Егоров - Основы учения об антибиотиках - 1986 (947288), страница 26
Текст из файла (страница 26)
зрАегоЫез (рпс. 7). Прп этом отмечено, что у активного штамма во вторую фазу роста актпиомицета (фаза 1 Х Ю Ф Х я' Чогяя лфФвареввзняеу, гргз Рне. 7. Изменение глюкозоксндазноа актнвностн в нропессе развнтня 51гергогвкгез зрзегонзез (штамм 351 н его неактнвного мутанта (штамм 144) 1!О ~ аббе и Бру $4аг ьм ~ф гуу г г 4 Б Б)н«р «пил«!!!пропп«!!«, гугп иментальиые да глюкозе ксидазы нные и прежпрн сравнн- п,гг агп и/Б -' ад .:, Бгб $ пгг агп ф БПБ и ППБ ~ ПП4 ! г ~ 4 Х йпер!««ульптй«ррпл«л«, гут Рнс. 9.
Влияние иовобиоцнна (400 мкггмл) на активность каталани у я!тел!ошибка ераетоЫеа (штамм 35) н есо неактивного мутанта [штамм !44): г, а — активность фермента бев вювабаакннв. р. е — вктнвность фер мента с вобавкоа емснбкотйкв 44! начала биосинтеза и накопления в среде новобиоцниа) активность глюкозоксндазы и некоторых дегидрогецаз резко снижается. Полученные давние позволили сделать предположение о том, что новобиоцин, по-видимому, ингнбирует активность некоторых ферментов собственного продуцента. Для проверки этого предположения новобиоцин в концентрации ЮО мкггмл добавилн в среду перед началом развития продуцеита н изучили влияние его на активность каталазы, дегндроиецаз и глюкозокспдазы.
Результаты опытов показали, что к новобноцину очень чувствительна глюкозоксидаза (рис. 8), некоторые дегндрогеназы н практически не чувствительны каталаза (рнс. 9) и пероксидаза. Такик! образом, полученные зкспер де всего в отношении дегидрогеназ н Рис. 6. Влияние новобаоцнне иа тлюкозокснлааную актив. ность веобраауюшего ' антибиотик штамма (444) Згтергошусев налете!с!бес ! — акти квасе фермента бев аовабнаанне. 2 — актнвнюсть фермента арн асбвввенна ватман отака Ибб мкт!мв! Рис.
1О. Плняиие ристоивнина (400 мяг/мл) на солержаиие стабнлгиюго и лабильиого Фосфора н машелни 1сГасогЖа /гисЦегг иаг. гпцоглрс!лгг г — ФосФор ивбивьвыа бст аитисвмтиаа р — то аа», ииг:с а» тибиотви. а — Фосеор сгабиаь. выа бев ристаиввииа, Š— то не. ввюс рвстоиию1в 112 тельном пзучсппн их активности у обраэуюшего и пе образующего внтвбвотнк штаммов 7/г. арйегоИез, а также результаты изучения действия новобиоццна иа активность (чувсгвительиость) этих ферментов у неактивного штамма четко показывают, что новвбпоцин оказывает пншгби)гуюшее действие иа активность некоторых дегидрогеиаз и'глюкозписг1дазы и, возможно, выполняет роль регулятора пх активности..
Ристо миди'и. Количество ристомпцпна от 500 до 800мкг7мл, образуемое нокардией,берез 4 — 5 сут нормального роста, прп внесении в среду непосредственно перед ее засевом мицелием атсгбагйа 7гиб71)егг чаг. ггз1огггугЮ полностью подавляет развитие. продуцента антибиотика. Ристомицин в концентрации 400 мкг7мл, добавленный в синтетическую среду перед засевом ее мвцелнем нокардип, в четырераза тормозит образование антибиотика иа 5-е сутки роста нокардпи. Однако: рост микрооргашрзма при этом даже несколько возрастает. Наиболее чувствительны к действию рпстомицина процессы, связанные с потреблением азота, фосфора и бпосинтезом антибиотика. Как показали наши исследования, уже через 30 мин сравнительно неболыпое количество рнстомицина сорбпруется на мицелии, откуда Он довольно легко и быстро переходит в физиологический раствор при смывании.
Прп этом чем выше концентрация рпстомнцина в среде, тем больше его сорбпруется мицелнем. В дальнейшем через 6, 12 ч роста нокардпи изменений не наблюдается. Полученные данные показывают, что рпстомпцпн, по-видпмому, не проникает внутрь йл мицелпя нокардии. Действие на проду- цент он оказывает, находясь на поверхнодр 7'б стп клеток продуцента антибиотика. Ристомяцин, добавленный в среду в 47 / количестве 400 мкг7мл, оказывает суше- 47 ственгюе влияние на фосфорный обмен Агос. )гисЦега наг. г(з(отустб Антибио- 47 . ° 'ь " тик изменяет содержание всех форм фос- фора в мнцелии продуцента рпстомнцп- 47 ',7 на. В его присутствии происходит резкое (почти и 4 раза) увеличение содержания 7)гггбг иулылийьрИм д г,и„стабг1лш|ого фосфора по сравнению с контролем (рис. 10).
Содержание лабильного фосфора в мицелпн покардин в опыте (в присутствии рястомпцнна) существенно отличается от количества лабпльного фосфора, содерзсашегося в ыипелип, раэвнваюшегося в среде беэ внесения в нее антибиотика (контроль). Гели в контроле в первые сутки роста лабнльпого фосфора мало, после чего набл1одается его Ф ь $ ег ег Ф ч ур ~~ ат д га Рнс.
Н Нлттяние ристоминиттв (460 мнг(мл) иа абрачование органачееивх инслот в культуре Лосаттаа /гнггт)егт' чаг. гтигои~устит'. т — летучие нвелотм. П— нетаинслотм, Ш вЂ” антнбиотичесиая иродухтввноетьт / — иеитреиь аост иитибиеомиь т — и среду дебиидеи иити- биетии увеличение и затем опять уменьшение, то в опыте содержание лабнльного фосфора прямо противоположно контролю, т. е. в первые сутки его содержание в мицелпп высокое, затем снижается н вновь понышается. Таким образом, изучение влияния рнстомицпна на фосфорный обмен его продуцента Хос.
)гисЦегт наг. гЫотрс1л( показало, что этот антибиотик способствует увеличению содержания в мнцелии собственного продуцеита всех форм фосфора: общего, минерального, лабпльного и особенно стабильного. Вместе с зтпм прп развитии нокардип в среде, в которую добавлено 400 мкг/мл ристомицина (рпс. 11), наблюдается уменьшение образования кетокпслот (ппровиноградной, ацетоуксусной) примерно в 2 раза по сравнению с контролем. Ристомицпн оказывает определенное влияние на синтез нуклеиновых кислот тиос.
1гистгуег( (табл, 29). Из данных, приведенных а табл. 29, следует, что рнстомнцпн, добавленный в среду в концентрации 400 мкггмл, с первых суток и до конца роста нокардпн немного пнгибнрует синтез ДНК, практически не оказывает влияния на содержание РНК в первые двое суток роста и способству. ет увеличению РНК во вторую фаау роста продупента (3 — 4-е суткц). Эта же концентрация рпстомпцпна снижаег у Хос. )гпсЦег1 наг.
г(Иогггдс(п( активность таких ферментов, как глпцеральдегидрофосфатдегпдрогеназа, транскетолаза, нзоцптратдегндрогеназа н сукцнпатдегндрогеназа. Ингнбнрованне этих ферментов в присутствии рнстомпцина приводит к резкому сннженшо бпосннтеза антибиотика. ИЗ Тоблицо 29 Вииянне рнстомнаииа на синтез нуквеииовмх кислот Ргосогдга 1гисГЦмт таг. гманаржнг Содержанке нркленноема наслот, нгГг ! днК РНК Вревм роста, сра доеевлевне' а среду Рктсмвкм а. икг/кл их Антианосгь фермента глюмззо-6-фосфатдегядртиеназм двух штаммов Басер1отусез иоигрет' Торопова, Нугуманов, Егоров, !9741 Накатанный мтамм Активный мтамм Врем» роста„ стгг активность оермента, нк мслврмнк на ~ мг ее кнр актнанесть Фермента, мн моль!мм на ! мг Оеммктв* Оком а.
мг И 216 380 495 402 208 250 272 146 275 411 557 430 156 152 69 44 114 Нистатин. Антибиотик нистатнн а процессе развития актииомицета в.основном содержится в мпцелни, по-вндпмому, клеточные стенки Ягер(олгусрз поигзер с трудом пропускают его молекулу. Для выяснения влияния нистатпна на собственный продуцент нам пришлось использовать довольно высокие концентрации антибиотика, а также получить неактивный (не образуюшпй антибиотик) штамм и сравнивать их биохимические особенности.
Нистатин в концентрации 8000 ед/мл, внесенный в среду перед началом развития актииомицета„полностью подавляет синтез антибиотика, утиетая при этом образование биомассы продуцента лишь на 10— 20%, в концентрации 4000 ед1мл никакого заметного впаянна на биосинтез нистатина не наблюдается. Изучеиие активности фермента пентозного цикла расшепления углеводов (глюкозо-0-фосфатдегидрогеназа) у активного н неактивного штаммав о(г. поигзе! показало, что у штамма, образующего нистатпн, активность фермента глюкозо-б-фосфатдегндрогеназы на 4-е сутки роста в 4 раза ниже, чем у штамма, не образующего антибиотик (табл. ЗО). Резкое снижение активности фермента Таблица 30 происходит именно в тот период, когда актиномьЩЕт Начниаст образовывать нистатин. Эта закономерность дает основание выскавать предположение, что антибиотик оказывает регулируюшсе влияние на актннность глюкозо-б-фосфатдегидрогеназы.
Непосредственное влияние добавок нистанина на активность некоторых ферментов у активного и неактивного штаммов Яг. лоигзеь подтвердило это предположение (табл. 3!). Тобльгцо 87 Действие инсгатвиа (8000 еа/мд) иа автивность некоторых 4мрментов у двух иьгвммов 31гер1огтуьхв поигье! (Торопове, Нугуманов, Егоров, 1974! гаамомье- 4аь4мадзгад- рагаизаа. мамоаьамм аа 1 мг о ххи Время разымая, еег аьмцаизг- дгаммюгмммааьаь/маи яа 1 мг Огана яаргязада- 1 мг ааааа 1360 1175 670 293 1005 860 631 201 Акьмвный нгтвмм бее ни отвеина Активный ниамм + нистатнн Неактивный мутант бев ннстиьнна Неактьмиый мутант + ннствтин Как показали наши исследования, нистатин оказывает действие только на живую, развивающуюся культуру актиномицета.
Полученные результаты о влиянии нпстатииа на некоторые ферменты Яг. аоигаеь' указывают, что ферменты пентозного цикла превращения углеводов более чувствительны к антибиотику, чем ферменты гликолиза и цикла трикарбоновых кислот. Нистатин, по-видимому, выполняет в метаболизме организма-продуцента определенную регулирующую функцию: подавляя ферменты пентозного цикла, ои как бы направляет обмен веществ по более «экономичному» пути Эмбдена — Аьейергофа — Парнаса (ЭМП) и снособствует большему накоплению энергии для процессов биосинтеза. Не исключено, что в первой фазе развития актиномицета, когда происходят энергичные конструктивные процессы, функционирует пентоэный цикл превращения углеводов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
