Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - 2001), страница 6

5исЬ гипь оЕ 1.8 СЬар|ег 1: Р1актЫ| ал|Е ТЬе!г 'ъукеЕи!пекк и Мо!еси)аг С!отпе ТАВЕЕ 1-2 Сои|го! Е)е|пеп|к ТЬа| Ке8и!аге Кер!!са|1оп !ЫТОАт|че Соитаое Еееме|чт Сомме|чт 1 и с О м РАН В | и ту СВООР5 сопио!к ргосеккЫВ оЕ рге-КТТАП |и|о ри|пег сои|го!к купйеик оЕ КерА ргосега ке9иепегк КерА рго|ега со!ЕК рМВ| 1пср11, РТ!8| Р|, К КВК, рВС106 р15А Кг|А! К!ъА Кегопк Р!АБМ10 Ъ'ЕСТОКБ $е!ес1аЫе Маг!еег8 Р1аяпЫ чес|огк соп|аш Вепе6с шаг!сегк йа| сопЕег кггоп8 ВгоъчТЬ ас!Чапта8ек ирои р1аяпЫ-Ьеаг- !п8 Ьас|епа побег ке1ес6че сопй|юпк. 1п п|о1еси!аг с!ошп8, йеке шаг!ъегк аге икесЬ ° То ке1ест с1опек аЕР1акти1-Ьеатт8 Ьасгет|а: 1п |Ье 1аЬогагогу, р!аяиЫ Е|1ь1А сап Ъе шггоъ)исес! !п|о Ьас|епа Ьу |Ье аг66с!а! ргосея оЕ |гапкЕоггпа|юп.

Ноъчечег, ечеп ипъ)ег |Ье Ъея сопй6опк, |гапкроппа|юп !к цепега!1у шеЕ6с|еп|, апс! р1аяпЫк Ьесоше яаЫу екгаЫ!кЬе6 ш оп1у а япа1! ш)поп!у оЕ |Ье Ьас|епа1 рори1а6оп. Ве!есгаЫе гпаг1|егк сагпег! Ьу |Ье р1аяпЫ а1!оъч |Ьеке гаге ТгапкЕогшапгк со Ье ке!ессе|1 ъъчгЬ еаке. ТЬеке р1аяпЫ-епсо|1е6 шаг)ъегк ргочЫе крее|бе геяяапсе со Е|.е., |Ье аЬ!!Ьу |о цгоъч 1и |Ье ргекепсе оЕ) ап6Ъю6ск кисЬ ак йе 1|апашусшк, ашрк|1!ш апгЕ сагЪешс|1!ш, апс! йе |еггасус1шек. ТЬе ргорег6ек ап6 шишек оЕ ас|юп оЕ |Ьеке ап6Ь~о|кк аге йксияед |и шЕоппа|юп рапе1к а| |Ье епс! оЕ ТЬ)к сЬар|ег.

° То т|1етифу гтапфогтег) Ьасгепа ачат» йе гЬЕк Етрокей Ьу йеи Ьиг|1еп оЕР1акт!|Е 0ХА ог р1актиЕ-епсог)егЕ рго|етк: Р1аяпЫк ргекеп| а| 1оъч сору пшпЬегк ((20 сор!ек1се6) с)о по| сЬапсе сап !еаг! гарЫ!у |о 6гакг!с йЕЕегепсек ш йе сору пшпЬег оЕ йе |ъчо р1аяпЫк. 1п коше се!1к, опе р1аяпЫ ипВЫ |1опппа|е, ъчЬегеак Еи ойег се11к, Ьк |псогпра6Ые раг|пег пщЬЕ ргокрег. Очег йе соигке оЕ а Ееъч цепегаг!опк оЕ Ьас|епа1 Вгоъчй |и йе аЬкепсе оЕ ке1ес|юп, |Ье гпшогЬу р1аяпЫ шау Ье со|пр1есе!у е1пп!пагес! Егош коше се!1к оЕ йе рори1а|юп. Е|ексепъ)апгк оЕ |Ье опебпа! се!1 гпау сои|а!п опе р1аяпЫ ог йе о|Ьег, Ьш чегу гаге1у Ъо|Ь.

ТЬе геЕВопк оЕ р1аяпЫ Л!ЧА йа| сопЕег !исошраг!Ь|Иу сап Ье !6епг!Еге|1 Ьу !и|го|)ис!и8 ке8шепгк оЕ |Ье Еъ)ь!А !п|о ап ипге!агег! иш1|кору гер!коп ап6 |1е|егиишп8 йе аЬ|16у оЕ а секс р!аяпЫ со соех!кг ъчиЬ ТЬе ЬуЪгЫ. Рог ехагпр1е, |Ье шсогпра6Ъ|16у !осик оЕ йе ктпп8епг, 1оъчсору-пшпЬег р1аяпЫ рВС101 шарк со а кепек оЕ йгесбу гереа|е|1 -20-Ьр кес)иепсек 1|по|ни ак Ьегопк, !оса|ей а| йе оп8!п оЕ гер!ка6оп. ТЬе иегопк, |п сои)ипсгюп ъчЬЬ ТЬе пеагЬу с6-ас6п8 раг !осик, арреаг |о "Ьап|1сиЕЕ" р1аяпЫ Еъ)ъ1А гпо1еси1ек Ьу кег)иекгеппц йе р1аяпЫ-епсос)ес! КерА ргосе!п ко |Ьа| и сап по 1оп8ег Еас!! !|а|е Ъ!п6!п8 оЕ Ьок|-епсо|1е|1 рго|ешк со йе опЕВп !Еог гейеъч, р1еаке кее !ногбкггош 1990).

Ву сои|гак|, ш йе саке оЕ со1Е! ъ!експЪес) аЬоне, !псои|ра|- 1Ь|16у 1к с!еЕ|пес) Ьу йе шЬ|Ь1|огу ас6чиу оЕ КХА! ЕЕог геч!еъч, р1еаке кее Ь!онк)с 1987). Апу |ъчо р1аяш|Ь ТЬа| аге |коцепк Еог К)ъ)А! апд ике || !ог ге8и1а6оп аге |псоп|раиЫе, |ЧЬе|Ьег ог по| |Ьеу кЬаге апу о|Ьег Еипс|юпк !Топота|на ап6 1|оЬ 1981). Ак йксикке6 еаг!|ег, шок| чес|огк ш сиггеп| ике саггу а гер1коп бепчес! Его|и |Ье р1аяпЫ рМВ1. ТЬеке чес|огк аге шсогпраиЫе ъч!ТЬ а11 о|Ьег р1аяпЫк саггу!п8 |Ье со1Е1 гер!коп Ьи| аге Еи!!у сошра6Ые ъч!|Ь Егегоп-Ь)пйп8 гер!копк кисЬ ак йоке ш рВС101 апг) !Тк с!ег!Чаг!Чек.

ТаЫе 1-2 1!кгк кечега1 ъче!1-)ъпоъчи р!аяп!6к ап|1 пе8аг!Че сои|го! е!ешепгк !пчо1че6 |и ге8и1аг!и8 |Ьеб гер1ка6оп. Епттот(исйоп 1.9 арреаг со цпс1ц1у Ьапсбсар сЬесг Ьоас се!1я Нотчечег, пшсЬ ечЫепсе аЬотчт сЬас Ь)ВЬ-сорупшпЬег р1аяпЫВ ап<$1аг8е с(цапс!с!еа оЕ тесошЬтпапс ргосе!па сап течете!у Ьатпрег сЬе ВголчсЬ, апт( ечеп йе тцгч(ча1, оЕ сгапа(огшес( се!1л (Мцггау апт$ Ке!!еу $979; Вес)с апт$ Вгешег 1980). То ртечепс йе етпет8епсе оЕ Ьассепа Йош лчЬкЬ йе р1аяпЫ Ьаа Ьееп е1цтцпатей К Ь цпротсапс со яьса)п ае1ес6че ргеяшге Ьу !пс!ц66п8 йе арргорПасе ап6Ъюск ш сЬе сц1сцге шесбшп ас а1! 6гпея 1973-1978 1п йе еаг1у 1970я те!ессаЫе гпаг1тегя сурка!1у /сап' ог агпр' ог сет", счете !псгот(цсес$ шсо р!ая шЫа сатгуш8 йе рМВ1 (ог со!61) гер!коп (р!еаае аее йе ш(оггпабоп рапе1л оп ссА$9АМуС$й5, ТЕТВАСуСЕ$$9Е, апт$ АМР!С!Ш6$ А$9Р САВВЕХССсШЯ).

ТЬе 6гя р1аяпЫа пает( аа с!оп!п8 чессогл — р5С101 (СоЬеп ес а!. 1973), со!Е1 (НеглЬЕте16 ес а1. 1974), апс$ рСК1 (Сочеу ес а1. 1976)— ъчеге!цпЬет1 си йетг чегаас!!!су; Е(сЬег йеу гер! касес1 роог1у ог йеу сагг!ес( цпац!саЫе ае1ессаЫе шагКегя апс$ попе оЕ сЬетп сопла!пес( пюге йап слчо геасПссюп ясеа сЬас сои!6 Ье пает! Еог с!оп)п8. ТЬе Етгас р1аяпЫ со согпЪтпе аП оЕ йе йеп-ачат1аЫе т(еягаые Ееасцгел лчаа рВК313 (Во1тчаг ес а1. 1977а,Ь; р1еате аее сЬе !пЕоппасюп рапе1 оп РВВЗ22).!с гер1касет$ сп а ге1ахес1 ЕааЬ- юп, сопла(пес( стчо ле1ессаЫе шаг1сеь (тет ' апт1 аггтр'), апс( сагПет1 а пшпЬег оЕ сьеЕи1 геяПссюп ясея Нотчечет, рВК313 лчаа цппесесьап1у 1аг8е; плоте йап Ьа!Е оЕ сь РЪ)А лчаа пос елаепс!а1 Еог !ь го!е ав а чессог.

ТЬе 6гя рЬаае оЕ р1аяпЫ чессот с1ече!ортпепс епт)ет$ тч!сЬ йе сопвсгцс6оп оЕ рВКЗ22 (Во1тчаг ес а1. 1977Ъ), а р!аяпЫ оЕ 4.36 (тЪ 6огп лчЬкЬ пюя оЕ сЬеае цппесеалагу лет)цепсет Ьас( Ьееп е!цпшасей рВК322 ъчат сЬе пюас лчЫе1у илес( с1опш8 чеЬтс1е оЕ (ь с(ау, апс$ шапу оЕ сЬе р!аяпЫ чессога ш сцггепс цае аге 1са с1сяапс т)еасепс)апта (Еог геч)елч, р1еаае аее Ва!Ъаа ес а!.

1986). 1978-1983 ТЬ!а реПот$ талч сЬе ечо1шюп оЕ с1цп1су р!аяшсЬ ялсЬ аа рВК322 !псо чессога сЬас ъчеге япа11ет ш яте, ЫВЬет ш сору пшпЬег, апт$ аЫе со ассерс Ега8гпепь оЕ Гоге!Вп РЬ)А Вепегасес( Ьу с1еача8е лч(сЬ а ъч!т(ег гап8е оЕ геяПссюп епхупсея ТЬеге ь по асПсс цррег!ппВ со сЬе яхе оЕ РЪ)А Ега8шепь сЬас сап Ъе с1опет$ !п р!аяпЫя Нолчечег, сЬеге аге ас(чапса8еа (п тес(цс!п8 сЬе яте оЕ р1аяпЫ честить со а пппппцгп. Р!аяпЫ сору пшпЬег, асаЪ111су, апс1 сгапа(огш!п8 ейк)епсу а1! !псгеаае аа СЬе яке оЕ СЬе)г Р)чА Ь гет(цсес(. Зтпа11ег р1аяпЫВ сап ассопцпот1аСе 1ат8ег ае8шепта оЕ Еоге)8п РНА ЬеЕоге сЬе!т еЕ6ссепсу Ъе8!па со т)есег(отасе.

1п асЫ!с!оп, Ъесацае япа11ег со1Е1 р1аяпЫа гер1касе со ЫВЬег сору пшпЬегя сЬе у!е16 оЕ Еоге!Вп РЪ)А ь !пстеаает$ апс( ЬуЪг(т$1тасюп а(8па1т ате Еогс(Етес( лчЬеп сгапаЕогтпес$ со!оп(еа сопла!п)п8 с1опет( Еоге!8п РЪ(А лет)цепсел аге асгеепес( лч)сЬ гас(то1аЪе!ет$ ргоЪея 1п сЬе 1асе 1970а апс1 еаг1у 1980я йе ргоЫепь оЕ цптч!е1йпеаа апс((пейк!епсу счете ат(с(геааес( чтЬеп лсгеагп1!пел( с(ег(час)чеа оЕ рВКЗ22 счете сопасгцссет$. ТЬеае р!атписЬ 1ас)сес$ апс111агу аеоцепсеа тпчо!четЗ !п сЬе сопсго1 оЕ сору пшпЪег апс( пюЪ|11тас!оп. РпЕогсцпасе!у, сЬе 6гас-Вепегат!оп ЫВЬ-сору-пшпЬег р!аяпи(я оЕ лч)6сЬ рХЕЗ (НапаЬап !983) апт$ рАТЗЗ (Ттчщ апт$5ЬеггаСС 1980) ъчеге йе Ъеат $сполчп, ялЕЕетес( Стою а ша)ог с)еЕест; Роге!Вп РЪ)А лес(цепсеа сои!6 Ье (паегсет$ оп!у ас а 1!ш!сет$ пцгпЬег оЕ гезсПссюп ясеа 1осасет$ тч)сЬ!и сЬе "пасцгаГ' ае9цепсеа пает! со сопасгцсс сЬе р1аяпЫ.

тАт!сЬ)п а уеаг ог ьчо, сЬеве р1аяпЫа Ьас( Ьееп гер!асет$ Ьу а гечо1цсюпагу аеПеа оЕ чессогт (р(ТС чессоь), ш ъч)6сЬ сЬе пшпЬег оЕ геасПссюп епхуше с1еача8е а(сел ъчаа ехрапс$ес1 апт$ сЬесг т$1асг(Ъцсюп лч(сЬ(п сЬе чессог лчаа гас!опа1!лет( (Мевяп8 1.!О С)таргет 1: Р!атт!т(т аит! Т)те!г Иье~и!пея тп Мо!еси!аг С!отп5 1983; Ыоггапс1ег ет а1. 1983; УапьсЬ-Реггоп ет а1. 1985; анетта апт1 Метьтп8 1987).

ТЬе рБС честогх тчеге йе Влт р!аашнЬ то сопта!и а с!оае1у аггап8ес1 хепех от" ауптЬет!с с!оп!п8 ятея тегше6 ро1у1шКегя пш16р1е с!оп!п8 ятея ог ро1ус1оп!п8 ятея тЬат сопяхт о1Ьап)сз о1 асс)цепсех гесо8- и!хек Ьу геатгктюп епхутпея 1п гпохт сааея тЬеае геатг!ст(оп а(тех аге цп(с)це; !.е., тЬеу аге пот Еоцп6 е1хетчЬеге ш йе р1аяпЫ честог. Рог ехашр!е, тЬе ро1ус1оп!п8 яте 1гогп тЬе честог р1)С19 сопяхтх оГ а сапбеш аггау от" цп(с)це с1еача8е ятех 1ог 13 гехтпстюп епхуптея Н!РЫ111, 5рЫ, Ртй 5ттЛ, Асс1, НтсК ХЬа1, Ва тН1, 5та1, Хпттт!, Кр п1, 5ас1, апс1 Его К!. 5цсЬ аггаух оугесо8пКюп аес)цепсеа ргочЫе а чая чапе!у от таг8ета тЬат сап Ье цхе6 а!п8!у ог !п согпЬ!патюп то с!опе РЫА (га8гпепта Вепегасеб Ьу с!еача8е тч!тЬ а !аг8е пшпЪег от'геатпс6оп епхушея РигтЬегпюге, 1га8шептх !пхегте6 ас опе геатпсбоп яте сап ойеп Ье ехсье6 Ъу с1еачаВе от" йе гесоптЪшапс р)аяпЫ тч(тЬ геягк6оп епхугпез йат с1еаче ат ЛапЫп8 ятея 1пхегт!оп оу а ае8шепт о1 РЫА тпто а ро!ус!оп!п8 яте В йегеуоге ес!шча1епс то атЫ!п8 ауптЬет!с 1!п)тегх то !тх тегш!и!.

ТЬе ача!1аЪт1пу от тЬеае ЯапЫп8 а!тех Вгеат!у х!шр1!Лет тЬе тат)т о1 шарр(п8 тЬе ае8тпепс от гоге!Вп РЫА. А ротептта1 с1ьатЬ апта8е опт)гачбп8 со8етЬег а1! с!оп!п8 х!тех тпсо опе 1оса6оп !п а р1аяпЫ (х тЬе !паЬ!!Ьу то ые шасттчатюп оуа ье1естаЫе шаг)тег со асгееп 1ог гесогпЬтпаптя ТЫз шетЬод Ьад Ьееп паем ехтепяче1у ъч!тЬ Лтгхт-Вепегат!оп р1аяпЫя ацсЬ ах рВК322, йат саггу ттчо ог пюге 6!1тегепт ае!естаЫе шагКегя е.8., гет'ап6 аптр', еасЬ сои!а!и!п8 а "патцга1" гехтпстюп яте. 1паегт!оп от' 1оге(8п Р!ч(А тес)цепсех шсо опе оУ тЬехе а!тех шас6чатет1 опе от" тЬе ячо шаг1тегя Вастепа соптаттбп8 гесошЬ(папт р!аяп!6х сои!6 тЬегетоге Ье 6тат!п8ц!аЬе6 1готп тЬохе саггу!п8 йе ешрту рагепса! честог Ьу Ыгтце оутЬе!г аЬтрпу то 8готч !п оп1у опе оутЬе ичо тета оуае1ест(че соп6(тюпа (р!еаае аее йе !пуогшат!оп рапе! оп АМР!С! Ш19 А!90 САКВЕМС1ШМ).

1паегтюпа1 !пас6чатюп ь пот ротьтЪ|е ъчКЬ р~УС честогя ъчЫсЬ саггу оп!у опе ап6Ью6с геяатапсе Вепе (турка11у агар") апс1 ап а88геВатес1 хет о1 с!оптп8 ятея Нотчечег, гесошЪтпапт р1аяп!6х сап Ье геагВ1у 6!ат!п8цтаЬед Егош рагепта! р()С р1аяп!Ла Ьу хсгеептп8 тЬе со!ог о1Ъастепа) со!ошея р1 1С честить апд гпапу от" тЬе!г депча6чех саггу а хЬогт хе8шепт о1Е. соЛ Р!4А тЬас сои!а!пх йе ге8ц1атогу хет)цепсез о1 йе !асУ Вепе ап6 тЬе согВп8 штогшат!оп 1ог йе аш!по-тегш!па! 146 апппо асЫВ о1 (1-Ва!астоаЫаве. ЕтпЪесЫе6 ш йе со6!п8 тп(оппа6оп, )ыт дотчпатгеаш (гош тЬе !ш6а6п8 АТС, ь а шц16р1е с!оп!п8 а(те.