Егоров - Основы учения об антибиотиках - 1986 (947288), страница 29
Текст из файла (страница 29)
В последнее время показано, что продуцепты, например, аминаглпкозидных антибиотиков могут быть найдены, ьак правило, только среди стрептомпцетов, устойчивых к действию этих антибиотиков. Известны н другие методы выделения микробов-антагонистов нз естественных мест пх обитания. По мнению некоторых микробиологов, к настоящему времени выделено и изучено не более 10 процентов всех имеющихся в природе мнкроорганнзмов. Г!оэтому необходимо изучать и разрабатывать новые приемы выделения микробов. которые бы способствоналн максимальному обнаружению их в природе. 123 МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ- ПРОДУДЕНТОВ АНТИБИОТИЧЕСКИХ ВЕШЕСТВ ' После того как микроорганизм, обладающий ценными антйбнотнческими свойствамп, тем плн иным способом выделен пз субстрата, необходимо определить принадлежность этого организма к определенному виду.
Следовательно, исследователи должны владеть методами идентификации микроорганизмов-цродуцеитов антибиотиков. Известно, что определение видовой принадлежности микроорганизмов в задача нелегкая, требующая больших навыков н умения. Прп определении вида микроорганизма-продуцента антнбнотического вещества используется большой комплекс признаков. В первую очередь используются признаки, легко наблюдаемые при культивировании организмов визуально нлн с помощью микроскопа. Исследуются и о р ф о л о г н ч е с к н е и р п з н а к и (форма ко. лоннй на твердых средах, форма и размеры клеток, спор я спороиосцев, характер спорообразования, наличие жгутиков, капсул нлп слизи вокруг клеток и другие признаки) и культуральные п р из и а к н (характер роста организма на различных средах,наличие илн отсутствие окраски субстрата н самих клеток, развитие в аэробных или апаэробных условиях, температурный оптимум развития и т.
д.). Однако установлено, что морфологических и культуральных признаков микроорганизмов часто бывает недостаточно для определения вида мпкроорганизма. Тем более это трудно сделать в группах микробов, близко стоящих друг к другу. Поэтому наряду с морфологическими и культуральнымн признаками для идентификации выделенных микроорганизмов используют и другие признаки; к нх числу относятся физиологи ческ и е и бнох н и ические особенности организмов. Под физиологическими свойствамп микроорганизмов необходимо иметь в виду биохимическую сущность н биологическое значение тех процессов, которые совершаются в культуре, а не простую констатацию явлений (например, разжижение желатпны, пептонизацня молока и т.
п.), которые иногда обнаруживаются на случайно взятых н часто неизвестных по составу средах. К биохимическим особенностям организма относятся характер и пути превращения компонентов субстрата с образованием типичных дзя данного вида продуктов обмена (кнслот, спиртов, пигментов, витаминов, антибиотиков, аминокислот н др.), типичные реакции метаболизма„ характеризующие биосннтетическне процессы в клетке, последовательность оснований нуклеиновых кислот, специфичная для разных видав организмов, а также другие признаки. В последнее время все чаще н чаще для определенна видов используют серологнческне реакции, которые весьма специфичны н позволяют дифференцировать виды, близко стоя~иве друг к другу.
Реакция агглютипапнн и преципитацин находят при- 124 менение для идентификации ие только бактерцальиыхоргаппзмоа, но и акткномицетов. Для дифференциация видов бактерий и актнномнцетов с успехом используют бактериофагп и акти нофаги. Для распознавания видов актиномипетов лучшнмп признаны актпнофаги, выделенные из лизогенных культур актшюмнцетов. Обычно такпе фаги оказываются более спецнфнчнымп по характеру и спектру их действия. Однако прн использовании актииофагов для целей дифференцирования видов следует иметь в виду и те трудности, которые обнаруживаются при этом. Необходимо помнить, что среди актиномнцетов нередко встречаются штаммы, устойчивые к фагам, а среди актннофагов имеются и полпфагн, лизирующяе клетки многих впдов актнномицетов.
Все это свидетельствует о том, что использование фагов для пдентификашш видов может иметь лишь вспомогателшюе значение, служить дополнительным признаком. Определенное значение при ндентнфнкашш видов актиномкцетов-антагонистов, принадлежащих к одной группе, имеет метод, основанный на специфическом действии микробов- а н т а г о н и с т он. Специфичность действия микробов-антагонистов состоит в том, что, например, продуценты стрептомпцнна, выделенные из различных районов земного шара, пе подавляютразвитие друг друга. Такая закономерность характерна и для друпп видов актиномнцетов. Исходя из этого, предложено для целей идентификации внешне сходных культур актипомицетов применять метод так называемого перекрестного антагонизма.
Перекрестный антагонизм. Сущность метода состоит в следующем. Агаровые блочки с одним видом выращенного актиномицета помешают на поверхность агаровоп пластинки, засеянной другим видом актпномицета. В качестве тест-культуры используется тот же штамм организма. При этом обнаруживается, что один внд актнномицета-антагониста подавляет рост других видов актняомпцетов и не подавляет развитие своего вида (табл. 32). Метод специфики межвидового антагонизма может быть и»- пользован лишь прп идентификации внешне очень блпзкпх видов актиномпцетов и, по-видимому, не может оказать существенной помощи прп систематике далеко стоящих видов.
Однако необходимо иметь в виду, что при перекрестном антагонизме изучаемый штамм актпномицета иногда не подавляет роста других известных видов, но оц может ие принадчежать нн к одному пз этих видов. Так, 5гг. улзеиз не подавляет роста 5йс гйпозиз, хотя это совершенно различные виды. Илп в присутствии Иг.
1апеЫи!ае не происходит подавления развития 5й; дпзппз (табл. 33). Прн использовании метода перекрестного антзгонззма следует иметь в виду также возможность самоугпетения, которое иногда имеет место среди некоторых штаммов акткномнцетов. Культура Яг. !асепди(ае штамм 2335 выделяет вещее~на, вызывающие са- таил»низ зт Перекрестный антагонизм у нмготарыд видов аптнномнцетов (по Красильникову, 1951) таад-сот»иванн и в и Вид атааоиидет-антагониста и П о и и с ч а и и е, 3~ни — » — атсттсгииа низ»аления опием нии «+» — пол»аленин апета. таблица ау Явамннв персарестното антагонизма между отд льнымн андами аатвномнцетов (по Те(1!оп. !%З1 1 ест-пргааиаин 'о % 6 Ь 'и '» Вид»атммипнмм аитнипита и р и и е ч а и и е . зннг ° — » — отсу»анин подавления роппь алаи а+» — подавление инта.
моугнетепне, напоминающее действие лнзпнов. Вокруг атаровых блочков втой культуры образуются зоны отсутствия роста Яс. !ппеае(исае. Природа зтих веществ пока неизвестна. Оценивая все случаи, которые могут иметь место при использовании метода перекрестного антагонизма, следует заметить, что данный метод не помогает репзенню вопроса идентификации впдов, но может оказать большую помощь прп подразделении на виды Ягер1 стуггз гиисг 8(гер(от усез и(о(агент ЫгерМтусез геейго1ог о(гер(инусез йгамги Ягеризлусее а(озарогиз Ягор(отусез (оиа(трогай 31гер1отусез аизгаз Ягер(отусеа аг(миз М 241 Ягер1ооц(ав агггео(ис(енз . Ягер(отусеа г(тозиз Ягср(отусее (гигМос 81гер(отусм (агни»(и(ие ..
к М И 3 м культур внутри отдельных групп актяномацетов. Широкое применение при идентификации микроорганизмов-продуцентов антибиотиков нашли и другие методы. Использование форм организмов, устойчивых к определенному антнбиотическому веществу. В основу этого метода положрны даа основных признака, саязапных с образойаннем и де>>станем антибиотиков. 1. Каждый антибиотик образуется одним или несколы>имя определенными впдамп микробов. 1 2.
Микроорганизмы, устойчивые к определенному антибпотнку, ус>ойчнвы также к аиткбнотнческнм веществам, близким по химическому строению и биологическим свойствам к первому антибиотику. Вместе с тел> они могут обладать чувствительностью к антибиотикам, имеющим другую химическую природу и, следовательно, другое биологическое действие. Определение антпбаотика, образуемого неизвестным организмом, может быть проведено путем испытания его биологического действия на ряд микроорганизмов, чувствительных и устойчивых к известным антибиотикам. Таким путем можно выяснить сходСтво или различие биологического действия изучаемого вещества и известных антибиотиков и тем самым решить вопрос о химическом сходстве илн различии этих веществ.
Для исследования этого явления изучаемый организм высевают на поверхность питательного агара в виде штриха нли в виде отдельной макроколонип в центре чашки Петри. Образуемое организмом антибнологяческое вещество диффуиднрует в окружающий агар и создает определенную зону.
Пересекая эту зону чувствительными и устойчивыми к определенному антибиотику микроорганизмами, можно выяснить сходство биологического действия изучаемого препарата с известным антибиотиком. Установив сходство биолоп>ческого действия исследуемого вещества с известным антибиотиком, можно предположить, что изучаемое соединение относится к определенной группе антпбнотическпх веществ и образуется соответствующими органнзмамп. Однако следует иметь в виду, что оценка принадлежности изучаемого организма к тому илк иному виду продуцентов может быть лишь ориентировочной.
Так, было известно, что й-лактах>иь>е антибиотики образу>отся только плесневымн грибамк, но последующие исследования показали, что знтпбиотнческне вещества этой природы образуют некоторые виды стрептомнцетов и собственно бактерий. Метод хроматографии. Хорошим методом для идентификации антибиотиков и нх продуцентов является метод хроматография, открытый выдающимся русским ученым Цветом еще в 1903 г. п теперь очень широко используемый в лабораторной практике. Метод широко применяется прн идентификации антибиотиков на ран>шх стадиях исследования, что имеет весьма важное значение. Определение антибиотика иа ранних стадиях работы может значительно сократить время его изучения.
Иногда метод хроматографии бывает наобход»мо дополнить Важное значение при оценке результатов хроматографии имеет положение пятен исследуемых веществ, характеризуемое коэффициентом Иь Коэффициент определяется, отношеинец расстояния, которое проходит пятно изучаемого вещества от линии старта за определенное время, к расстоянию фронта растворителя, прошедшего от линии старта: : раггтлннае, нроаденное летном паунаемого еещестеа расстатние 4рснта раапеорителе, нроаденное ин старане Воспрокзводнмость значений 1Гг зависит от постоянства следующих факторов: качества бумаги, температуры. степени чистоты растворителей, состава газов атмосферы, в которую помещена бумага, однотипности процедур н аппаратуры. При использовании метода хроматографии на бумаге для идентификации антибиотиков было показано, что значение Йг зависит также и от системы растворителей, от степени очистки изучаемого антибиотика и от состава культуральной жидкости.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
