Егоров - Основы учения об антибиотиках - 1986 (947288), страница 30
Текст из файла (страница 30)
По спектру значений йг нля, как его иногда называют, по хроматографнческому спектру' можно четко различать группы химически 1юдственных антибиотиков я до некоторой степени отличать также антибиотики внутри групп (рпс. 13). Существенное значение при использовании бумажной хроматографии для', идентификации антибиотиков имеет разработка методов, позволяющих проводить этн исследования на ранних этапах изучения аитибиотнческих веществ, т. е. иа стадии культуральных и ндкостей. Однако прн этом встречаются большие затруднения а разгонке антибиотиков, так как факторы, оказывающие влияние па значение йь часто встречаются прн использовании культуральных жидкостей.
Г!реодолеть эти затруднения удалось с помощью методов лнофплизации фнльтратов культуральных жидкостей и экстрагнроваиня нх соответствующими растворителями. Сущность схемы хроматографнческой идентификации антибиотиков из культур на стадии малоактивных культуральных жидкостей состоит в следующем., Культуральиую жидкость, обладающую антибиотическнмн свойствамн, фильтруют и измеряют рН. Точно взятый обьем фильтрата подвергают лнофнльной сушке, затем лнофнлизат взвешивают и разделяют иа две части, одну из которых растворяют в воде, а другую экстрагнруют безводным этаполом при встряхиваппп в те,чение часа.
Растворителгг берут в таком количестве, которое, как правило, позволяет получить 5 — 1О-кратные концентрации по сравнению с исходной культуральной жидкостью. Антибнотическую ак'тивность водного раствора и спиртового экстракта определяют методом бумажных дисков. В случае, если спиртовой экстракт обладает аптнбнотической ' Хромнтографнтеский спектр представляет собой ломаную ланит, хлрнктнривующую полвнтность антибиотика при кронатогрпфиропнкви с использованием определенного набора систем растворителей.
й — 742 129 т г у 4 3 и т з в г 3 4 5 Б т 6 Расгязя изтзии Рхс. !3. Хронатографическне спектры некоторых иавестных антибиотиков 1по )1осхачнловоя и Вонхрачеи, 1961) активностью, схожей с активностью водного раствора лиофилиэата, то проводят хроматографирование в соответствующейсистеме. Хроматограммы проявляют биаавтографическн на чашках с ВасИ1ис зиЬИИБ. Одновременно производят электрофореэ в з иста гном и фосфатном буферах. Если дли изучаемого антибиотика во всех системах 1-го типа значение Ит будет около О,З и выше, то спиртовой экстракт хроматографируют в другой системе.
Прн помощи набора этой системы можно наиболее уверенно отличить антибиотики типа эритромппниа-олеандомпцииа, типа карбомицииа, типа актпномпцнна и хлорамфеникола. Полученные данные позволяют в определенной степени идентифицировать антибиотик или включить его в определенную группу химически близких веществ, или. наконец, определить его как новый антибиотик. 130 рекса потаенны» и~и ипыс «итратыи Заппака и юсеа копюиип акопмипистон Выбпрючпиа о~ са аырослпиь кпномы актпнппипепм г и ,~'~:1нлмипесцсицпя кюпоняа (иая оорсдь1сппк при пиасркбпык апрабпошкеа) Гтеппнрапкнп мифо!ичп- кумьтучпаьныы пропитан, прюаерта сапа поим ическоте епелчтп г г г г 1 о~браконк~ исак1 поныл Мроаерка ьн лпйпост пронуцнранать а~ппбиоппп и спубпипюб «уаипре Подбер уапюппн биоьпюека даа счапннып,ныч приятие~ион Д отбрткеика исаюнеинк уирпмпОи УФ-спек па.ч упипппьнепийи Оирсрспсппс снсюсыатпчсскопь попо'ксииа иродупьчпа Псреичиаа песни бикации асопбиотпка 16 отбракомса итаееснык сподуиеитон иэаестнмк внсибпотиков Рпе.
1К Скеиа выделения актипопнцетои — продуцентов антибиотиков (по Коневу, !981) ба Прп отнесении антибиотика к группе макролидных веществ наиболее детальную идентификацию его можно проводить нисходящей хроматографией в системах типа Заффарони: бензол-формамнд и хлороформ-формамид. Если же антибиотик принадлежит к другим группам соединении, то необходимо использовать групповые системы. Итак, если в результате проведенной работы по идентификации выделенного микроорганизма установлено, что он является новым видом, и антибиотнческое вещество, образуемое нм, не принадлежит к уже описанным соединенпям, то, естественно, и организм п антибиотик должны быть подвергнуты детальному исследованию.
С этой целью прежде всего изучаются условия культивирования микроба, обеспечивающие максимальное образование антибиотика. При подборе сред необходимо иметь в виду, что чем сложнее среда, тем труднее производить выделение н очистку антибиотика, позтому среда для культивирования должна быть по возможности простой по составу и обеспечивать максимальное образование антлбиотического вещества. Пути выделения продуцеитов антибиотнческнх веществ из естественных мест нх обитания н первичной идентификации антибиотиков можно проиллюстрировать схемой (рис. 14).
МЕТОЛЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ АНТИБИОТИКОВ Выделение антибиотиков и их очистка осуществляются разнымй способамн, выбор которых зависит от химической природы антибиотика, характера сопутствующих антибиотику продуктов жизнедеятельности организма (органические кислоты, аминокислоты, пигменты и другие соединения), неиспользованных компонентов среды (углеводы, масла, азотсодержащие вещества, неорганические соли и др.), а также и от того, где накапливается зто вещество — в культуральной жидкости илн в клетках продуцента.
Основная задача первых зтапов выделения аптибиотического вещества — концентрирование биологически активного соединения и очистка от сопутствующих балластных веществ. Основными методамн выделения антибиотиков из нативиых растворов (культуральная жидкость, освобожденная от биологической массы продуцепта) можно назвать следующие: осажденне антибиотика, методы экстракцнн антибиотиков ограпнческими растворителями, сорбцпонные методы с использованием поверхностноэкт~вных веществ (актнвнрованпый уголь, активнрованная окись алюминия н др.) или ионообменных материалов (понообменные смолы).
Прн применении сорбцнонпых методов выделения антибиотиков наиболее трудной задачей является десорбцпя (злюироваппе) препарата. Антибиотик, выделенный одним из указанных способов, предетавляет собой лишь технически чистын препарат, который не может еще использоваться в медицинской практике. Дальнейшая очистка препарата осуществляется пли путем повторной сорбцпк, перекрпсталлпзации, растворением антибиотика в органических растворителях, нли инымп методами. АНТИМИКРОБНЫИ СПЕКТР И ТОКСИЧНОСТЬ После того как антибиотическое вещество с помощью того илн иного метода выделено и хорошо очищено, проверя|от его биологическую активность по отношению к широкому ряду микроорганизмов (проверяют шцрокий аптимикробный спектр). Кроме того, антибиотик исследуют на стерильность, токсичность, ппрогенность, испытывают в отношении действия на лейкоциты крови и определяют другие показатели.
цеть выяснения стерильности готового препарата — установле- 132 иие отсутствии в нем спор мпкрооргшшзмов и, прежде всего, патогенных, Для этого необходвмо, если это возможно, инактнвировать антибиотические вещества, а затем произвести посев его па разнообразные по составу питательные среды (мясопентонный бульон, печеночный бульон, кровяной агар и т. п.). Инактивацпю пенициллина осуществляют с помощью фермента пенициллиназы (пенициллин-й-лактамазы), или пеняциллинацилазы, илп солянокислым гидрокснламипом. Стрептомицин инактивнруют при помощи гидроксиламнна нли цистеина.
Многие антибиотики не удается инактивпровать, поэтому нх стерильность определшот лишь в отношении форм микроорганизмов, устойчивых к этим антибиотикам. Токсичность антибиотика определяют на экспериментальных животных, которым в течение определенного периода времени внутривенно, внутрибрюшинно, внутримышечно, подкожно или инымн путями вводят различные дозы изучаемого антибиотика За такими животными ведут тщательные наблюдения. При отсутствии внешних изменений в поведении животных в течение 12 — 15 сут считают, что испытуемый антибиотик не обладает заметиымн токсическими свойствами. Это, разумеется, первый и предварительный этап в изучении токсичности антибиотика. Прп более глубоком исследовании этого вопроса выясняется влияние препарата на отдельные ткани н органы животных. Некоторые антибиотики обладают кумулятивной токснчиостью, проявляющейся в том, что токсические свойства его при введении в организм пзо дня в лень накапливаются, не обнаруживая каких-либо внешних проявлений, ио в итоге приводят организм к гибели.
Это скрытая токсичность, которая противоположна острой, вполне четкой токсичности препарата, проявляющейся сразу же после первого введения антибиотика. Отсутствие местной и обшей токсичности антибиотика, отсутствие пнрогениости н угнетения деятельности лейкоцитов, сохранение антпбиотической активности препарата в присутствии сыворотки крови„гноя и других веществ, необходимый спектр антямнкробпого действия дают основание проводить дальнейшие испытанпя изучаемого препарата как лечебного вещества. Вместе с этим необходимо определить характер биологического действия антибиотика, иными словамн„выяснить, является лп антибиотик бактериостатическнм пли бактерицидным.
Знание характера действия препарата может создать определенное представление о механизме его аитибактериальных свойств. ЛЕЧЕБНЫЕ СВОЙСТИ4 АНТИБИОТИКОВ Следующий этап изучения антибиотик» вЂ” определение его фармакологических и терапевтических свойств. Лечебные свойства антибиотиков проверяют иа экспериментальных животных, зараженных соответствующей дозой определенного 133 вида патогенного кпшроба. Обычно используют дозы инфекции с таким расчетом, чтобы вызвать гибель Б0% животных (ЕХ~зо) и гибель (00')~ животных (ЕОшк).
(.О-.ч — минимальная смертельная доза. Животных делят иа 3 группы. Одной группе животных антибиотик вводят сразу же после заражения; вторая группа животных подвергается обработке антибиотиком через некоторое время после заражения (через 5 ч илп позже). Во всех случаях применяют такие максимальные дозы антибиотика, которые переносится животными. Третья группа подопытных животных не подвергается обработке антибиотиком — это контроль. По количеству выживших особей в опытных группах судят о терапевтической ценности изучаемого антнбиотнческого вещества. Минимальное котичество антибиотика, способствующее предохранению животного от смертельной дозы инфекции, составляет минимальную терапевтическую дозу. Отдельные антибнотические вещества, имеющие лечебные свойства, проявляют вместе с тем в определенных концентрациях токсичность по отношению к микроорганизму.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
