Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - 2001), страница 10

Сгибе ргерага6опз оГр!аяпЫ Р1чА сап Ье геас)11у ч)зиа1!хес) ш аВагозе Ве1з апг! сап Ье изе6 аз |етр1а|ез ап|1 зиЬз|га|ез Гог тоз| геяпс6оп епхутез апс( РЬ)А ро1уп|егазез. Но|чечег, сопсат)папыпизг Ъе геточес) — ог а| 1еая гег!исег! |о тапаВеаЫе грече!з — |чЬепечег рипйе6 р1аяпЫз аге песеззагу ог с)еягаЫе, Гог ехатр1е, гчЬеп ггапзГесг)пВ тапппа11ап сеИз. Рог йе 1аз| 20 уеагз, дезспрбопз оГ "пе|ч" рипйса|юп зсЬетез Ьаче арреаге|1 ш |Ье зс1- еп66с 1Вега|иге а| ап ачегаВе гаге оГ опе а |чее)с. Хог|ч)|Ьзгапс(!пав |Ье |Нг|иез с1аппег! Ьу йе(г )пчеп|огз, чегу Ге|ч оГ |Ьезе те|Ьог)з Ьаче Гоип|1 ъчЫезргеа|1 ассер|апсе.

Мапу оГ |Ьет, (п Гас|, аге Ьи| пипог чапа|юпз ог <!иезг)опаЫе е|пЬе!1ьЬтеп|з оГ пшсЬ о!6ег гпе|Ьог!з. Ву ап|1!агВе, |Ьезе ог(а)па1 о!дег тегЬос)з аге епбге!у заг)зГасгогу апд йеу соп6пие со Впб гчЫезргеаг) изе. 016 ог пе|ч, а11 зсЬе|пез Гог рипВсабоп оГ р1азт16з са)се аг!чапгаВе оГ йе ге1а||че1у япа11 яке ап|1 соча!еп|!у с1озе|! з|гис|иге оГ р1аяпЫ РХА. ТЬе пюз| чепегаЫе те|Ьог! Гог зерагаг)па с!озег! с(гси1аг р1аяпЫ РХА Ггот сопгат)па6пВ ГгаВтепгз оГ Ьас|епа! РХА 1з Ъиоуап| |1епя|у сепгг|ТиВагюп 1п ага|!)епгз оГ СзС1-е|Ь161ит ЪгогпЫе (С1е|че11 апг! Не11пз)|1 1969). ТЬ(з |есЬ- пщие Гз з611 геВаЫе|1 аз |Ье згапг!агс) аВа)пзг |чЬкЬ а!1 о|Ьегз зЬои16 Ье )ифей 5ерага|юп с)ерепс)з оп |1|ТГегепсез и| |Ье ап|оип|з оГ е|ЬЫшгп ЪгогпЫе |Ьа| сап Ъе Ьоип|1 |о 1|пеаг апг! с!озег( с)гси!аг РЫА пю!еси!ез.

Е|Ь161ит Ъгоп|Ые Ь)пс(з чегу 6866у |о РХА 1п сопсепггагес( за1| зо1и6опз. ТЬе |1уе (п|егса1а|ез Ьег|чееп |Ье Ьазез, саияп8 |Ье с(оиЫе ЬеЬх |о ип|ч)пг( ап|1 1еаг!1пВ |о ап |псгеазе |и!епцгЬ оГ г!оиЫе-зггапг!ег! 1шеаг ог ге1ахег! с)гси!аг РХА |по1еси1ез (Гог геч(ем, р1еазе зее%поВгад апд ЕеЪо|ч)гг !966). С1озег! с(гси)аг Р!4А гпо!еси!ез Ьаче по Ггее епс)з ап|1 сап ип|чшг! оп1у Ъу пч)залпу. Аз пюге апг! пюге ейЫ|шп ЬготЫе пю1еси1ез шсегса1асе шсо йе РХА, |Ье |1епя|у оГ зирегЬе!|са1 г|ч)згз Ъесоп|ез зо Вгеас йа| |Ье а|Ы16оп оГ Гигйег е|Ь161ит Ьгопп|1е (з ргечеп|ей !лпеаг гпо1еси1ез, |чЬ~сЬ аге по| сопяга(пей соп6пие |о Ь(п|1 е|ЬЫтгп Ьгоп|Ые ип61 за|ига6оп 1з геасЬед (ап ачега8е оГ опе е|Ь|сВшп Ъгот)де то1еси1е Гог ечсгу 2.5 Ьр; Сап|о| ап|1 5сЬ)тте! 1980).

В)пс)1пц оГ ейЫ|шп Ьгоп|Ые са|ьез а |1есгеазе |и |Ье Ъиоуап| |1епя|у оГ Ьой 1)пеаг ап|1 с!озе|1 с|гси1аг РХАз. Но|чечег, Ьесаизе 1шеаг Р!чАз Ъ|пс1 пюге ейЫ- тп| Ъго|пЫе, |Ьеу Ьа| е а 1о|чег Ъиоуап| |1епя|у |Ьап с!озес) с|гси1аг РХАз |и СзС1 Вгас))епгз сопГа)п)па за|ига6пц ап|оипЬ оГ е|Ь16!ит ЪготЫе (1шеаг с(оиЫе-з|гапг!ег! РЫАз, !54 В/стз; с1озе6 с|гси!аг Р)4Аз,!.59 ц/стз).

С1озес( с|гси!аг Р)чАз йегеГоге соте |о ес)и111Ъг!ит а| а!о|чег роя|юп йап 1шеаг РЬ(Аз )п СзС1 ВгасВеп|з сопгашш8 за|ига|)пц атоипь оГ ейЫш|п ЪготЫе (Гог а пюге г!еса1!ес) с)1зсизз(оп, р!еазе зее йе |пГоппа6оп рапе1 оп ~ТН|Р|г/|ч| ВВО ч|1РЕ). Рог тапу уеагз, ег)и(11Ьг)ит сепспйВа6оп ш СзС1-е|Ь|6!ит ЬготЫе Вгаб)епгз ъчаз |Ье те|Ьос( оГ сЬоке |о ргераге !агре апюип|з о| р1аяпЫ Р)чА. Номечег, ГЬ(з ргосезз ь 6|пе-сопзит)п8 (3 — 5 дауз) апг! ге|!шгез ехрепяче ес!шртеп| апг! геацепгз. То|(ау, ес)ш11Ъпшп сеп|пй- Епг ог)цсг)оп 1.19 Ва6оп Ь иае6 сЬ)ейу Еог ГЬе рипПса6оп оЕ (1) негу!аг8е р!аыпЫа йаг аге чи1пегаЫе Со пкЫп8, (2) с1оаег( сггси1аг РХАа гЬаг аге го Ье писго)п)есгег( шго гпапппаПап сеП, апг) (3) р1аатЫа йас аге иаег( Еог Ь~орЬуа(са! теааигегпепея Хотчабауя !еаа ехрепяче апс) Еазгег тегЬо6а аге ачаПаЫе со рипЕу япаПег р1аатнЬ (<15 1сЬ) Еог гье аа аиЬаггагеа апг( гетр1агеа 1п аП епхугпагк геасгюпа апд ргосег!игеа сопнпоп1у ипг(егга)сеп ш пю1еси!аг с1опш8.

ТЬе Вгеас та)оп!у оЕ гЬеае рипП- сагюп асЬетеа ге!у оп 61йегепг(а! ргес(рПа6оп, юп-ехсЬап8е сЬготасо8гарЬу, ог Ве1 61ггагюп го аерагаге р!аяпЫ РХА Егот сеПц1аг пис!ек асЫя А чапе!у оЕ Ыга Еог р!аяпЫ рипПсабоп аге ачаПаЫе Егот сопппегс)а1 чепбогя ТЬеае Ыь сопяаг оЕ 61ароааЫе сЬготаго8гарЬу со!отца йас аге иаег( Еог ЬагсЬ аЪаогЪЕ(оп апд е1ибоп оЕ р!аяпЫ РХА. Мапу 6ПВегепг гпагпсеа аге ачаПаЫе, (пс1игПп8 8!аы, сПагогпасеогь еаггЬ, апс1, гпоаг рори1аг оЕ аП, апюпк геяпа аисЬ аа РЕАЕ (сПегЬу1апипоегЬу1) ог Е2АЕ (61егЬу1(2-Ьуг(гохургору1]ат(поегЬу1). 1г Ь сегга)п1у а сопчетепсе го Ьаче йе песеяагу Ъийегя геяпя апг( сПя роааЫе со1итпа геаду Еог иае. Ногчечег, гЬ)а сопнетепсе сотеа аг а рпсе ап6 опе тгьг ччопбег хЬегЬег П ь юоггЬччЬг1е го гье оп а гои6пе Ъаяа ехрепяче Ыь гЬаг г(о пог регЕопп оп(Псапг1у Ъеггег гЬап агапдагс) геа8епь ччЬ|сЬ сап еая1у Ье ргерагед 1п ЪиПс Ъу апу сотрегепс 1аЬогагогу мог)гег.

Сегсагп)у, Ыь аге иппесеыагу Еог пип(ргерагагюпа оЕ р1аяпЫ РХА го Ье иаег( Еог гои6пе апа1уяя ОЕ ЕЬе Ьипс1гесЬ оЕ гпегЬос(а го рипЕу р1аяпЫ РХА с1еаспЬег1 1п гЬе 16егагиге, йе аПсаПпе 1уаыпегЬос1 (ВггпЬоип апс1 Ро1у 1979; )аЬ-Ноготочка апг1 Виг(се 1981) ь Ьу Еаг йе пюя рори!аг Ьесагье оЕ гь аипр!кПу, ге)а6че1у 1очч соя, апс1 гергойкгЪ|1Пу.

АПсаПпе 1уяа Ьаа Ьееп иае6 аиссеааЕиПу Еог пюге гЬап 20 уеага гп Ьипг!геба оЕ!аЬогагопеа со Вепегаге гтПюпа оЕ пширгерага6опя Рог!аг8ег-аса1е ргерага6опя гЬе тегЬог( оЕ сЬоке )а аПса1ше 1уяа ЕоПогчег1 Ьу 61ЕЕегеп6а! ргес(рПа6оп оЕ р!аяпЫ РХА гн)ЕЬ ро1уегЬу!епе 81усо1 (Еаа 1980; К. Тгеыпап, иприЬЬ), ччЫсЬ у)е16а РХАа гЬаг аге с1еап епоиВЬ Еог ьапаЕесгюп оЕ тапипаПап сеПа ап6 аП епхута6с геасбопя шс1игПп8 РХА аес)иепсш8. 1п гЬоае гаге с(гситагапсеа ччЬеге и1ггариге с!оае6 с(гси!аг РХА ь гег)и)гег( (е.8., Еог гпкго)п)есгюп )пго гпапипаПап сеПа), йеге Ь а сЬоке Ьеичееп ияп8 сепгг)Еи8а6оп го ег!шПЬпшп ш СаС1-ейггПшп ЪготЫе ВгасПепга ог а сопипегс(а! Ыг. 1Е сЬооа)п8 го гье а Ыг, ЕоПочч гЬе тапиЕасгигегЪ шаггисг)опа ргесье1у аа гЬегг ргогосо1 Ьаа ргеяппаЫу Ьееп геаге6 ехгепяче!у апг( орбппгей С1.ОМ(ХС 1(Ч Р1АБМЮ ЧЕСТОК5 1п рппсгр!е, с1опгп8 гп р1аяпЫ нес!ига 1а чегу аГга)ВЬГЕогюагй С1оаег) с(гси1аг р1аяпЫ РХА )а с1еанед гч)гЬ опе ог тоге геагпсгюп епхутеа ап6 ПВасе<Е 1п ч)гго го Еоге)8п РХА Ьеапп8 сотра6Ые гегтшЬ ТЬе ргог(исга оЕ йе ПВа6оп геасбоп аге ЕЬеп гье6 со ггапаЕогт ап арргорпаге зггаш оЕ Б.

со!Ь ТЬе геаи16п8 ггапаЕогтес) со!оп(еа аге зсгеепе6 Ъу ЬуЬг)6!ха!(оп, Ьу РСК, ог Ъу 618еагюп гч(гЬ геаггкгюп епхутеа со Ыепбру гЬоае гЬаг саггу гЬе Пеягег) РХА аес)иепсея ТЬЬ аоипба еаау епои8Ь. Нохечег, р1аптп8 апг) гЬои8Ьг аге гег)и(гесс 1Е с!оп(п8 1п р!ая тЫ нес!ига ь го Ъе аа япоогЬ гп ргас6се аа 1п ргоаресг. ВеЕоге а ргреье Еа Пйег1, с)есьюпа тия Ъе табе аЬоиг: ° йе сЬоке оЕ а р1аяпЫ чесгог аи)гаЫе Еог ЕЬе гаа)с аг Ьапд ° ЕЬе сЬоке оЕ геяпсгюп ягеа чч(ЕЫп чесгог ° гЬе оргипа1 сопгП6опа Еог гЬе ПВа6оп геасгюп ° йе багга(п оЕ Е. соП Ьея аиПес1 го ргора8аге а р1аяпЫ саггуш8 ЕЬе Еоге(8п РХА оЕ гпгегеаг ° гЬе тегЬой иаег) со асгееп ггапаЕогтапга ап6 ЕЬе гесЬп(с!иеа паем го ча1Ыаге с1опеа оЕ )пгегея 1.20 СБаргег ): Р!азтиЬ апг( ТБе(г ~ЛеЕи!пея гп Мо!еси!аг С!оптц ° ччЬетЬег ерес!а! атера аге гег)и)ген со 6есгеаье йе Ъас)сагоип6 оЕ !гана(огшед со!оп!ее йат сон!а!и "ешрту" рагепта1 р! аяпЫ ° тЬе сон!го!а тЬаг аге песеааагу аг еасЬ агапе АЕгег ЕЬеае гпапега Ьаче Ъееп аетт1ег(, йе пехс атер !е со ша1се а с)ета!1ед р1ап апг( а йпетаЫе ао гЬаг Егаигпептя р!ааш!й, согпретепт се11я апг( ргоЬеа сап Ье ргерагес) !п тЬе соггест огс(ег апг( ш цоо6 гнпе.

1п пюат сааея аечега1 6!ЕЕегепт аггасеи)еь сап Ье иаег) то сгеасе а рагбси1аг гесогпЫпапг пг а р1аяпЫ честог. 11 !а нпроггапт то Ьаче а ЪасЬлр асЬетпе !п сале ЕЬе ог!и!па! р1ап ргочеь то Ъе ипехресте6!у г)(йки16 С!оп!а 0ХА Ггарпеп13 чч1111 Рго$гпг1гщ Еперь ТЬе еаа!еат РМА Егарпепта то с1опе аге тЬоае тч(тЬ 5' ог 3' рготгиг(!пи епсЬ. ТЬеае а!пц1е-етгапс)- ег) тегпнш, 1 — 6 Ьр ш 1епцтЬ, аге шов! еая!у сгеатег( Ъу г(!цезтшц ЕЬе чессог ап6 йе латает РМА тч)тЬ геаггкт!оп епгушеа ЕЬат с!еаче ааупппеггка!1у тч)тЫп тЬе гесодп!т!оп лег)иепсе (р1еаае аее г!узге 1-2). ЪлгЬеп тЬе епгЬ ргоггиг)!пд Егош ЕЬе РХА Егаишепт апс1 тЬе чессог аге сошра6Ые, тЬеу сап аппеа1 то Еопп а 1шеаг ЬуЬгЫ пю!еси1е тчЬоае пчо рать аге Ье!й гоиетЬег Ьу ра!г!п3 Ьеттчееп йе Ьааеь ш тЬе рготгис)!па сеггшш. Рогшат!оп оЕ а слгси1аг гесошЫпапс р!аяпЫ сараЫе оЕ тгапаЕогш!пц Е. со)г', тЬеге(оге, оссша (п а ттчо-яер геасгюп (р1еазе аее р!риге 1-3): ° ап епгепп о! еси1 аг геас6оп Ъеттчееп! шеаг р1аяпЫ апг( лпсопнпц РМА, ъчЫсЬ аепегатеа а попсоча1епт1у Ьопг)ес), 1!пеаг ЬуЬгЫ ° ап гипапю1еси1аг геасбоп, !п ччЫсЬ тЬе рготгиг(!пи тептнп! оЕ тЬе 1!пеаг ЬуЬг!6 аге )оше6 тоаетЬег, (оптину а попсоча1епг1у Ьопбед, с!гси1аг гесоптЬ!пап! пто1еси1е Аппеа!!пц Ьппр йе 5'-рЬоарЬате апд 3'-Ьуг(тоху! геа!6иеа оп честог апс) сагиет РХАа !пто с1оае а1!рипепп ъчЫсЬ а(!отче РХА 1!иаае го сага!ухе тЬе Еоппа6оп оЕ рЬоарЬос)!еатег ЬопсЬ.

ТЬе с!гси!аг пюпоптепс р!ааш!6а сап Ьаче йе Еоге!ап РЬ(А Егаишепс !паегтег) ш е!йег опептабоп (р!еаае аее Р!инге 1-4). Мопошег!с снси1аг гесогпЬ!папг р1аяпЫа аге, Ьоччечег, оп!у опе оЕ а !агре пшпЪег оЕ ротепба1 р гас(иста Еоппес1 ш 1!наг!оп геаст!опь Ьепчееп РМА шо1еси1еа тч!1Ь согпра6Ые рготгис))пц тепшш. 01Ьег, !ела с(еягаЫе ргогЬлсп шс!иг(е Бпеаг апд с!гси!аг Ьогпо- апг( Ьетегоро!ушега оЕ чагу!пц яхея опепта6опя апг( сошроябопа.

элеат!оп геаст!опе ьЬои!6 Ье г(еяцпег( чч(тЬ саге ьо аа со шахнпгхе йе у!е16 оЕ спси!аг шопогпепс гесотпЬлпаптя ТЬ!а га пот а яшр!е таа(с. ТЬе 6гаг, лпсеппо!еси!аг яане оЕ йе геас6оп тес)и!геа Ь(аЬ сопсептга- абай! 'ог е'е ои 3' ргоиобщд еобе ГГ рголгобяц еобе 'е 'Ое О~г 5'г л',.~„г е'е Е!СсЛ!чЕ 1-2 С!оп!па 3' апд 3' Рго1гиб!па Еббр Гпггог)исг1оп 1.21 ''ояепсо1есйаг геасиоп ~оггагпо!еси!аг геасиоо НСОКЕ 1-3!пяег- апд!пягагпо1еси!аг Кеас6опя 'чесгог яег)иепсея аге гергеяепгег) Ьу г)аг)гег яЬайп8, ап6 1пяегг яег)иепсея Ьу 11ВЬгег яЬайп8. 6опя оГ Р1 )А, ячЬегеая гЬе яесопс1 Ьпгапю!еси1аг геасгюп ячог)ся гпояг ейк)епг1у ччЬеп гЬе сопсепггагюп оГ РХА гя !ояч, Ноячечег, ая а Вепега! ги1е, ассергаЫе у)е!6я оГ гпопошепс сггси!аг гесошЬ)пап!я сап ияиа1!у Ъе оЪгаше6 Ггогп 118аг)оп геасгюпя сопгашш8 еци)шо1аг апюипгя оГ р!аяшЫ апд гаг8ег РХА, яч11Ь гЬе госа1 ГуХА сопсепггагюп <!О р8/гп! (ВегсочкЬ е1 а1.