93072 (681139), страница 2

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 2)

Гистохимическими исследованиями выделяли гликоген постановкой ШИК – реакции, липиды Суданом черным В, железо окраской по Перлсу. Кроме того, проводили окраску хроматофильного вещества и ядер нервных клеток по Нисслю. Выполняли гистологическое исследование изготовленных препаратов с подробным протоколированием и фотографированием участков с отклонениями от нормы.

Кроме того, изучали патоморфологические изменения в органах при экспериментальном заражении животных и возможность возникновения изменений в хромосомном аппарате кроликов, под влиянием грибов Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia на хромосомный аппарат подопытных животных путем кариологического анализа клеток красного костного мозга, находящихся в стадии метафазы.

В эксперименте было использовано 45 кроликов породы советская шиншилла в возрасте 5 месяцев, отобранных по методу аналогов, учитывая такие показатели, как порода, пол, возраст, масса тела, условия кормления и содержания.

Было проведено четыре опыта по изучению влияния воздействия грибов Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia на животных.

Контролем служили взрослые кролики того же возраста.

Заражение проходило при введении в ушную вену суспензии конидий гриба, выделенных из пораженных органов спонтанно заболевших и павших животных.

Костный мозг получали из трубчатых костей бедра и голени непосредственно перед убоем.

Приготовление препарата для хромосомного анализа осуществляли по методу С.С. Бирбина (1970).

1. В 10 мл раствора Хенкса (без бикарбоната), подогретого до 38°С, содержащего 0,1 мг колхицина, 300 ЕД гепарина, 0,6 мл буферного двухосновного фосфата натрия, вносили 0,5 – 1,0 мл костного мозга, приготавливали суспензию, инкубировали ее 30 – 60 минут при температуре 38°С. Затем центрифугировали 10 минут при 1000 оборотов в минуту. Надосадочную жидкость осторожно удаляли.

2. К полученному осадку добавляли 10 мл 0,9% раствора лимоннокислого натра подогретого до 38°С, осадок собирали пипеткой и помещали в термостат при температуре 2 градуса по Цельсию. Затем пробирки ставили в центрифугу на 15 минут при 1000 оборотах в минуту. Надосадочную жидкость удаляли.

3. К осадку по стенке осторожно добавляли 1,5 – 3,0 мл свежеприготовленного охлажденного до 4°С фиксатора, состоящего из трех частей метанола и одной части ледяной уксусной кислоты. Осадок, не встряхивая, выдерживали в фиксаторе 10 минут, жидкость осторожно удаляли, а осадок суспензировали новой порцией фиксатора. Пробирки помещали в холодильник на 30 – 60 минут, после чего суспензию центрифугировали 3 минуты при 800 оборотов в минуту. Надосадочную жидкость удаляли, пробирки опрокидывали для лучшего стекания фиксатора. Со стенок пробирок остатки жидкости снимали ватным тампоном.

4. Осадок суспензировали в новой порции фиксатора, центрифугировали 3 минуты при 800 оборотов в минуту и надосадочную жидкость удаляли. Аналогичную манипуляцию повторили дважды.

5. К осадку добавили новую порцию фиксатора, равномерно суспензировали и готовили препараты путем выжигания фиксатора. Для этого на предметное стекло наносили 2 – 3 капли суспензии и после незначительного растекания ее поджигали от пламени спиртовки.

Препараты окрашивали азур - эозином по Нохту.

В рабочий раствор на 100 мл дистиллированной воды добавляли 1 мл буферного раствора двухосновного фосфата натрия (18,814 г фосфата на 100 мл воды). Препараты проводили через ксилол и заключали в канадский бальзам.

Для просмотра метафазных пластинок из делящихся клеток костного мозга использовали малое увеличение микроскопа. Их анализ проводили под иммерсией: учитывали размеры, форму хромосом, расположение центромер, подсчитывали количество хромосом. Всего проанализировано 100 метафазных пластинок от контрольных и подопытных животных.

Для изучения чувствительности цыплят к грибам Candida, выделенным из пораженных органов и фекалий больных кандидозом телят, было поставлено несколько опытов на 114 цыплятах.

Опыт № 1. Заражение культурой Candida albicans, выделенной из пораженного рубца теленка в возрасте 14 дней.

Культуру в виде суспензии выпаивали 2-х дневным цыплятам 1 раз в сутки 5 дней подряд. Часть цыплят убивали через каждые 2 дня.

Опыт № 2. Заражение несколькими штаммами грибов Candida, из которых были: C. albicans, C. krusei, C. parakrusei, C. рseudotropicalis, C. tenuis, выделенные из фекалий телят.

Заражали 5 групп цыплят отдельно каждым штаммом, скармливали зараженный корм в отдельных кормушках, но кормили и содержали в одном месте.

Опыт № 3. Заражение сочетанием грибов Candida albicans и Aspergillus fumigatus, выделенных из пораженного рубца (Candida) и легких (Aspergillus fumigatus) павшего теленка.

Заражали 3 группы цыплят. Одной группе выпаивали суспензию Candida albicans, второй - Aspergillus fumigatus и третьей - сочетание этих двух видов грибов.

При подозрении на кандидоз высевы фекалий делали с помощью шпателя, растирая материал по поверхности пластинчатого агара. Но этот метод не оказался приемлемым при высевах фекалий телят с подозрением на поражение плесневыми грибами. Эти виды грибов обычно быстро покрывают поверхность агара, вследствие чего не представляется возможным исключить загрязнение в момент высева, тем более, если колонии бывают единичными. При подозрении, по результатам бактериоскопии, на смешанный микоз, высевы фекалий мы делали также капельным методом, который позволял не только исключать загрязнение, но и более четко идентифицировать вырастающие колонии грибов. Если рост колоний грибов появлялся на агаре между нанесенными каплями материала, то эти колонии расценивались как загрязнение. Если же колонии грибов появлялись на капле нанесённых фекалий, то они принимались во внимание, а данный гриб расценивался как возбудитель заболевания только при условии, что бактериоскопия фекалий покажет мицелиальные формы гриба.

Для изучения влияния сыворотки молозива коров, содержащей и не содержащей противогрибковые антитела, на возникновение и развитие висцерального кандидоза, получали сыворотку, выдаивая молозиво коров в колбу, куда предварительно насыпали 0,5 г порошка химозина или наливали 1% раствор пепсина из расчета 10 мл на 100 мл молозива. Смесь выдерживали в теплом месте или в термостате при 37°С 6-12 часов. Появившуюся сыворотку отделяли фильтрованием через бумажный фильтр и затем исследовали её по РА пластинчатым и пробирочным методами на наличие антител против грибов Candida.

В качестве антигена использовали суспензию смыва 48 часовой культуры гриба Candida на физиологическом растворе с концентрацией 1 млрд. спор гриба в 1 мл.

В опытах использовали молодых морских свинок, подобранных по методу аналогов (возраст -2,5 месяца, вес - 350-400 г).

Противогрибковые свойства сыворотки молозива изучали, выпаивая её одновременно с заражением и через 7 дней после заражения, т.е. к моменту развившегося заболевания.

Заражали морских свинок суспензией гриба Candida albicans 5 дней подряд, один раз в день по 1 мл (1 млрд. клеток), путем выпаивания при помощи глазной пипетки или нанесения шпателем в защечную область агаровой культуры (6-7 колоний гриба). Одновременно задавали антибиотик (биомицин) по 25 мг один раз в день для усиления патогенного действия грибов.

Под опытом находились 36 зараженных морских свинок. Животные были разделены на 3 группы по 12 в каждой, и им выпаивали: 1-й группе - сыворотку молозива, реагирующую по РА с антигеном Candida (1:16).

2-й группе - сыворотку молозива, не реагирующую с этим антигеном.

3-й группе - контрольной, выпаивали физиологический раствор.

Результаты собственных исследований

При анализе результатов проведенных нами исследований было установлено, что висцеральные микозы (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia) нередко встречаются в практической работе ветеринарных специалистов и создают определенные затруднения в вопросах диагностики. За период исследований была установлена структура соотношений отдельных висцеральных микозов (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia), встречавшихся в нашей работе у различных видов и возрастных групп животных. Так на Aspergillus приходилось 45 % случаев, на Candida – 35 %, на Mucor – 15 % и на Nocardia – 5 %. Данные представлены в диаграмме.

За последнее десятилетие отмечено учащение случаев возникновения заболеваний висцеральными микозами среди людей. Особенно это относится к Aspergillus и Candida у иммунокомпрометированной категории населения.

Клинико-морфологические изменения у животных при аспергиллёзе

Аспергиллез, как заболевание, сопровождается различным характером поражений с вовлечением в процесс многих органов и систем (воздухоносные пути, пищеварительный тракт, паренхиматозные органы, головной мозг), сопровождается и абортами. Наиболее часто у человека и птиц все же отмечают поражения легких. Аспергиллез легких у птиц, например, может протекать в острой и хронической форме. При острой форме ткань легкого обычно отечная диффузно-красного цвета с наличием сероватых очажков и участков гепатизации. При хронической - обнаруживают единичные или множественные бело-желтые узелки казеозной консистенции размером от еле заметных до голубиного яйца, регистрируются также некрозы и каверны, напоминающие туберкулезные поражения. Слизистая оболочка трахеи нередко бывает покрыта серовато-зеленоватыми пленками. Отмечается и серозно-фибринозное воспаление бронхов, которые в этих случаях полностью заполнены фибринозными массами, содержащими обилие гиф гриба. Узелковые поражения наблюдаются не только в легочной ткани, но и в паренхиматозных органах и на серозных покровах. На перикарде обнаруживают серо-белый налет. Поражаются также воздухоносные мешки.

Изменения в пищеварительном тракте у птиц появляются в виде катарального воспаления.

У млекопитающих аспергиллез может протекать с поражением легких в виде гранулематозных узелков, очагов уплотнения ткани и поражения пищеварительного тракта. (Рис. 1).

Аспергиллезные узелки в легких по строению подразделяются на два типа. Узелки первого типа - неплотные, размером до лесного ореха, центр их размягчен и заполнен зернистой, влажной легко растирающейся массой зеленоватого или желтоватого цвета, окружающая зона обычно неширокая, в бронхах - слизь. Узелки второго типа - плотные, с сухим некротическим содержимым, после удаления которого остается полость с неровными серыми стенками, зона вокруг узелка широкая уплотненная с постепенным переходом на здоровый участок. У крупного рогатого скота аспергиллезные поражения характеризуются наличием в легких гранулем, очагов некроза и эмфиземы.

Для аспергиллезных узелков типичны 3 зоны: центральная - с некротическим распадом, затем - участок с серозно-фибринозным воспалением и мицелием гриба (Рис. 2) и - широкая зона из грануляционной ткани.

У телят двухнедельного возраста аспергиллез протекал с клинической картиной пневмонии крупозного типа с очагами некроза в легочной ткани и гастроэнтеритом, а в преджелудках выявляли язвы и некрозы.

У телят в 20-40 дней в легких отмечались гранулемы с зоной некроза в центре при наличии дистрофических изменений в печени.

Наиболее часто аспергиллезная инфекция протекала в виде легочных инфильтратов с резким повышением количества эозинофилов в крови. Подтверждался диагноз реакцией преципитации к антигену Aspergillus fumigatus, а так же двойной диффузией в агаровом геле.

Аспергиллез крупного рогатого скота, как заболевание преимущественно откормочных животных, наблюдалось при включении в рацион недоброкачественного жома, пораженного грибом Aspergillus fumigatus. Заболело 535 животных, из них пало - 15, вынужденно убито –188 голов. Заболевание протекало с клинической картиной: отказ от корма, угнетение, сухой болезненный кашель (особенно при движении), температура - 41,6-41,8°, гемоглобин - от 7 до 11 г/%, РОЭ - 0,2-0,25 в час, лейкоциты - 4-11 тыс. Животные погибали на 6-8 сутки.

В начале заболевания отмечали снижение удоев, угнетение, затем повышение температуры до 42°с диареей и прогрессирующим истощением. В момент развития болезни глубокостельные коровы абортировали.

Наибольшее значение для развития плесневого микоза имело не только общее ослабление организма, но и местные тканевые повреждения, способствующие проникновению спор гриба в стенку желудка.

В течение 2-х недель заболевание охватило 70% телят, протекало с клинической картиной: кашель, слизистые истечения из носа (1-2 дня), повышение температуры до 41,5°, дыхание было затрудненным, отмечали покраснение конъюнктивы, слезотечение, диарею.

Наблюдения показали, что заболевшие телята становились вялыми, в фекалиях почти постоянно обнаруживали примесь крови в виде темных сгустков. При поражении пищеварительного тракта температура тела была нормальной. Болезнь характеризовалась как бы двумя этапами, сменявшими один другой. Первый этап болезни возникал после рождения (до 5-7 дневного возраста). После применения лечебных препаратов, из которых обычно преобладали различные виды антибиотиков, состояние телят улучшалось, но через 3-4 дня наступало ухудшение, испражнения становились жидкими, непроизвольными, с примесью крови. Больные телята больше лежали, быстро худели, отмечалась мацерация кожи на задних конечностях. Телята значительно теряли в живой массе тела и погибали, несмотря на лечение теми же средствами, что давали хороший лечебный эффект на первом этапе болезни.

Описанные признаки болезни нельзя было считать специфичными для аспергиллезного гастроэнтерита, аналогичные признаки характеризовали и другие болезни, сопровождавшиеся поражением пищеварительного тракта (колибактериоз, паратиф, диплококковая септицемия и другие). Окончательным подтверждением правильности предполагаемого диагноза на аспергиллезный гастроэнтерит являлись патоморфологические и микологические исследования.

Хотя об аспергиллезе принято говорить как о заболевании, протекающем хронически, однако эта характеристика болезни для телят имела меньшее значение. Аспергиллез у телят раннего возраста с поражением пищеварительного тракта не протекал хронически (т.е. не продолжался месяцами), что отмечается, например, при аспергиллезе у взрослых животных и человека. Глубокие микозы телят, в том числе и аспергиллезный гастроэнтерит, регистрировали в преобладающем большинстве у молодняка до месячного возраста с острым течением.

Характеристики

Список файлов реферата