13977 (685973), страница 4
Текст из файла (страница 4)
Морские свинки легко заражаются при интрадермальном введении вируссодержащего материала в плантарную поверхность задних лапок методом тунелирования в дозе 0,2-0,5 мл. Заражают не менее 5 голов. Первичные поражения обычно появляются через 2-5 дн (по мере созревания). Вторичные поражения - везикулы в ротовой полости - обычно развиваются при заражении штаммами, адаптированными к морским свинкам.
Для выделения вируса чаще всего используют культуру первично-трипсинизированных клеток почек свиней или телят. Наблюдение за инфицированными культурами клеток ведут 7 дн, микроскопируя их ежедневно. Специфическая дегенерация клеток при подтверждении её специфичности в РСК свидетельствует о наличии ВЯ в испытуемом материале.
Индикация и идентификация вируса. В качестве экспресс-метода в настоящее время широко применяется ПЦР. Это быстрый и чувствительный метод обнаружения ВЯ в тканях путем энзиматической амплификации РНК гена полимеразы.
РСК по 100%-ному гемолизу. Применяется для определения типов и подтипов (вариантов) ВЯ, вызвавших заболевание животных, а также для проверки производственных штаммов ВЯ при изготовлении вакцин и лабораторных штаммов в научно исследовательской работе. Антигенное родство (К) более 70% свидетельствует о том, что штаммы по антигенным свойствам ндентичны друг другу и относятся к одному и тому же варианту, от 10 до 70% - к различным вариантам (подтипам) и менее 10%- к различным типам.
РСК по 50%-ному гемолизу. Успешно применяют в работе научно-исследовательских лабораторий и учреждений биологической промышленности. Разработан способ изучения иммунного статуса вакцинированных против ящура животных в РСК. Он позволяет специалистам на уровне областных ветлабораторий проводить мониторинг за иммунным состоянием стад в простой и достоверной реакции.
РПГА. Это простой, ускоренный, чувствительный метод идентификации ВЯ. По чувствительности реакция превосходит общепринятый метод типирования ВЯ в РСК в 8-16 раз Сущность её заключается в том, что нагруженные АТ эритроциты агглютинируются при контакте с ящурным АГ гомологичного типа.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика
Ретроспективная диагностика с целью определения типа и варианта ВЯ, вызвавшего в прошлом заболевание животных, основана на идентификации АТ в РПСК, РДП и РРИД, НРИФ, реакции серозащиты на мышатах и РН в культуре клеток.
Для достоверного выявления АТ и определения их типовой специфичности пробы сыворотки крови должны быть взяты не ранее 7 дн с момента появления у животных признаков везикулярного заболевания или проведения вакцинации. На исследование следует направлять 5-10 проб сыворотки от каждой возрастной группы. На партию проб сыворотки, направляемой для исследования, оформляют сопроводительный документ.
Выявление, идентификация типовой специфичности и количественное определение АТ к ВЯ в РРИД, РПСК, РНСК и НИФ могут проводиться в условиях обычных ветеринарно-диагностических лабораторий и не требует создания более строгого санитарного режима, поскольку проводятся с неинфекционными материалами.
Для обнаружения ингибиторных (неполных) АТ применяют РНСК (или РПСК). Эти АТ отличаются высокой авидностью. Они формируют комплекс АГ-АТ, не адсорбирующий комплемент. Связываясь с АГ быстрее полных АТ, они блокируют его, но не связанный при этом комплемент в присутствии гемолитической сыворотки вызывает лизис эритроцитов. Ингибиторные АТ обнаружены сейчас при многих инфекциях, в том числе при ящуре. Данная реакция применяется для определения типов ВЯ по сывороткам переболевших животных, а также для обнаружения постинфекционных и поствакцинальных АТ.
Дифференциальная диагностика. При дифференциальной диагностике ящура необходимо исключить ВС, ВБС, ВЭС, катаральную лихорадку овец. Для дифференциальной диагностики в лабораториях используют диагностические наборы, выпускаемые биологической промышленностью, для ящура и ВБС.
Иногда в материале от людей, подозреваемых в заболевании ящуром, выделяли возбудителя энтеровирусной инфекции человека - вирус Коксаки серотипа В. Вирус вызывал видимое ЦПД в перевиваемых культурах клеток в течение 24 ч, имея икосаэдрическую форму, размером 20-30 нм и вызывал гибель мышат при интрацеребральном заражении.
7. Иммунитет и специфическая профилактика
Продолжительность иммунитета у животных, переболевших ящуром, составляет 8-12 мес, у свиней - 10-12, у овец - около 18 мес. Отдельные животные-реконвалесценты приобретают некоторую устойчивость против гетерологических типов вируса. При ящуре возникает тканевый и гуморальный иммунитет. Местный иммунитет формируется раньше, чем гуморальный, но он короче. Поэтому при реинфекции через 4-7 мес на месте введения вируса образуются афты, но генерализации процесса не происходит. Установлено, что при ящуре комплекс защитных реакций организма начинает действовать с момента контакта возбудителя со слизистыми оболочками, обусловливая определенную закономерность в развитии специфического местного иммунитета. На белых мышах ВАЬВ/с и морских свинках, иммунизированных одинаковыми дозами антигена ВЯ нескольких штаммов типа SАТ-1, продемонстрирована связь показателей тестов бласттрансформации, ИФА и сероредукции, которая определялась статистически значимыми коэффициентами корреляции. Эффективность первичной иммунной реакции организма на клеточном уровне может количественно детерминировать развитие гуморального фактора иммунитета. Для обеспечения устойчивого благополучия страны по ящуру в РФ реализуется система мероприятий, приоритетными в которой являются предупреждение заноса ВЯ на территорию, а в районах высокой степени риска - вакцинопрофилактика с централизованным обеспечением регионов вакцинами за счет федеральных противоэпизоотических средств.
При парентеральной вакцинации КРС противоящурной вакциной уровень местного иммунитета в большей степени, чем гуморального, зависит от концентрации иммунизирующего антигена вируса и количества адъюванта в прививной дозе. Ревакцинация животных даже меньшим, чем прививаемая доза, объемом вакцины способствует усилению местного иммунитета, в то время как уровень ВНА остается неизменным. Эго, видимо, указывает на относительную автономность местного иммунитета у КРС при профилактической вакцинации. К концу 1-й нед вырабатываются ВНА, а спустя еще несколько дней - КСА и затем ПА. ВНА сохраняются в течение нескольких месяцев, а КСА и ПА - 2-3 мес.
У животных-реконвалесцентов в отличие от привитых инактивированной вакциной отсутствуют АТ к вирусиндуцированной полимеразе.
Иммунитет обычно длится около года и даже дольше. Он еще сохраняется после исчезновения ВНА и зависит от свойств инфицирующего штамма вируса, а также от реактивности животного и всегда направлен против гомологичного типа вируса.
Доказана возможность пассивной передачи поствакцинального клеточного иммунитета. Показано участие цитотоксических лимфоцитов в ранние сроки формирования противоящурного иммунитета. Клеточный иммунитет связан с функционированием лимфоцитов, рецепторного аппарата и соединения их с антигеном. За клеточный иммунитет отвечают Т-клетки.
В Российской Федерации и странах СНГ для специфической профилактики ящура применяют гидроокисьалюминиевую вакцину, которую готовят из инактивированного вируса, культивируемого в переживающей ткани слизистой оболочки языка не иммунного к ящуру КРС (метод Френкеля), а также из вируса, полученного в суспензионной культуре клеток ВНК-21/13. Вакцины содержат инактивированный формалином вирус и сообщают иммунитет взрослым животным до 4 мес.
Вирус в производственных условиях концентрируют ультрафильтрацией, полиэтиленгликолем или полиэтиленоксидом, что дает возможность повысить концентрацию антигена в десятки и сотни раз.
Первая инактивированная вакцина была предложена Вальдманом и Кобе в 1938 г. В дальнейшем эта вакцина была модифицирована в различных вариантах. В настоящее время для крупного и мелкого рогатого скота, как правило, применяют сорбированные, а для свиней - эмульгированные вакцины. Трехвалентная ГОА-формолвакцина из ВЯ типа А №550, О №1618 и С №564 авирулентна, безвредна, стерильна и отличается выраженной иммуногенной активностью.
Выраженный иммунитет у привитых животных наступает на 10-14-й день и достигает максимума через 3-4 нед. Иммунитет у взрослых животных длится 6-12 мес. КРС обычно ревакцинируют 1 раз, свиней - 2 раза в год. ВНА в сыворотке крови появляются уже к концу 1-й нед, достигают максимального титра в 3-5 нед, затем их концентрация постепенно снижается. При систематической иммунизации взрослых животных против ящура инактивированными моновакцинами у них поддерживается стабильный уровень АТ не ниже 4,5 1оg2 на протяжении 6 мес. В течение последующих 3 мес идет медленное снижение титров АТ до 3,5-3,7 1оg2 к концу 6-го мес, что может служить основанием для уточнения схемы вакцинации молодняка этого возраста.
Колостральный иммунитет хорошо выражен, однако телята, не получавшие молозиво, не имеют сывороточных АТ, несмотря на то, что коровы были иммунизированы. После приема молозива титр АТ в сыворотке телят больше, чем в сыворотке матерей. АТ у телят сохраняются в течение 5 мес, хотя пассивная защита продолжается до 3-х мес. Продолжительность колострального иммунитета также зависит от типа вируса. Материнские АТ могут мешать образованию иммунитета у потомства.
Замена традиционных моновалентных инактивированных вакцин на би- и трехвалентные вакцины, приготовленные из очищенного концентрированного и инактивированного вируса типов А22, О1 и Азия1, формирует у привитых животных напряженный и продолжительный иммунитет более 12 мес после однократной прививки, в т. ч. у молодняка КРС на фоне колострального иммунитета.Универсальная эмульсионная вакцина создает достаточно напряженный иммунитет у супоросных свиноматок и обеспечивает их защиту от экспериментального ящура в первые дни после опороса при двукратной прививке. Поросята, родившиеся от 2-кратно привитых свиноматок, в большинстве своем не заболевали и оставались живы при контакте с зараженными матками. Введение таким поросятам инактивированной вакцины в 3-дневном возрасте сопровождается накоплением активных противоящурных АТ.
Молодняк, родившийся от иммунных животных, получает пассивно антитела с молозивом. Молодняк, полученный от многократно вакцинированных коров, имеет достаточно напряженный иммунитет в течение 4 мес.В настоящее время вакцинология переживает этап своего бурного развития. Так, для борьбы с ящуром на смену традиционным инактивированным вакцинам, отличающимся высокой профилактической эффективностью при их систематическом и массовом применении, разрабатываются новые препараты. Главная проблема при этом состоит в том, что современная технология изготовления вакцин не обеспечивает иммунного ответа адекватного по напряженности с иммунным ответом при естественной ящурной инфекции. Быстрая защита от ящура супоросных и подсосных свиноматок обеспечивается препаратом из культурального ВЯ, инактивированного димером ЭИ, очищенного и концентрированного ПЭГ. Стерильный антиген вводили животным внутримышечно за ухом. Контрольное заражение проводили свиным афтозным вирусом в дозе 104 ИД5о/0,2 мл под слизистую языка или венчик. В настоящее время в качестве инактивантов используют ацетилэтиленимин (АЭИ) и бинарный этиленимин (БЭИ, диэтиленимин), поскольку они в отличие от формалина позволяют готовить более авирулентные вакцины, а АЭИ менее токсичен, чем БЭИ.
Кроме обычно применяемых методов инактивации ВЯ формальдегидом, предложен оригинальный метод инактивации его собственной эндонуклеазой. Для этого вирусную суспензию смешивают с 0,5М и 0,1М трис-буферным р-ром, рН смеси доводят до 8,5, после чего ее фильтруют через мембранный фильтр (0,45 мкм) и инкубируют при температуре 26 или 37°С. Через 4-5 ч инкубации при 37°С инфекционная активность вируса полностью подавляется. Для такой инактивации вируса при меньшей температуре необходимо более длительное время инкубации. РНК вируса в этих условиях полностью разрушается. В отличие от формолвакцины в инактивированной эндонуклеазой вакцине полностью сохраняются эпитопы протективного АГ вируса. Установлено, что иммуногенность инактивированной вакцины в значительной степени зависит от наличия и вида адъюванта. Включение ГОА в состав вакцины увеличивает ее активность в десятки раз. Для крупного и мелкого рогатого скота в качестве адъюванта применяют ГОА с сапонином.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
