Оглавление
1 Введение 3
2 Обзор литературы 5
2.1 Метаболизм катехоламинов и диагностика заболеваний по изменению их содержания в биологических объектах 5
2.2 Методы определения катехоламинов и их метаболитов 11
3 Экспериментальная часть 25
3.1 Исходные вещества 25
3.2 Посуда и аппаратура 25
3.3 Методики эксперимента 26
3.4 Обработка результатов измерений 26
4 Обсуждение результатов 28
4.1 Выбор индикаторной системы 28
4.2 Выбор оптимальных условий и разработка методик определения катехоламинов 29
4.3 Расчет условной константы устойчивости комплекса 34
4.4 Апробация разработанных методик определения катехоламинов 36
5 Выводы 38
6 Список литературы 39

1. Введение

Одной из актуальных задач современной аналитической химии является разработка чувствительных, селективных, экспрессных и простых методик определения маркеров нейродегенеративных и нейроэндокринных заболеваний в биологических объектах, таких как кровь, моча, спинномозговая жидкость, клетки.
Катехоламины и их метаболиты могут выступать в качестве молекулярных маркеров при диагностике болезни Альцгеймера и Паркинсона: по снижению их содержания в биологических жидкостях можно судить о начале заболевания. Трудность определения катехоламинов в биологических жидкостях обусловлена тем, что у здорового человека их концентрации изначально очень низки – на уровне 1 нМ, а при различных патологических нарушениях в ряде случаев они снижаются еще на порядок.
В оценке уровня катехоламинов в крови, моче, спинномозговой жидкости, клетках заключается также один из методов диагностики онкологических заболеваний. Следует отметить, что в большинстве случаев нейроэндокринные опухоли являются катехоламин-продуцирующими, поэтому такие заболевания диагностируют по увеличению содержания катехоламинов и их метаболитов в моче и крови. При каждом заболевании существуют свои характерные маркеры, увеличение концентрации которых относительно референсных значений также является характеристичным для каждой болезни.
При этом следует учитывать, что в крови катехоламины быстро окисляются моноаминоксидазами тромбоцитов, в связи с этим определение маркеров нейромедиаторного обмена в организме (особенно при развитии кризисных состояний) должно быть очень быстрым (в течение 15 – 30 мин после отбора крови). По этой причине актуален поиск простых, экспрессных, позволяющих анализировать одновременно несколько проб, селективных и чувствительных методик определения катехоламинов и их метаболитов в различных биологических жидкостях.
В настоящее время перспективным подходом для решения поставленных задач является использование флуоресцентных комплексов катехоламинов с ионами металлов (в частности лантанидов (европий, тербий)) и органическими лигандами(ЭДТА, 1,10-фенантролин, окситетрациклин). Подобные методики позволяют добиваться чувствительности на уровне 1 пМ, что делает возможным их использование для диагностики нейродегенеративных заболеваний.
Целью данной работы являлась разработка экспресс-методик определения катехоламинов (дофамина, эпинефрина и норэпинефрина) в биологических жидкостях по флуоресценции их комплексов с европием и окситетрациклином в 96-луночном полистирольном планшете.