГ къч!тсЬ(п8 со а гесогпЪ|па|юп-|1ейстепт к|гаш. Рог ехашр1е, яга|пк саггуш8 а гесА пшта6оп Ьаче а1пюкт по гесотпЬ|па|юп сарасду ( ъче!иктос)т ! 987) апд аге йе ргеГегге|1 Ьокш Гог |папу |аг8ебп8 чес|огк яке|1 |п 8епе )тиос)т-оит ехрептпеп|к ш шке, я|сЬ ак чессогк йас сопсаш |ъчо сор|ек оГ а ч!га! ГЬуш(д!пе Ыпаке Вепе, ътътауъчагд шкегь сап а!ко Ъе ктаЬт1|гед |п яга|пк саггу!п8 тесВ ши|а6опк, ъчЬ|сЬ |пас6чате ехопис!еаке ът апд гедисе Вепега! гесогпЪ|па6оп |о а Геъч регсепт оГ иогша1. Бпа!1у, ипргочед у|е!дк оГ сегса!п р!аяпЫк Ьаче Ьееи герогтед ш к|та(пк дейс(еп| !и ВОБ гера!г ог Р)ъ)А гера!г йат саггу иш|абопк ш йе итиС апд пч С Вепек (РоЬегту е| а1.

1993). 1пчегтед гереас кет)иепсек аге оГтеп !е|Ьа! |о |ЬеЬ сагпег р!аяпЫ. ТЬик, гесошЪ|папт р1ак- пи|Ь сои|а!п(п8 регГес| ог пеаг-регГес| шчег|ес1 гереагк !оп8ег йап -300 Ьр (а|1 |о |гапк(опп сопчептюпа1 Ьок| ктгашк оГ Е. соВ ог до ко чдй чету!оъч еГГтс!епсу.

1п шапу сакек, йе Го|сед ргора8а6оп оГ кисЬ с!опек ргочо1|ек |псегпа! с1е!ебопк ог ойег геаггап8ешеп|к йа| гепюче |Ье сеп|ег оГ купипе|гу оГ йе ра1|пдгогпе (е.8., р!еаке кее На8ап апд 'ъътаггеп !983). 5ет)иепсек сопгаиип8 Ьеад-то-Ьеа|1 ра1(пдгоп|ек аге!е|Ьа1, регЬарк Ьесаике |Ьеу и|Ь!Ь!| Р)ъ!А гер1ка6оп Ьу !псегГег!и8 чд|Ь йе ракка8е оГ гер1!са6оп Гог)ск ог Ъесаике |Ьеу де1есег!оик!у аГГесс |Ье ктате оГ я|регсо!!ш8 оГ йе р1аяпЫ, 1еачдп8 К ореп то аиас1| Ъу пис!еакек (Со11шк ап|1 НоЬп 1978; Ы1еу ! 980; Со11|пк 1981; МЬш|сЬт е| а1. 1982; На8ап ап|1 ъъаггеп 1983).

Хо к|гаш оГЕ. со!! ехЬЬ |Ьас Ь 8иагапсеед |о ргора8а|е а11 гесошЪ|пап| с1опек сиота(п!п8 ра1ин1гопис кетр|епсек. Е. соВ к|гагик саггу|п8 пштабопк |и тесВС ап|1 кЬсВС Вепек чд11 киррогт 8гоъч|Ь оГ р!аяпЫк сопсаш|п8 сегса|п ра1|пдгогпк кет)иепсек оГ а чапе|у оГ ягек апд коигсек. Ноъчечег, р1актпнЬ ъчЬЬ а со!Е! ог!8!п аге ипк|аЫе (и тесВС, |ЬсВС Ьоктк Ъесаике йеу Гопп 1|пеаг пш!|ипегк (е.8., р!еаке кее СоЬеп ап|1 С1аг)с 1986), ъчЬ~сЬ аррагепду (итег(еге ъчЬЬ гер1ка6оп апд рагбтюп оГ сЬгогпокотпа! Р!ъ!А (Кикапо е| а1.

1989). Ми!6гпег Гоппа6оп Ь с1ерепс1еп| оп а киЬке| оГ ртосе!пк шчо1че|1 ш |Ье Кеср гесоп|Ьтпа6оп ра|Ьъчау Гипс|!оп апд доек по| осси| |п се11к йат аге дейс|еп| |п КесК Кес), КесА, КесО, ог Кес( т Гипсбоп. Оп!у а Геъч кгга!пк де8с|еп| |п тесВС ап|! кЬсВС 8епек аЬо сои|а!п пю|аиопк |Ьа| е!|тпгпа|е а!! )тпоъчп гектт!сВоп кук|етпк. ТЬеке |пс!иде Ртч|С1 28, ъчЬ!сЬ |к тстАЯтстВС-Гткс)-ттт)тесВС к(тсВС (РоЬет|у е| а!.

1993), алд Я/КЕ, апт! 588 (Втгаса8епе), ъчЫсЬ сагту к!т!!аг пштадопк. Р(па!!у, !Г р!аяпЫ честогк аге ике|1 Го ргора8а|е |пейу!ате|1 РХА (е.8., шапипа1|ап Вепошк Р!ъ)А ог РХА куп|Ьеягед |п ч!тго ияп8 тпе|Ьу1а|ес1 апа!о8к оГ |1еохупис!еокЫе сг!рЬокрЬатек), |Ьеп !т Ь еккеп6а! |о ике а к|гаш йат Ь с1ейс|епт |п йе МсгА, МсгВС, ап|1 Мгг|МсГ гектпс6ои куктешк.

ТЬе МсгА апд МсгВС куктешк гесо8пые апд гектпс| сегса|п Р)ъ)А кес)иепсек сопса|пш8 |пейу1а|ед су|ояпе гекЫиек (Ка!е!8Ь апд чът!1коп 1986), ъчЬегеак йе Мггт'Мс( куктеш гесо8пыек 7.1б СЬаргег 7: Р!алт!Ь апг! ТЬегг Ие)и!пея !и Мо!еси!аг С!отце апд гез|псь сег|а!п РЫА лес(цепсеа сопла!п(и8 тегЬу1агед адеп!пе РЫА ге|Ыцеа (Не!гтап апг! Мо|!е1 1987), аа лчеП аа а|ЫКюпа1 Р!чА лес)цепсеа |Ьа| сои|а!п п|ейу1а|ес1 сугояпе геябцея Ецг|Ьег !игогтаг!оп оп геа|псбоп тосППса6оп ауяепь сап Ье оЪга!пе6 (гот КЕВАЕЕ, |Ье Кеяпс6оп Епгуте РагаЪазе аг Ьггр:Вжчлч.пеЪ.сот7геЪаае.

рог пюге де|аПа оп йе ргорегг!еа о( цаегц1 Е. соБ ||га!пя аее АррепсПх 3. ЕХТКАСТ!ОМ А1ЧО РЕ)В!Г!САТ!ОМ ОГ РЕАЬМ!О ОНА Мапу те|ЬогЬ Ьаче Ьееп г!ече1оре6 |о рцг!гу р1аяпнЬ ггот Ъас|епа. ТЬеае тегЬосЬ !пчапаыу !пчо1че |Ьгее агеря ° рожЬ ог |Ье Ьас|епа1 сц!|иге ° Ьагчезг!п8 апд 1уяа ог" |Ье Ьас|епа ° рцпйса|юп ог йе р1аяпЫ Р)ч)А Сгорай!л о! г!ле Вас$ег1а! Си!!иге 'чл|Ьегечег роаяЫе, р!аяпнЬ аЬоц16 Ъе рцпйе|1 ггот Ьассепа1 сц!гцгеа |Ьа| Ьаче Ъееп шосц1а|- е6 лч|й а яп8!е ггапагогте|1 со1опу р!сЬед (гот ап а8аг р1а|е.

(ЛцаПу, |Ье со1оиу !а |гапа(егге6 |о а япаП агаггег сц1шге, лчЬПсЬ Ь Вгоччи |о !а|е 1о8 рЬале. А)н!нога ог" йы сц1|цге сап Ье цаег) |о ргераге япаП апюцпь ог" |Ье р1аяпЫ РЬ)А (т!и!ргерагаг!оп) гог апа1уяа ап67ог аа |Ье |посц!ши (ог а 1аг8е-аса!е сц1|цге.

ТЬе сопсП6опа о18гохгЬ о( |Ье 1агПе-аса!е сц1|цге стерео|! сЬ|ейу оп |Ье сору ишпЬег ол |Ье р!аяпЫ ап|1 ччЬе|Ьег П гер1кагеа ш а агг!иВепг ог ге1ахел! (ааЕПоп (р1еале аее ТаЫе 1-3). Ас аП липея |Ье ггапа(огтед Ъас|епа аЬоц16 Ье Вгоччп ш ае!ес||че сои|(1- |юпя !.е., ш йе ргеаепсе ог йе арргорпаге ап6Ь~обс. Нагче86щ апг! Еу818 о11Ье СиИиге Вас|епа аге гесочеге6 Ьу сеплг!гцВал!оп апг! 1уаег! Ъу апу оие ог" а 1аг8е пцтЪег ог" тейобя шс1цсПп8 Сгеа|теп| чч)ГЬ поп|отс ог юп|с Пе|ег8еп|я ог8аи!с ао!чеп|я а1ЬаП, апс! Ьеа|. ТЬе сЬоке атоп8 |Ьеае гпегЬосЬ !а сПсга|е|1 Ьу йгее (ас|огя йе яхе ол |Ье р1аяпЫ, |Ье алга)и о( Е.

со!1, апд |Ье |есЬпнрле лье|1 ялЬаег)цеп|1у |о рцп(у |Ье р1аяпЫ РЫА. А1|ЬоцВЬ и Ь цпргас6са1 |о рче ргес!ае сопсП6опа гог аП роаяЫе сотЪ)паг!опа ог р1аяпЫ апс) Ьоаг, |Ье (оПоъпп8 Вепега1 ВцЫеПпеа сап Ъе |ьед |о сЬооае а п|е|Ьос1 |Ьа| ъпП рче ааг!а(асгогу гели!|я Гагре Р!аитгг78 ('>15 7г7л гп 5|ае) Ми81 Ве Напсйег7 ъиЯ Саге Р!аяпЫа >15 )сЬ |п яхе аге |насер!!Ые |о г!атаВе с!цг!и8 Ъой сеП 1уяа ап6 ацЬ|ес!цепг ЬапдПп8.

Сеп|1е !уяа Ь Ьея ассотрП|Ьес1 Ьу ацарепг!!п8 |Ье Ьасгепа и| ап ьояпобс |ю1ц6оп о( ацсгоае апд ггеаг!п8 |Ьегп лч!|Ь 1уаогуте апс1 ЕРТА (е|Ьу!епесПапцпесе|гаасе|к асЫ), ччЬПсЬ геточеа итсЬ ау |Ье сеП ччаП. ТЬе гелц1г!и8 арЬегор1ааь аге 1уае6 Ьу адсПп8 ап атопк г)егег8епс гцсЬ аа ЯРЕ, рог те|Ьос)а гог Сепг!ег Ьапг!1ш8 ог' 1аг8е РЫАя р1еаае аее |Ье !игогтал!оп рапе1 оп М|Н|1- М!21Н|С 0АМАСЕ ТО ОН|А МО!.ЕСГЛ|.Е5 |и СЬар|ег 2. БтаИег Р!аьтгг78 ('(75 7гЬ лп Яке) Аге Моге ОигаЫе 'чл|Ьеп Ьап|Пц|8 япаПег р!ааппбя тоге аечеге тегЬо|Ь ог !уа!а сап Ье наес!, апс( по арес!а! саге пеев Ье гаЬеп го пцппп|хе |Ьеапп8 Уогсея ТуркаПу, Ьас|епа1 яьрепяопз аге ехровег) |о дегег- !пггос)исе(оп 1.17 ТАВЕЕ 1-3 Р!аяпЫ Сгои||Ь апа Кер1каиоп цта!ысеят КерисОн (ЕхАмрсе) СОРУ )ч)омВеа ОВ Ке|Ахео Соммемт5 Мой6е|1 рМВ| (р()С) ьечега1 Ьипс)тес) ге1ахес) рБС р!аяпиЬ соп|аш а гпосПГтег) рМВ1 гер1коп апс( гер1ка|е |о а чету Ь~ВЬ сору пшпЪег.

РшсЬег ашр116сабоп оЕ |Ье сору пшпЬег Ьу ас)йт(оп оЕ сЫогагпрЬеп|со1 |о |Ье Вгоиппц Ьас|епа) си!- |ше Ь иппесеыагу; Епяеай сЬе си1|ше ьЬои18 Ье Вто|чп |о 1а|е !о8 рЬаье |чЬЬ ч|цогоы ьЬаЫп8. ТЬе у(е!д оЕ рВК322 ап6 о|Ьег ге!ахес) р1аяпЫыЬа| тпа|п|а|п а 1онч-п|о|1ега|е сору пшпЬег ш |тапа(оппе|1 се)1ь сап Ье с)гашас- ка!1у (псгеаьес( Ьу аг)йпц сЫогап|рЬешсо! (6па1 сопсеп|гапоп 170 р8)ш1) |о шЫ-)о8 рЬаье си!шгеь апс1 сопл(пшп8 )псиЪа6оп Еог а ЫОЬет 8 Ьоигь.

СЫогашрЬепко! ЕпЬ~Ь|ь Ьоя рго|е(п ьутпЬеяь ап|1, аь а геяй, ргечепть ер1ка6оп оЕ |Ье Ьоя сЬгошоьоше. Но|нечет, гер1(са6оп оЕ те!ахат) р1аыпиЬ соп6пиеь, апт( |Ье(т сору пип|Ьег шсгеаьеь ртоцгеььье)у Еог ьечега! Ьошь. со!61 (рВК322) !5 — 20 ге1ахег( р5С!01 (р5С101) -5 яппцеш 5тг(пцепт!у гер!каип8, )о|ч-сору-пшпЬег р!аяпЫь сап Ъе а сЬа1- 1епце |о Вго|ч. ОЬчюиь!у, ат(сцпц сЫогашрЬепко! |о йе си1шге ы по| ап ор6оп апс) |Ье ов!у ача|1аЫе чапаЫе В |Ье си1|иге шейшп.

Рог ехагпр)е, "Теп|6с Втой," |чЫсЬ Ьаь Ьееп герог|ес1 |о |псгеаье |Ье у1е16 о( й(6си1| р!аяпЫь (Таг|оЕ ап|1 НоЬЬь 1987) пиВЫ Ье а Ьепег ориоп йап ыапс1ай ).ипа Втой (ЬВ). цепс апс1 !уьесГ Ьу Ьоцшц ог ггеа|шеп| иг(ТЬ аПсаП. ТЬ~5 йьгирь Ъахе рапшц апс( саиьеь |Ье 1шеаг 5|гегсЬеь оЕ 5Ьеагес( ог йьгир!ес( сЬгопюьогпа1 Р)хтА оЕ |Ье Ьоь! со г)епагиге.

Но|нечет, ТЬе ьсгапс!5 оЕ с!оьес! с|гси!аг р1аяпЫ Р!5)А аге ипаые со ьерага!е Егогп еасЬ о|Ьег Ъеса|ье |Ьеу аге !оро1оц(сацу (п!еггъч(пес). ньгЬеп сопйьопь аге ге|игпес1 со погша1, |Ье ьггапс(ь оГр!аяпЫ Р)н)А ЕаП |п|о регЕес| гец15!ег апс1 па6че ьирегЬе1ка1 пю1есы1еь аге ге-Еогтпес1. Рго1опцесГ ехроьиге |о с(епагиг)пц сопйПопь са|ьеь с1оьес1 с|гоп!аг РЫА |о еп!ег ап !ТгечегяЪ)у с1епа|игес1 яасе ( ьг!поцгас( апсГ ГеЪоьч(гх 1966).

ТЬе гея|16пц соПарьес) со~, |УЬ|сЬ саппог Ье с)еанес( ьч(ТЬ геяйсПоп епгугпеь, ппцга|еь |ЬгоицЬ ацагоье це!ь а| аЬош мке |Ье гасе оГ паПче ьирегЬе1ка! с1оьес( с|гси!аг Р)чтА апс1 5|а(пь роог1у |УКЬ |п|егса1аПпц с!уеь |шсЬ аь е!ЬГЙ- шп ЪгошЫе. |гагу(пц апюипь оЕ |К|5 соПарьес1 Гогш оГ РЫА сап иьиаПу Ье ьееп ш р1аяпЫ5 ргерагес! Ъу а!ЬаПпе ог ГЬеппа1 !уяь оГ Ъас!ейа. Боте бегать ОЕ Е.

со1! ЯтоиЫ)х(ОГ Ве Еу5егЕЬу Неар цогпе 5|га!пь оГ Е. со!т', рагПси1аг1у |Ьоье с(ег(нес( 6 ого НВ101, ге1еаье ге!аПче1у 1агце апюип|5 оГ сагЬОЬус)гаге ьнЬеп |Ьеу аге !уьес! Ьу с!е!егцеп! апсЕ Ьеас. ТЬ(5 сап Ъе а пшьапсе |чЬеп |Ье р1аь- п|Ы Р!5)А ь ьиЪье|1иеп|1у риглТлес) Ьу ес!шПЬНшп сеп|Н6лцагюп |и сеяшп сЫогЫе (С5С1)- е| Ь|йшп Ьгоп|Ые цгайепь. ТЬе сагЬОЬус)гаге Гогшь а с(епье Еихгу Ъапс! с1охе !о ТЬе р1асе (п | Ье Аь Втьсиьвеа аЪоче, йе сору вшпЬегв оЕ йе сиггеп| Вепегатюп оЕ р1аяпЫь ате па|ч ю Ь|ВЫЬа| ье|еспче ап|р66саиоп |в |Ье ргеьепсе оЕ сЫоташрЬепко1 Ь по 1опВег геии!геа |о асЬьене ЬтВЬ у|еЫв оЕ р!аввгЫ ОНА. Нов ечет, вотпе шчевица|ить соп|шие |а иье сьигап|рЬев|со1, во| песеяап|у |о |псгеаье йе у|еЫ а! р!авпгта ОНА Ьи| то тег(исе |Ье Ьи!Е о( Ъас|епа1 се11ь ш!аг8е-вса1е ргерагапопь.

Нап86п8 !а|Ее оиавтшев оЕ чисоив 1уьатеь оЕ сопиев|тате|( вырепяопь аЕ Ьас|епа я а Егиятвбв8 ава тпеяу Ьияпея |Ьа| сав Ъе ачоЫес) |Е сЫогашрЬешсо! Ь асЫеа |о йе си1ште а| |пЫ-1о8 рЬаье. Весаиве сотое ап|р!|6са|юп аЕ сору питвЬет — енеп оЕ висЬ 6.'чепьЫу герВсвтш8 р1аяпЫь аь рНС вЂ” оссигв |и йе ргеьепсе оЕ сЫогап|рЬешси1, ес|шча|епг у|еЫв о! р1аяпЫ ОНА аге аЬ|ашеа Егоп| япа1!ет пшпЬетв оЕ се1|ь тЬа| Ьаче Ьееп ехровеа то йе аги8 аь Егош !аг8ег пшвЬет о( сеПв |Ьа| Лаю по|.

618 С/гггргег 1: Р/азтиЬ апг/ ТЬеи (/зе/й1иезз |и ЛГо!еси1аг С!ои/и8 Вгаб(епг (р = !.59) оссир(ег! Ъу |Ье зирегЬе1ка1 р1аяпЫ РЬ(А.!| 1з йегеГоге сИГ|си!г |о ачоЫ сопгат(пайпс |Ье р1аяпЫ РХА |чВЬ сагЪоЬу|1га|е, |чЬкЬ )пЬ|Ъ|ь йе асг)ч(гу оГ гпапу геяпс6оп епхутез ап6 ро!утегазез. Во)1!пВ зЬоиЫ |ЬегеГоге пос Ье изе6 |чЬеп та)г)па !агре-зса1е ргерага6опз оГ р1азт16з Ггоп| з|га(пз оГ Е. со1/ зисЬ аз НВ101 апг! ТС!. ТЬе Ьо)!ша гпе|Ьос( а!зо В пос гесоттепг)ег! |чЬеп таЫп8 япа!1-зса1е р1аяпЫ ргерага6опз Ггпу з|гашз оГ Е. со1| |Ьас ехргезз епдопис1еазе А (епг/А' з|га|пз), |чЬ|сЬ |пс1и|1е НВ101.

Весаизе епс(опис!еазе А ь по| соп|р1есе1у 1пасйчагег! Ьу |Ье Ъо)!!пав ргосе|1иге, |Ье р1аяпЫ РХА 1з г!еВгаг!ег! 6иппВ зиЬзег)иепг |псиЬабоп ш |Ье ргезепсе оГ МВ|+ (е.В., 6иппц (псиЬа6оп |ч1|Ь геягк|юп епхутез). ТЬ)з ргоЫеп| сап Ье ачоЫед Ъу 1пс1иг!1па ап ех|га з|ер — ех|гас|юп |ч(|Ь рЬепоЬсЫогоГогт — |и |Ье рипВсабоп ргососо1. Рог!Ека11оп оЕ йе Р!аяпЫ 0МА А)1 |Ьгее гпе|Ьог)з оГ 1уяз у(е16 ргерага6опз оГ р1аяпЫ РХА йа| аге аЬчауз соп|апипа|е|1 |ч)|Ь сопыс1егаЫе г!иап66ез оГ КМА ап|1 чаг)аЫе апюипь оГЕ. соЕ сЬгоп|озогпа! РХА.