14579 (648469), страница 6
Текст из файла (страница 6)
Для определения общей численности почвенных микроорганизмов осуществили посев микроорганизмов на питательную среду, в качестве которой используется мясо-пептонный агар (МПА).
МПА представляет собой универсальную, плотную среду, которая плавится только при температуре около 100 ˚С и позволяет работать практически в любых температурных условиях. Брали 8,75 гр питательного агара в сухом виде, приготовленный промышленным способом. Добавляли его в колбу с 250 мл дистиллированной воды, полученную смесь доводили до кипения при постоянном помешивании. Кипятили до полного расплавления агара. Фильтровали среду через марлю. Затем, среду автоклавировали при давлении 1 атм в течение 20 минут. Перед розливом в чашки Петри среду охлаждали до 50˚ С.
Поверхностный метод посева.
В стерильную чашку Петри наливали агар слоем высотой 5 мм. При этом горло колбы во время разлива провели через пламя спиртовки, ватную пробку после разлива обожгли. Во время разлива пробку держали между мизинцем и безымянным пальцем правой руки. Стерильной пипеткой берем 1мл раствора из пятого разведения (105). Капали в чашку Петри с агаром и стерильным шпателем растирали по всей поверхности чашки.
Глубинный метод посева.
Стерильной пипеткой брали 1мл раствора из пятого разведения (105). Капали в чашку Петри и заливали агар. Чашку с агаром слегка помешали.
Подсчет колоний осуществили на пятый день после посева. Затем провели морфологическое описание колоний.
Морфологическое описание колоний.
Колонией называют изолированное скопление клеток одного вида, выросшее в большинстве случаев из одной клетки. В зависимости от того, где развивались клетки, различают поверхностные, глубинные и донные колонии. В нашем случае образовались поверхностные колонии. Описание производили учитывая следующие признаки:
форма – круглая, амебовидная, неправильная, ризоидная, круглая с фасеточным краем, круглая с валиком по краю, с ризоидным краем, нитевидная, складчатая, концентрическая, сложная.
размер – измеряют диаметр колонии в миллиметрах.
поверхность – гладкая, шероховатая, бороздчатая, складчатая, морщинистая, с концентрическими кругами или радиально исчерченная.
профиль – выпуклый, плоский, кратерообразный, конусовидный, бугристый.
блеск и прозрачность – блестящая, матовая, тусклая, мучнистая, прозрачная.
цвет – бесцветная или пигментированная – белая, желтая, золотистая, оранжевая, сиреневая, красная, черная.
край – ровный, волнистый, зубчатый, гладкий, лопастной, неправильный, реснитчатый.
структура – однородная, мелко- или крупнозернистая, струйчатая, волокнистая.
Приготовление фиксированных микропрепаратов.
На обезжиренное предметное стекло наносили каплю воды бактериологической петлей, простерилизованной на пламени горелки. Вновь прогревали петлю на пламени горелки и брали пробу колонии из чашки Петри. Растирали пробу в капле воды по кругу. Мазок высушивали на воздухе, затем фиксировали. Мазок фиксировали термически, проводя стекло 2 – 3 раза через пламя горелки мазком вверх. Фиксация мазка приводит к гибели микроорганизмов, плотному прилипанию их к поверхности стекла и более легкой восприимчивости микробов к красителю. Фиксированный мазок окрашивали, заливая его поверхность раствором красителя на 2 минуты. Затем краситель с мазка смывали водой, нижнюю сторону препарата вытирали полоской фильтровальной бумаги, верхнюю осторожно обсушивали с боков, не дотрагиваясь до мазка. Препарат окончательно досушивали на воздухе. Таким образом делали препарат с каждой колонии. Готовый мазок микроскопировали. Описывали морфологию бактерий и по данным определили род бактерии.
Глава 3. Результаты исследования
| Летние пробы: 105 поверхностное NPK 7 колоний Морфологическое описание колонии: Колония 1: Форма – округлая с валиком по краю Размер – 15 мм Поверхность – гладкая Профиль – плоский Блеск и прозрачность – блестящая Цвет – белая Край – гладкий Структура – однородная Колония 2: Форма – неправильная Размер – 7 мм Поверхность – гладкая Профиль – выпуклый Блеск и прозрачность – блестящая Цвет – белый Край – волнистый Структура – однородная Колония 3: Форма – округлая Размер – 5 мм Поверхность – гладкая Профиль – выпуклый Блеск и прозрачность – блестящая Цвет – оранжевый Край – ровный Структура – однородная 105 поверхностное – 2 NPK 4 колонии Морфологическое описание колонии: Колония 1: Форма – складчатая Размер – 25 мм Поверхность – складчатая Профиль – зубчатый Блеск и прозрачность – матовая Цвет – грязно – белый Край – волнистый Структура – зернистая Колония 2: Форма – округлая Размер – 5 мм Поверхность – гладкая Профиль – плоский Блеск и прозрачность – блестящая Цвет – оранжевая Край – ровный Структура - однородная Глубинное – 1 колония Глубинное2 – 5 колоний 105 поверхностное – лес 156 колоний Колония 1: Форма – округлая Размер – 1-2 мм Поверхность – гладкая Профиль – плоский Блеск и прозрачность – блестящая Цвет – белая Край – ровный Структура – однородная Колония 2: Форма – округлая с валиком по краю Размер – 13 мм Поверхность – гладкая Профиль – плоский Блеск и прозрачность – блестящая Цвет – белый Край – гладкий Структура – однородная 10 5 поверхностное 2 – лес 134 колонии Колония 1: Форма – округлая Размер – 1-2 мм Поверхность – гладкая Профиль – плоский Блеск и прозрачность – блестящая Цвет – белая Край – ровный Структура – однородная Глубинное – 5 колоний Глубинное2 – 1 колония Осенние пробы: 105 поверхностное NPK 211 колоний Морфологическое описание колонии: Колония 1: Форма – округлая Размер – 1-2 мм Поверхность – гладкая Профиль – плоский Блеск и прозрачность – блестящая Цвет – белая Край – ровный Структура – однородная Колония 2: Форма – округлая Размер – 9 мм Поверхность – гладкая Профиль – выпуклый Блеск и прозрачность – блестящая Цвет – белый Край – ровный Структура – однородная 105 поверхностное 2 NPK 195 колоний Морфологическое описание колонии: Колония 1: Форма – округлая Размер – 1-2 мм Поверхность – гладкая Профиль – плоский Блеск и прозрачность – блестящая Цвет – белая Край – ровный Структура – однородная Колония 2: Форма – округлая Размер – 7 мм Поверхность – гладкая Профиль – выпуклый Блеск и прозрачность – блестящая Цвет – белый Край – ровный Структура – однородная Глубинное – 325 колоний Глубинное2 – 311колоний 105 поверхностное – лес 2 колонии Морфологическое описание колонии: Колония 1 Форма – округлая Размер – 20 мм Поверхность – шероховатая Профиль – плоский Блеск и прозрачность – матовая Цвет – бесцветный Край – ровный Структура - зернистая Колония 2 Форма – округлая Размер – 11 мм Поверхность – гладкая Профиль – выпуклый Блеск и прозрачность – блестящая Цвет – белый Край – ровный Структура однородная 105 поверхностное2 – лес 3 колонии Морфологическое описание колонии: Колония 1: Форма – округлая Размер – 7 мм Поверхность – гладкая Профиль – выпуклый Блеск и прозрачность – блестящая Цвет – белый Край – ровный Структура однородная Глубинное – 1 колония Глубинное2 – 2 колонии | Палочковидные Палочковидные Скопления гексональной формы в центре кружочек Палочковидные Скопления гексональной формы в центре кружочек Кокки Палочковидные Кокки Кокки Стафилококки Кокки Стафилококки Палочковидные Стафилококки Стафилококки |
Сравнение числа колоний
| Лес | ||
| Метод посева поверхностное | Время сбора почвы | |
| лето | осень | |
| Число колоний | 290 = 145*105(КОЕ) | 5 = 2,5*105 |
| Метод посева глубинный | ||
| Число колоний | 6 = 3*105 | 3 = 1,5*105 |
| NPK | ||
| Метод посева поверхностное | ||
| Число колоний | 11 = 5,5*105 | 306 = 203*105 |
| Метод посева глубинный | ||
| Число колоний | 6 = 3*105 | 636 = 318*105 |
*КОЕ – число колониеобразующих единиц в 1 гр почвы.
Дыхание почвы
X= (a-b)*k/m*t
X – интенсивность дыхания
а– объем щавелевой кислоты, пошедшей на титрование щелочи в колбе без почвы
б – объем щавелевой кислоты, пошедшей на титрование опытных вариантов
м – масса почвы
т – время экспозиции
к – поправка к титру
к = 1
1)NPK
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
