90544 (679285), страница 2
Текст из файла (страница 2)
1.3 Иммуноанализ с самоудерживанием
Для диагностики на дому и в кабинете врача применяется также так называемый иммуноанализ с самоудерживанием. Как и в иммунофильтрации, в нем использованные жидкости остаются в устройстве для анализа, однако в отличие от последнего в ИАСУ нет необходимости в многочисленных стадиях добавления реагентов и промывки. Принцип ИАСУ, разрабатываемый фирмой Biotope Inc. под торговой маркой BioMAT-EIA™, представлен на рис. 6.5. Основой этого метода являются несмешивающиеся растворы реагентов, расположенные слоями и обеспечивающие последовательное проведение реакций и отделение связанных реагентов от несвязанных in situ. Описана также модификация BioMAT™ с использованием радиоиммуноанализа.
В типичном гетерогенном анализе самый верхний слой содержит связанные с антителами гранулы, предварительно смешанные с ферментным конъюгатом. Гранулы диаметром несколько микрометров позволяют значительно ускорить реакцию антиген – антитело по сравнению с трубками или гранулами больших размеров. Реакцию начинают, вводя пробу в анализатор через самоуплотняющуюся мембрану. После инкубации для обеспечения специфического связывания анализатор недолго центрифугируют, заставляя гранулы пройти через не смешивающийся с водой слой. На этой стадии от гранул отделяется несвязавшийся конъюгат. Далее гранулы попадают в нижний слой, содержащий проявляющий для данной ферментной метки раствор. Появление цвета наблюдается только в нижней части пробирки. Интенсивность окраски можно оценить визуально или с помощью специального колориметра. Стадия центрифугирования занимает не более 1 мин, а все необходимые для анализа реагенты находятся уже в пробирке. В анализатор добавляют только изучаемую пробу. В принципе возможен и внутренний контроль, если в анализатор ввести гранулы, с которыми связано определяемое вещество, причем плотность этих гранул должна отличаться от плотности гранул с антителами. Тогда после центрифугирования на другой высоте появится еще одна окрашенная полоса.
Если центрифугирование по каким-либо причинам нежелательно, то для разделения можно использовать намагниченные гранулы и магнитное поле. Метод BioMAT можно адаптировать и для других, более чувствительных, систем обнаружения, например путем измерения флуоресценции с временным разрешением. В методе BioMAT-FIA™ антитела могут содержать лантанидные метки, которые после связывания с определенными хелатирующими агентами флуоресцируют необычно долгое время. Таким образом, можно подавить влияние собственной флуоресценции пробы. Однако максимальную интенсивность флуоресценции лантанидные комплексы проявляют в неводном окружении, поэтому в обычных методах вводят дополнительную стадию перевода пробы в неводную среду. Эта операция в BioMAT-FIA™ исключается за счет использования экстракционных материалов в гидрофобном слое анализатора.
2. Перспективы и тенденции развития
2.1 Совершенствование методологии
На примере описанных выше подходов и методов можно выделить ряд факторов, существенных для дальнейшего развития аналитических систем для самодиагноза и анализов в кабинете врача. Эти системы должны включать внутренний контроль, давать легко интерпретируемые результаты, не требовать точного пробоотбора и строгого контроля по времени.
Для таких систем внутренний контроль особенно важен, поскольку здесь невозможны контроль качества анализов и специальные проверочные схемы. Внутренний контроль обеспечивает потребителю как надежность результата анализа, так и данные о сохранности реагентов.
В некоторых случаях, например при диагностике беременности или инфекционных заболеваний, достаточно качественного результата. В наборах Test Pack™ фирмы Abbot на hCG и стрептококки группы А знак «плюс» соответствует положительному результату, а знак «минус» – отрицательному результату. Отсутствие какого-либо знака свидетельствует о неправильном проведении анализа.
В настоящее время активно разрабатываются аналитические системы, не требующие точной дозировки реагентов. Приспособление для отбора проб в наборе BioMAT™, позволяющее выполнять количественное определение, по-видимому, является наиболее ярким примером этой тенденции. В других аналитических системах, в которых приемлем качественный или полуколичественный результат, для дозировки реагентов используются флаконы-капельницы и некалиброванные пипетки.
Независимость конечного результата от длительности отдельных операций особенно важна в кабинете врача, поскольку обслуживающий персонал может выполнять несколько функций и для него трудно точно выдерживать время каждой операции. Учитывая этот фактор, фирма Biofope разработала модифицированный вари-' ант анализатора BioMAT™, в котором длительность операций инкубации и промывки находится под термоконтролем. Материал промывочного слоя в этом анализаторе твердый при комнатной температуре, но плавится при нагревании до 37°С и таким образом открывает доступ к плотным гранулам. Такие фазовые изменения позволяют автоматизировать стадии инкубации, промывки и цветной реакции, причем необходимость в переносе каких-либо частей системы или жидкой фазы отпадает, а время операций определения регулируется самой аналитической системой.
2.2 Этические проблемы
Дальнейшее развитие самодиагноза и диагноза в кабинете врача связано с решением многочисленных вопросов этики и безопасности. Лица, не имеющие специальной подготовки, могут безоглядно положиться на результаты используемых ими наборов для самодиагноза in vitro. При этом ложный отрицательный результат приведет к тому, что больной не получит вовремя соответствующей квалифицированной медицинской помощи. Ложный положительный результат может оказать влияние на психическое состояние пациента. Таким образом, наборы для самодиагноза не устраняют принципиальных различий между самотестированием и самодиагностикой.
Увеличивается ответственность и врачей, которые на основании результатов анализа с помощью своих аналитических систем выбирают тот или иной путь лечения больного. Раньше, если больному был нанесен ущерб в результате неправильного анализа, ответственность возлагалась на лабораторию, в которой этот анализ был выполнен.
Развитие рынка аналитических систем для диагноза на дому в ближайшем будущем, по-видимому, будет находиться под все более строгим контролем. В США наборы для диагноза in vitro, предназначенные для применения на дому и в кабинете врача, как, впрочем, и все другие наборы, должны получить разрешение Управления по контролю за качеством пищевых продуктов, медикаментов и косметических средств. Кроме того, в регулировании продажи и применения этих аналитических систем большую роль играют другие профессиональные организации, группы по защите интересов потребителей и, возможно, даже сами фирмы-производители. Недавно на заседании Американской фармацевтической ассоциации была рассмотрена резолюция, призывающая к распространению домашних наборов для самодиагноза in vitro только через аптеки. Резолюция была отклонена в основном из-за некоторых неоднозначностей в терминологии. К наборам для диагноза in vitro можно отнести различные устройства, например термометр, на который действие резолюции не должно распространяться. Тем не менее, по крайней мере одна крупная фирма решила распространять выпускаемые наборы для диагноза in vitro только через так называемые ответственные центры, т.е. магазины, специализирующиеся на продаже предметов медицинского назначения, персонал которых поможет потребителю квалифицированно выбрать и использовать необходимые наборы.
В настоящее время дискутируется вопрос о возможности широкого распространения аналитических систем для диагноза инфекционных заболеваний на дому и в кабинете врача. Высказывалось мнение о цел ее образности наборов для самодиагноза венерических заболеваний, однако авторы этой статьи считают, что диагностирование таких заболеваний должно осуществляться в клинике или специальной лаборатории. Из-за отсутствия прямой связи между результатом тестирования и методом лечения заболевания до сих пор остается неясным будущее аналитических систем для диагноза на дому даже тех инфекционных заболеваний, которые не нуждаются в регистрации, например воспаления мочевого тракта и ангины.
2.3 Правовые аспекты
В Соединенных Штатах будущее аналитических систем для кабинета врача, по-видимому, также частично попадет под контроль федеральных правовых актов, которые будут ограничивать рост цен и виды анализов, проводимых по системе гарантированной оплаты.
Практика скрининга наркотиков уже нашла широкое применение в некоторых секторах общества и быстро распространяется на другие. До недавнего времени анализы на наркотики в основном проводились в армии США, в центрах по лечению от наркомании и специализированных клиниках. Однако в настоящее время около 18% фармакологических компаний разрабатывают программы по скринингу наркотиков, и ожидается, что еще многие другие компании присоединятся к этим исследованиям. Президентская комиссия по борьбе с организованной преступностью рекомендовала всем федеральным агентствам учитывать программы скрининга наркотиков и заключать федеральные контракты только с такими частными фирмами, которые осуществляют подобные программы. Эта рекомендация будет способствовать разработке соответствующих тестов для проведения анализа на рабочем месте. Будущее аналитических систем для обнаружения наркотиков на дому и в кабинете врача будет в основном определяться соответствием разработанных программ скрининга юридическим нормам.
Заключение
Технические новшества и экономические факторы привели к тому, что центр тяжести в проведении анализов сдвигается от больших централизованных лабораторий к анализам на дому или в кабинете врача. Этот сдвиг ускоряется за счет развития новых методов, позволяющих выполнять анализы с помощью более простых операций и включающих системы внутреннего контроля для проверки правильности результатов анализа и работоспособности всех компонентов систем при максимальной простоте последних. В дальнейшем для потребителя наиболее полезными будут методы, позволяющие определить большое количество соединений.
Помимо технических задач децентрализация проведения анализов породила различные этические проблемы, связанные с безопасностью и применением наборов для диагноза in vitro. Такие наборы в будущем будут контролироваться строже, особенно если они предназначены для самостоятельного применения. В частности, предполагается разработать законы, обеспечивающие повышение качества выпускаемых наборов, а также ряд правовых актов, направленных на усиление контроля за стоимостью медицинского обеспечения и охрану гражданских прав.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
