94252 (681937), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Для того чтобы иммуноанализ на основе нераспространяющейся волны нашел применение в клинической практике, он должен удовлетворять ряду требований; эти требования детально обсуждены в работах. В целом эти требования связаны с необходимой в настоящее время или в будущем чувствительностью методик анализа, типом применяемых анализов, необходимой быстротой получения результатов анализа, а также доступностью оборудования и реагентов.
В принципе чувствительность и специфичность иммуноанализа очень высоки. Дальнейшее развитие метода EVIA будет связано с решением, во-первых, общих проблем иммуноанализа, характерных для любого метода, и, во-вторых, специфических только для EVIA задач. Например, в обычном твердофазном иммуноанализе необходимая кинетика реакций достигается за счет оптимизации реагентов и методов введения в них метки, подбора наилучших условий проведения анализа, нахождения адекватных качества и количества иммобилизованных реагентов, подбора других характеристик аналитической системы. Кроме того, применение в качестве меток флуорофоров требует изучения таких факторов, как квантовый выход, стабильность к действию света, стоксов сдвиг, рассеяние света и тушение флуоресценции пробой. Точно так же при конструировании флуориметра необходимо выбрать оптимальные фильтры и детекторы, оптимизировать аккумуляцию света и уменьшить фоновый сигнал. В методе EVIA важны и другие факторы, связанные с характеристиками и функцией волновода. К числу таких факторов относятся эффективность освещения всей сенсорной поверхности волновода и эффективность аккумуляции флуоресценции, генерируемой на границе раздела.
В качестве примеров различных подходов к решению указанных и ряда других задач в табл. 3 приведены характеристики трех из множества выполняемых в настоящее время проектов. Три исследовательские группы представили принципиальные схемы волноводов и связанных с ними проточных кювет; во всех проектах измеряется флуоресценция, генерируемая нераспространяющейся волной.
В первом проекте плоский волновод является частью прямоугольной кюветы. Реагент иммобилизуется на внутренней поверхности волновода, а пробу вводят через щель в крышке кюветы, которая определяет ее объем. Свет возбуждения направляют на это устройство через клинообразную призму, установленную на конце волновода. Флуоресценцию измеряют со стороны входа света в волновод. Эта система имеет ряд достоинств, из которых не последнее место занимает относительная простота ее изготовления.
Во втором проекте используется кварцевый волоконный волновод; его можно поместить в капилляр, позволяющий быстро ввести определенный объем пробы. Реагенты иммобилизуют на поверхности волокна, а флуоресценцию измеряют со стороны входа света. Эта система характеризуется высокой чувствительностью, обусловленной многократным внутренним отражением. Применение более тонкого и более длинного волновода повышает чувствительность пропорционально числу отражений понятие о волоконнооптических сенсорах на основе эффекта полного внутреннего отражения существенно расширено; здесь упоминаются пять принципиально различных типов сенсорных устройств. В четырех из них используется явление нераспространяющейся волны. Указанные типы сенсорных устройств схематично изображены на рис. 11; там же объяснены принципы их действия. Можно достаточно обоснованно предположить, что в ближайшие годы появятся и другие, принципиально иные, типы устройств на основе эффекта полного внутреннего отражения и что такие устройства займут важное место не только в медицине, но и в ряде других областей, где необходимы быстродействующие аналитические системы, например в управлении непрерывными процессами и в лабораториях обеспечения качества.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
