Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - 2001), страница 8

Моат шобегп 1олн-сору-пишЬег честоь а!ао сагту рат 1ос) йа| рготпо|е ассига|е раг66ошп8 оГ р1ая шЫ шо1еси1еа шсо с!аи8Ьтег сеП| дипп8 сеП т)!ч)аюп. Ргоыепь оГ р1аяпЫ |па|аЬППу шау а1ао Ъе ао1че6 Ьу |ып8 ап Е. соВ а|та!и йа| ялрргетьеа гер1кабоп оГ со!Е1 р1аяпЫы Моат а|та)па оГ Е. соВ наес! аа Ьоата Гог со!Е1 р1аяпЫа саггу а ич16-туре чегыоп оГ а Пепе )спотчп аа рспВ, тчЬкЬ сос1еа Гог ро1у(А) ро1ушегаае. чт'|!се-туре рсиВ ртошотеа |Ье |1есау оГ Клх!А1, йе пе8а6не те8и1аСог оГ сору пшпЬег оГ со1Е! Р!аяпнЬ, Ьу адсПп8 ат)епу1ате геаЫиеа |о йе 3' |еппшгь оГ К19А1.

1п Ьа ро1уас!епу!атес! |опп, КХА! Га Ь!8Ыу ипатаЫе апт! Га йегеГоге ипаЫе |о ргечеп| Гоппа6оп оГ КЬ)А11, |Ье рпшег Гог р!аяпЫ РХА аупгЬеа)ы 1п атгашт оГ Е соВ Ьеат)п8 а пш|ап| рсиВ аПе1е, КЬ)А! гетпапь ипа|1епу!ате|1 ап|1 |ь Ьа1Г-Ие )а ех|еп|1е|1. Ргосеьяп8 оГ КХА11 ь ялрргеье|1 апд |Ье сору пшпЬег оГ со1Е1 р1аяпЫа 1а |ЬетеЬу тес)осев Ьу а Гас|от оГ -10. Мапу гесотпЬ)пап| со1Е1 р1аяпнЬ йа| аге ипатаЫе |п сопчеп6опа! Е, со1| Ьоата сап Ье 8|о|чп ялссеьГиПу тп рспВ шитапт атгаша (Не е| а!.

1993; ЕП)а е| а1. 1995; Ро|П|очгуоч апт) Еагаоп 1995; Р!егаоп апт! Вагса)с 1999). йипататау-гер)ГеаГГоп Р!ахтГгГ Мес1огь Кипаччау чессота гер1ка|е !п а поппа1 Га|Ь|оп ас секрета|иге| ир со 34'С. Но|нечет, йе|г сору пшпЬег !псгеааеа аа йе |ешрега|иге оГ йе си!шге ь гаьес) ип61, ас 39'С, р1аяпЫ гер1кабоп Ьесошеа ипсоптгоПе|1. ттестогз Ьааед оп |Ье 1о|ч-сору-тип|Ъег 1пср!! Р!аатпЫ К! Ьаче Ьееп сопчет|е6 то гипа|чау-гер!ка|юп честит| Ьу аг66с|аПу )псгеаяп8 йе гаге оГ ауп|Ьеа!а оГ герА шКЬ)А, Гог ехашр!е, Ьу р1асш8 |Ье герА Пепе побег йе соп|го! оГ йе ЪассегюрЬа8е Х рх ог рт ргошосег.

ТЬе аст!ч)ту оГ йь ргошо|ег ь !п тигп соп|гоПе|1 Ьу йе сетпрегатите-аепят!че ) герге|ьог с1857 (Гот геч!ечч, р1еаае аее Могс)а|тою ап6 УИ|п 1992). Веса|ье гипа|чау ашрППсатюп оссига ш йе ргеаепсе оГ рготеш аупйеыя йе ехрге|ье|1 рго|Ьк| оГ а Гоге!8п РХА с1опе|1 ш а гипа|чау р!аяпЫ шау ечеп|иаПу сои|6|иге 50Фо оГ |Ье рго|еш ш а Ъас|епа1 сеП ш |чЬкЬ р!аяпЫ тер!ка6оп Ьаа 8опе апю1| (е.8., р1еаае атее Кешаит е| а1.

1983). Кипатчау р!аяпЫ гер1ка|юп ап6 а|аоста|ей рго|1ис6оп оГ р1аяп!6-епсо|1е6 рготешт р1асе йе сеП ипт)ег течете шетаЪо!к яга)п |Ьа| )а гейестес! ш а т)есгеаает! Пго|чй гасе апд, аотпе6тпеы сеП |1еа|Ь (!)Ы)п ап|1 Ь!огтЬтгош 1978; |Л|Пп е| а!. 1979; Кешаит е| а!. 1983). Рог тЬ)а геааоп, П ь нпрог|ап| |о аасегта)п |Ье типе оГ ин1истюп гет)и)тес) |о оЬ|а|п шахппа1 у!е1сЬ оГ |Ье ш|асс |аг8е| рго|е|п. Р!ахтГГГ ЕкргеххГоп 1ГееГогх А 1аг8е пшпЪег оГ р1аяпЫ честит| Ьаче Ьееп сои||гнетет) |Ьат сопсаш ро|чегГи! Ргошосега сараЫе оГ Вепегабп8 1аг8е апюипь оГ шКХА ш чтно Ггош с1опет) Гоге|8п 8епеы Ь)о|час)ауы йе ас6нпу оГ шапу оГ йеае ргошотега сап Ъе атпп8еп|1у ге8и1асе|1 ю |Ьас йеге !а (1) ппштпа1 Ьааа! ехргетьюп оГ йе таг8е| 8епе шн1ег гергеьед сопсП6оп| ап|1 (2) Гатт апт) |1гашапс !пс!ист!оп оГ ехргеаяоп оГ |Ье с!опе|1 8епе )п геаропие |о ышр!е сЬап8еа Гп |Ье сопсП6опа оГ си!|иге.

Рог пабче рготеша |о Ье ргойкес) !п 1аг8е |1иап6иеы |Ье нес|от шиат сопташ ап ейк)епт 8Ь)пеРа!Вагпо ает)иепсе иратгеаш оГ йе ш|6а6п8 АТС сос)оп. ТЬе тПяапсе Ье||чееп |Ье 5Ь|пеРа!Вагпо ает!иепсе апд йе АТС сот)оп ь сгис|а1 (516пе апс) Ра18агпо 1975) |Т тпахппа1 ехргея аюп оГ |Ье Гоге)8п рго|еш ыо Ъе асЬ|ене|1. 1п шапу сааеы р!аяпЫ ехргеьяоп честит| аге т!ея8пе6 |о ехргеть Готе)8п ртоте!па |Ьа| аге по| Пп1|е|1 со апу рго1|агуо6с ает)иепсеы пюге сопипоп1у, Ьоччечег, ехргеааюп честить Пепега|е Гияоп рготешт |Ьа| аге епсос1ед раг|1у Ъу йе чес|от ап|1 рагбу Ъу ап ореп теасПп8 Ггатпе ш йе с1опед те8шепс оГ Гоге)8п РХА. ТЬе Гоге)8п рго|еш ыЬегеГоге аупйеыхед аа а Ььей ро1урер- !.14 СЬартет !: Р!алт!т/л апт! Т/ле!г Сле~и!пея |и Мо!еси/аг С!оп!пе т!де сопла!гбпВ а |таст ог" аш)по ас!6а йат аге пот поппа!1у рагс от" йе пат!че рго|еш.

1п йе еаг1у 6ауа от с!оп)пц, |Ье |гас| от" тоге!Вп апппо асЫа ъчаа оттеп !атее епоиВЬ го ргобисе 6гашат!с сЬапВеа ш йе РЬуяса! ап6 Ь|о1оа)са! Ргорег6еь от' |Ье рго|еш ип|1ег атибу. Во1иЬ|1пу ап|1 атаЬ111|у сои!|1 Ье а1|егес! !от Ьепег ог ъчогае, ап|1 йеге ъчаа а аоод сЬапсе йас йе Ью1оВ[са! Ргорегг!еа ог" йе рготе!и ъчои!д Ье сошргош!лет[, а| 1еааг |о толпе ех|еп|. Риппц |Ье !агат теъч уеатя |Ье ае|)иепсеа соп|НЬи|е|1 Ьу |Ье честит Ьаче аЬгип[т с1гаша|ка1- !у !п яте.

1п шоат сааея |Ьеу аге!ела йап а дотеп геябиеа |и 1епатЬ ап|1 лепета!!у |1о пос айесг йе гипсгюп от" йе рго|еш ипт[ег ати6у. Ргеь!иепс!у, |Ьеае "таха" ате ап6цеп!с с1е|егпипапп (ер1- сореа) йа| аге гесоВпЬ|ед Ъу арес|Вс ап6ЬосВея Ерпоре-|адуева ргосе!па сап Ье рипВед ъч[тЬ ап ех!ат!па ер[торе-арес[Ес ап6Ьос1у [тот геч!еъчя р1еаае аее Ко!от)т[е) ап|1 'тоипВ 1991; Кееаеу !996). ТЬе лаше ап6Ьот!у сап Ье илес) то т[егест |Ье ерпоре тац ш а чапе|у от ехргеяед рго|е|пя ТЬе ч)ггиеа ап|1 1иппа6опа оу ехргеаа!пВ ртоге[па ш тЬеае йгее |отша — аа па6че ргосе!пя аа йяоп рго|ешя ап|1 аа ер)торе-саааеъ) ргоге[па — аге с)[асиаает[ |п пюге т[еса11 ш СЬар|ег ! 8. Р[пт[[п~ Р!аып!г[ 'ъ/ес$огь Арргорг!аде гог Вресйс Та5[45 реп 1ооЫпВ тот сопипоп ог Ваг|1еп-чапе|у р1аяпнЬ йа| сап Ъе иае6 тог а ъчЫе тапце от'Вепега! ригроаея |Ье Вгат роя от" са!1 аЬои!6 Ъе |Ье сага!оВа от' сопппегс!а1 аирр1!егя Оттеп, |Ьеае сошрап!еа ъч|П Ьаче тюше|ЫпВ ъч1|Ь а аи)таЫе сошЪ|па6оп от" шаг!сетя шо|Ьл1ея с!оп!пВ я|ея апт) ерпореыЬа| сап Ье пает[ ъч||Ьои| ех|епяче епВ!пеет!пВ.

ТЬеье о!В|Ье-ьЬе!! честить Ьаче Ьееп геллер ипдег а ъчЫе чапе|у ог" сопсВ6опа !п |папу 1аЬога|опея 1| 6оеа по| |а1|е а гос!се| ас1- епт!ат |о тпа)се |Ьеш ъчот[с ъче11. !)плот|опале!у, йеге !а по еаау апс1 сегса!и ъчау |о аеагсЬ йе 16егаплге тот деаспр6опа от р1аяпЫ нес|игл ъч!|Ь ипиаиа! Ргорегт[еь йа| аге аи!тед |о раг6си1аг ригроаея ОЬчюиа1у, йе аЪ|1- !ту |о саггу ош Воо!еап ьеагсЬеа от батаЬаьеь аисЬ аа Мед1ше, Епттет, апд РиЬМед ъч1|Ь |Ье !оВ!с орегатога А)ъ!Р, ОВ, апд НОТ !а а Втеат ас1чапгаВе.

Рог ехашр1е, ттаъч1[пВ шоя Мес[1!пе-Ьааеъ[ батаЪааеа ъч)ГЬ йе яппи [р15А ог 1псН1) [Тчът! АХР Т7[Тьч'! АХР 1оъч-сору-пишЬег аЬои16 Вепега|е а 1!а| от' гегегепсеа со рарега ъчЬоле 66е 1пс1ис1еа "1оъч-сору-пшпЬег" апт) ъчЬоае тех| сопла!па йе ъчогба "Т7" ап6 е!йег "р15А" ог "1псНГ' 1п асЫ)г!оп, рарега деасПЪ|пВ ареси11те6 ог поче1 р1аяпЫ честить аге ь61! РиЫ!аЬед геаи1аг!у )п агсйча1 )оигпа1а ялсЬ аа бепе апт) В!оТес/|по!оКу.

Опсе опе ог |ъчо ргош)япа рарега Ьаче Ьееп !6еп66ед — еВЬет !гош |Ье ас|епйс к !пега|иге ог Ьу Воо1еап аеатсЬ[па — |Ьеу сап Ъе иае6 аь агаг6пц ро!пп гог ап ехрапде6 аеагсЬ от йатаЪааеа тот асЫ)тюпа! Рарега оп йе ааше ог с1оае!у ге!а|е|1 соркя ТЬе РиЬМе|1 зуатеш, ъчйсЬ сап Ье ассеаае6 ч)а йе 1п|егпе|, !а чету роом ас аааешЫ!пВ с!пагегяй от" рарега оп сор!са ге1асет! то а раг6си1аг 1|еуъчогд. ТЬе асЫгеаа от" РиЬМе|1 |а Ьттр://ъччпч.псЪ!.и!гп.п!Ь.Воч/РиЬМет[/. Опе печет )спича ъчЬейег а честит ипеагтЬед гтош йе 1!теса|иге ъч!11 ъчог)с аа абчетггае6 ап6 1т Ь 1а ас|иа11у |Ье Ьеат ситтепт!у ача!!аЫе.

ТЬе аи|Ьога от" |Ье рарег аге ияла!1у аЫе со ойег аепа!Ые абч!се !п |Ыа геаатс). Ноъчечег, Ьеъчаге !т |Ьеу агат| |а1Ыпц аЪош тпаЫпц ипргочешепь со |Ье риЫ!аЬед нес|от. ТЫа 1а а ялте а[Вп |Ьат |Ье от)В!па! чессог гВ|1 пот ъчог1| аь ъче1! аа абчег6аед; |Ье сЬапсеа аге йа| |Ье ппргоче|1 чегяоп ъч1!1 по| Ье пшсЬ Ъет|ег. !Е роаяЫе, Впд ои| |Ье патпеа от" о|Ьег шчеа6цасогь ъчЬо Ьаче иае6 |Ье чессог апд ъчЬо тпау Ьаче гоипс) |науа |о Ыеп6уу апс1 ьо!че |Ье ргоЫешя С[лооыпе ап Арргорг!аде Яга!и ог Е. сой Моат !пчеа6Ватога ъчап| со иле атташе ол" Е. соЕ |Ьат аге еаау то ттапатотш ъч1|Ь р1аяпЫ Р)ъ)А (е.ц., РН! ог ММ294; тот а й1!!!ат от" плей! а|гашя р!еаье атее АррепгВх 3).

ТЬе чая ша)опту ог' со1Е1-туре р1ааш16а !птгот)исет[ ш|о тЬеае алга!па гер!кате |о Ь!ВЬ сору пшпЬег ап6 сап Ье 1ао- 1пттотЬ|сдоп 1.!5 !атед ш ЬтцЬ у)е!д. Ноъчечег, а к|8п!Есапт иипопгу оГ гесогпЬ!пап| р1аяпЫк ггапк(огш к|та!пк оГ Е. соВ кисЬ ак РН ! апд ММ294 ъчКЬ 1оъч ейк!епсу, 8епегате |гапк(оппед со1оптек |Ьаг аге япа11- ег |Ьап икиа!, апд ргойке 1оъч у(е!|Ь оГ р1аяпЫ Р)ъ(А. Мокс оГ |Ьеке "д!ГГтси1т" р1аяпнЬ сап Ъе кЬоъчп то епсо|1е а рготе|п |Ьат Ь гохк |о Е.

соВ ог то соп|атп тпчегте|1 ог гереа|е|1 Р)чА кеъ)иепсек. ТЬе ргоЫеш оГ |охк рго|ешк сап Ье а!!еч)а|е|1 Ьу къч!тсЬ!и8 |о ап атпр1!ЕаЫе 1оъч-сорупшпЪег чес|от ог то а Ь|8Ь-сору-пшпЬег честит соп|ашш8 рго1|агуо6с сгапкспртюи сегш(па6оп я8па!к йас кирргекк геадтЬгои8Ь тгапкспр6оп оГ Гоге!8п Р!ъ)А кет)иепсек. Апойег рокя- Ъ(1!ту, Ьоъчечег, Ь со ике к|гашк оГЕ.

соВ |Ьа| кирргекк |Ье сору пшпЬег оГ со1Е!-Ьакед р1аяпЫк. Вечега! сопипегс|аПу ачадаЫе яга!пк оГ Е. соП (е.8., АВ1.Е С ап|1 АВ1.Е К к|гагик Ггош Втгага8епе) гедисе йе сору пшпЪег оГ со1Е! р!аяшсЬ (апд Ьепсе йе !ече! оГ р1аяпЫ-епсодед |ох!с рго|е|пк) Ъу Гонт- |о |епГо1д.