92678 (680857), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Серологические реакции, применяемые для обнаружения антигена, и приготовление иммуносыворотки. Для обнаружения специфического оспенного антигена может быть использована реакция связывания комплемента в обычной прописи с учетом следующих необходимых особенностей. В качестве антигена используется негемолизнрованная сыворотка, предварительно инактивированная при 1° 56° в течение 30 мин., или материал, взятый из кожных поражений. Корочки предварительно растираются в ступке и разводятся 1 : 10 физиологическим раствором.
Загрязненный материал рекомендуется обрабатывать эфиром с добавлением пенициллина и стрептомицина в течение 45 мин. В качестве иммунной сыворотки используется сыворотка кроликов, предварительно иммунизированных вирусом вакцины. Разные разведения антигена с коэффициентом 2 соединяются с другими ингредиентами реакции и инкубируются при 1° 4° в течение 12—16 час.
С той же целью может быть применена методика выявления оспенного антигена, основанная на принципе диффузии в агар, по Краул. По рекомендации С. С. Маренниковой реакция ставится следующим образом. К расплавленному 1% агару, приготовленному на фосфатно-солевом буфере рН=7,2, добавляют мертиолят в конечной концентрации 1 : 10 000 и наносят слои в 1 мм на предметное стекло. В остывшем агаре прорезают четыре круглых углубления 3 мм в диаметре на расстоянии 5—6 мм. Углубления маркируют соответственно назначению. Одно углубление предназначено для специфической иммунной сыворотки, другое — для контрольной, нормальной, сыворотки, третье — для испытуемого материала и четвертое — для известной культуры вируса вакцины. Предметное стекло с наполненными углублениями помещают во влажную камеру и оставляют на 4—24 часа при 1° 20°.
Реакция считается положительной в случае появления полосы преципитации между углублениями с испытуемым материалом и специфической иммуннойсывороткой при одновременном появлении аналогичной полосы преципитации между той же сывороткой и известным антигеном. При этом полосы преципитации не должно быть между антигенами и нормальной сывороткой. Реакция преципитации в агаре определяется через 4—5 часов после постановки.
Иммунную сыворотку, применяемую для данной реакции и в других сходных целях, приготовляют путем вакцинации кроликов. На несколько участков выбритой чистой поверхности кожи животных наносят путем скарификации или внутрикожных инъекций 1 мл дермовакцины. После заживления кожных поражений животным внутривенно вводят трижды с недельным интервалом дермовакцину, очищенную путем дробного центрифугирования от тканевых балластных компонентов. Через 2 недели после последней иммунизации у кроликов берут кровь, отделяют сыворотку, инактивируют 45 мин. при 1° 56°, разливают в ампулы и хранят в замороженном состоянии.
Выделение вируса. Выделение вируса оспы натуральной удается на всех этапах развития болезни и даже в процессе выздоровления. Материалом для исследования служат кровь и кожные поражения. Выделение вируса из крови дает положительный результат в первые два дня болезни, а в более поздние сроки свидетельствует о тяжелом течении оспы натуральной и указывает на неблагоприятный прогноз.
Выделение вируса производят из сыворотки крови и, учитывая возможность маскирования его антителами, из сгустка, который предварительно растирают в ступке с физиологическим раствором. Если можно дифференцировать форменные элементы, то предпочтение в этом случае отдают лейкоцитам.
Выделение вируса из кожных поражений производят путем разведения жидкости, полученной из оспин, или тщательно растертых в ступке соскобов и корочек (в соотношении 1 : 5) в 1,5 мл физиологического раствора, содержащего от 200 до 1000 ЕД пенициллина и 5 мг стрептомицина. По 0,2 мл вводят на хорио-аллантоисную оболочку не менее пяти развивающихся куриных эмбрионов и в пробирки с культурой ткани. Оставшуюся жидкость наносят на поверхность кровяного агара для выявления возможного наличия бактерий.
Для выделения вируса используют И— 12-дневные развивающиеся куриные эмбрионы, которым испытуемый материал вводят на хорио-аллантоисную оболочку со стороны воздушного мешка. Зараженные куриные эмбрионы инкубируют при 1° 35—36° в течение 72—96 часов при обязательном ежедневном просмотре с отбором погибших зародышей. По истечении срока инкубации, равно как и при отборе погибших зародышей, яйца вскрывают, извлекают хорио-аллантоисную оболочку, осторожно расправляют и погружают в чашку Петри со стерильным физиологическим раствором. Дно чашки помещают на черный фон, позволяющий более отчетливо видеть пятна оспин, образующихся на поверхности оболочек. При положительном результате исследования на оболочке формируются белые, резко отграниченные точечные образования, похожие на узелки или бляшки, без зоны некроза и геморрагии.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
