166415 (740251), страница 2
Текст из файла (страница 2)
В ВЭЖХ калибровочные графики микропримесей обычно линейны и проходят через начало координат. Чтобы избежать возможных частичных потерь образца, проводят калибровку методом внутреннего стандарта (по соотношению высот пиков), причем внутренний стандарт известной концентрации добавляют до предварительной обработки образца. В этом случае потери учитывают за счет эквивалентного изменения концентрации внутреннего стандарта и образца. Стандартный образец, близкий по свойствам микропримеси, добавляют, когда трудно выделить анализируемое вещество в чистом виде, чтобы построить калибровочный график. Подробнее калибровка по методу внутреннего стандарта рассмотрена в гл. 10.
При анализе сложных смесей, в частности в тех случаях, когда наблюдаются эффекты влияния матрицы или когда получение в чистом виде исходного образца, для которого строится калибровочный график, затруднительно, применяют метод добавления стандарта. Наличие других компонентов в образце может влиять на степень удерживания и (или) высоту пика интересующего вещества. Метод добавления стандарта состоит в следующем. Образец разделяют в хроматографе и измеряют высоту hx интересующего нас пика. После этого добавляют известное весовое количество Wx вещества Х и повторяют разделение, определяя высоту пика h'x вещества X. Для вещества Х строят калибровочный график и, определив калибровочный коэффициент Sx=(h'x–hx)/Wx, вычисляют количество вещества Х в исходном образце как hx/Sx. Для проверки линейности графика берут несколько значений Wx. Метод добавления стандарта не обеспечивает поправки на нестабильность базовой линии, на помехи со стороны других компонентов и т.д. Эти помехи должны быть выявлены до добавления стандарта.
Методом, альтернативным методу добавления стандарта, является получение образца без анализируемого вещества и использование этого образца как матрицы для подготовки стандартов при обычной калибровке.
При определении микропримесей нужно придерживаться следующих рекомендаций.
-
Проводить предварительное концентрирование образца, а в ряде случаев и предварительную его очистку.
-
Использовать большие объемы образца и короткие эффективные колонки, заполненные частицами сорбента менее 10 мкм, особенно микроколонки.
-
Применять наиболее чувствительные детекторы с высоким отношением сигнала к шуму.
-
Применять хроматографические системы, обеспечивающие высокую разрешающую способность для микропримесей (α>1,2) при относительно низких значениях к' (0,5–1,5).
Если это возможно, то разделение следует проводить в обращенно-фазном варианте, когда основной компонент выходит в зоне to. 5. Калибровку проводить по высоте пиков.
Литература
-
Kucera P./J. Chromatogr, 1980, v. 198, p. 93–109.
-
Bowermaster J., McNair Я./J. Chromatogr, 1983, v. 279, p. 431–438.
-
Scott R.P.F./Adv. Chromatogr., 1983, v. 22, p. 247–294.
-
Van der Berg J.H.M., Horsels H.W.M., Groenen R.J. Af./Chromatographia, 1984, v. 18, No. 10, p. 574–578.
-
Freebairn K.W., Knox J. Я./Chromafographia, 1984, v. 19, No. 1, p. 37–47.
-
Schoenmakers P. /, Billiet H.A.H., DeGalan L./J. Chromatogr, 1981, v. 205, p. 13–30.
-
Jandera P., Churacek J./J. Chromatogr, 1980, v. 192, No. 1, p. 19–36.
-
Lawrence J.F., Frel R.W. Chemical Derivatisation in Liquid Chromatography. Amsterdam, Elsevier, 1976. 277 p.
-
Morris C. /., Morris P. Separation Methods in Biochemistry. N. Y, J. Wiley, 1976. 267 p.
-
Blau K., King G.S. Handbook of Derivatives for Chromatography London, Heyden, 1977. 784 p.
-
Kissinger P.T. e. a./J. Chromatogr. Sci, 1979, v. 17, p. 137.
-
Lawrence J.F. Organic Trace Analysis by Liquid Chrcpiafography. N.Y., Acad. Press, 1981. 288 p.
-
Roos R.W./J. Chromatogr. Sci, 1976, v. 14, p. 505.
-
Nachtmann P., Budna K.W./J. Chromatogr, 1977, v. 136, p. 279.
-
Clark C.R., Wells M.M./J. Chromatogr. Sci, 1978, v. 16, p. 332.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
