90041 (612781), страница 4
Текст из файла (страница 4)
9. Основные характеристики иммуноферментных тест-систем для количественного определения ферритина
В настоящее время практически все предлагаемые тест-системы основаны на неконкурентном методе определения ферритина. Однако используемые разными производителями антитела, поверхность твердой фазы, способы детекции сигнала и другие параметры разнятся очень значительно (см. п. 9).
Результаты сравнения аналитических характеристик тест-систем производства различных фирм приведены в табл. 3.
Таблица 3. Аналитические характеристики наборов для определения ферритина различных производителей.
| Производитель | Особенности методики | Используемые антитела | Первая и последняя КП, нг/мл; аттестация | Чувст витель ность, нг/мл | Эффект высоких концент раций, нг/мл |
| DPC "Immulite" | Одностадийный "сэндвич", инкубация 30мин, объем сыворотки 10 мкл, регистрация хемилюминесценции. | Иммобилизованные - мышиные моноклональные, конъюгат - козьи поликлональные со щелочной фосфатазой. | 10; 1500 IS 80/578 | 1.5 | 73 000 |
| Roche "Cobas Core" | Одностадийный "сэндвич". В качестве "твердой фазы" используются полистирольные шары. Инкубация 15мин/37°С, объем сыворотки 20 мкл. Субстрат - ТМБ. | Мышиные моноклональные к 2-м эпитопам для иммобилизации и конъюгирования с ПХ. | 75; 1200 IS 80/602 | 2 | 300 000 |
| Delfia | Двухстадийный "сэндвич", обе инкубации по 1 часу при комнатной Т, объем сыворотки 20 мкл. Регистрация флуоресценции (Eu метка). | Мышиные моноклональные. | 2; 1000 IS 80/578 | 0.5 | 120 000 |
| IBL | Одностадийный "сэндвич", инкубация 45 мин при комнатной Т, объем сыворотки 20 мкл. | Иммобилизованные - кроличьи, для конъюгирования с ПХ - моноклональные мышиные. | 15; 1000 IS 80/602 | 5 | 12 000 |
| Randox | Турбидиметрический метод измерения | Антисыворотка на латексных частицах. | 5; 450 | 5 | 2 000 |
| DSL | Двухстадийный "сэндвич", инкубации 30 и 60 мин при комнатной температуре, объем сыворотки 50 мкл. | Поликлональные козьи против селезеночного ферритина человека, метка - I125 | 8; 1000 IS 80/602 | 3.6 | 10 000 |
| Beckman Coulter | Одностадийный "сэндвич", инкубация 20 мин при 36,5°С, объем сыворотки 10 мкл. | Парамагнитные частицы, покрытые козьими АТ против иммуноглобулинов мыши, связывающие мышиные моноклональные АТ к ферритину; конъюгат - козьи АТ со щелочной фосфатазой | 10; 1500 | 0.2 | |
| Roche "Elecsys" | Одностадийный "сэндвич". Общее время проведения анализа - 18 мин. Объем сыворотки 15 мкл. Регистрация электрохемилюминесценции. | Мышиные моноклональные к 2-м эпитопам для иммобилизации и конъюгирования с ПХ | 0,5; 2000 | 0.5 | 200000 |
| Алкор Био | Одностадийный "сэндвич", инкубация 30мин/37°С или 45 мин при комнатной Т, объем сыворотки 20 мкл. | Мышиные моноклональные к 2-м эпитопам для иммобилизации и конъюгирования с ПХ | 10; 1000 IS 80/578 | 5 | 10 000 |
В табл.4 приведена ориентировочная стоимость реагентов, необходимых для выполнения одного анализа наборами реагентов разных производителей. Стоимость рассчитана по ценам производителя или его официального дистрибьютора в России (при условии проведения анализа в соответствии с инструкцией производителя).
Таблица 4. Стоимость определения ферритина наборами различных производителей.
| Производитель | Цена, $ |
| VedaLab | 4.17 |
| IBL | 3.66 |
| OrgenTec | 3.63 |
| Sigma | 3.05 |
| DRG | 2.66 |
| Roche "Elecsys" | 2.16 |
| Roche "Cobas Core" | 2.04 |
| Алкор Био | 1.52 |
| DPC "Immulite" | 1.22 |
Разработанный ЗАО "Алкор Био" набор "ИФА-ферритин" представляет собой гетерогенную иммуноферментную систему для количественного определения ферритина в сыворотке крови человека. Основными компонентами такой системы является твердая фаза, конъюгат антитела с меткой и калибровочные пробы.
Из таблиц и4 видно, что "ИФА-ферритин" по своим характеристикам превосходит многие из зарубежных аналогов. Определение ферритина набором DPC "Immulite" немного дешевле, но необходимый для этого автоматический анализатор примерно в 5 раз дороже, чем оборудование, на котором проводится определение ферритина набором "ИФА-ферритин".
Список литературы
Ragland M, Briat JF, Gagnon J. Evidence for conservation of ferritin sequences among plants and animals and for a transit peptide in soybean. The Journal of biological chemistry. 1990; 265, 30: 18339-18344.
Sigel A, Sigel H. Metal Ions in biological systems: Iron transport and storage in microorganisms, plants and animals. New York, 1998.
Theil EC. Ferritin: Structure, gene regulation, and cellular function in animals, plants, and microorganisms. Ann Rev Biochem. 1987; 56: 289-315.
Bezwoda WR et al. The relationship between marrow iron stores, plasma ferritin concentrations and iron absorption, Scand J Haematol. 1979; 22: 113-20.
Complementary Feeding And The Control Of Iron Deficiency Anemia In The Newly Independent States Presentation By WHO At A WHO/Unicef Consultation Geneva, Switzerland 4 February (http://www.cdc.gov/mmwr/distrnds.html).
1999 Report of the UNICEF/WHO Regional Consultation Prevention and Control of Iron Deficiency Anemia in Women and Children. 3-5 February 1999, Geneva, Switzerland (http://www.who.int/nut/ida.htm).
Grail A, Hancock BW, Harrison P. Serum ferritin in normal individuals and in patients with malignant lymphoma and chronic renal failure measured with seven different commercial immunoassay techniques. J Clin Pathol 1982; 35: 1204-1212.
Milman N, Pedersen L. The serum ferritin concentration is a significant prognostic indicator of survival in primary lung cancer. Oncology reports, 2002; 9: 193-198.
Назаренко ГИ, Кишкун АА. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. М., Медицина, 2000, 544с.
Crichton RR. Ferritin: structure, synthesis and function. New Engl J Med. 1971; 284: 1413-1422.
Halliwell B, Gutteridge JMC. Oxygen toxicity, oxygen radicals, transition metals and disease. Biochem. J. 1984; 219: 1-14.
Theil EC. Ferritin: Structure, gene regulation, and cellular function in animals, plants, and microorganisms. Ann Rev Biochem. 1987; 56: 289-315.
Costanzo F, Colombo M, Staempfli S, Santoro C, Cortese R. Structure of gene and pseudogenes of human apoferritin H. Nucleic Acids Res. 1986; 14: 721-736.
Santoro C, Marone M, Silengo L. Cloning of the gene coding for human L apoferritin. Nucleic Acids Res. 1986; 14: 2863-2876.
Lawson DM, Artymiuk PJ, Yewdall SJ, Arosio P, Harrison PM. Solving the structure of human H ferritin by genetically engineering intermolecular crystal contacts. Nature. 1991; 349: 541-544.
Harrison PM, Arosio P. The ferritins: molecular properties, iron storage function and cellular regulation. Biochimica et Biophysica Acta. 1996; 1275: 161-203.
Munro HN, Linder MC. Ferritin structure, biosynthesis, and function. Physiological Reviews. 1978; 58: 317-396.
Gerl M, Jaenicke R. Self-assembly of apoferritin from horse spleen after reversible chemical modification with 2,3-dimethylmaleic anhydride. Biochemistry. 1988; 27: 4089-4097.
Harrison PM, Treffry A, Lilley TH. Ferritin as an iron-storage protein: mechanisms of iron uptake. J. Inorg. Biochemistry. 1986; 27: 287 - 293.
Arosio P, Adelman TG, Drysdale JW. On ferritin heterogeneity. Further evidence for heteropolymers. J. Biol. Chemistry. 1978; 253: 4451-4458.
Ruggieri G, Iacobello C, Albertini A, Brocchi E, Levi S, Gabri E, Arosio P. in Ferritins and Isoferritins as Biochemical Markers (Albertini A, Arosio P, Drysdale JW, eds). 1984; pp. 67-78, Elsevier, Amsterdam.
Stefanini S, Chiancone E, Arosio P, Antonini E. Structural heterogeneity and subunit composition of horse ferritin. Biochemistry. 1982; 21: 2293-2299.
Powell LW, Alpert E, Isselbacher KJ, and Drysdale JW. Human isoferritins: organ specific iron and apoferritin distribution. Br J Haematol, 1975; 30: 47-55.
Shinjyo S, Abe H, and Masuda M. Carbohydrate composition of horse spleen ferritin. Biochim Biophys Acta, Nov 1975; 411: 165-167.
Wade VJ, Treffry A, Laulhere JP, Bauminger ER, Harrison PM. Structure and composition of ferritin cores from pea seed (Pisum sativum). Biochem. Biophys. Acta. 1993; 1161: 91-96.
Treffry A, Harrison PM, Cleton MI, WC de Bruijn, Mann S. A note on the composition and properties of ferritin iron cores. J. Inorg Biochem. 1987; 31: 1-6.
Treffry A, Bauminger ER, Hechel D, Harrison PM. Defining the roles of the threefold channels in iron uptake, iron oxidation and iron-core formation in ferritin: a study aided by site-directed mutagenesis. Biochem. J. 1993; 296: 721-728.
Bauminger ER, Harrison PM, Hechel D, Nowik I, Yewdall SJ. Iron (II) oxidation and early intermediates of iron-core formation in recombinant human H-chain ferritin. Biochemical J. 1993; 296: 709-719.
Harrison PM, Ford GC, Rice DW, Smith JMA, Treffry A, White JL. in Frontiers in Bioorganic Chemistry (Xavier A, ed.), 1986, pp. 268-277, VCH Publishers, Weinheim, Germany.
Wade VJ, Levi S, Arosio P, Mann S. Influence of site-directed modifications on the formation of iron cores in ferritin. J. Mol. Biol. 1991; 221: 1443-1452.
Levi S, Yewdall SJ, Rovida E, Arosio P. Evidence of H- and L-chains have co-operative roles in the iron-uptake mechanism of human ferritin. Biochem J. 1992; 288: 591-596.
Sun S, Arosio P, Levi S, Chasteen ND. Ferroxidase kinetics of human liver apoferritin, recombinant H-chain apoferritin, and site-directed mutants. Biochemistry. 1993; 32: 9362-9369.
Sirivech S, Frieden E, Osaki S. The release of iron from horse spleen ferritin by reduced flavins. Biochem J. 1974; 143: 311-315.
Takagi H, Shi D, Allewell, NM, Theil EC. Localized unfolding at the junction of three ferritin subunits. J. of Biol. Chem., 1998; 273, 30: 18685-18688.
Andrews SC, Treffery A, Harrison PM. Siderosomal ferritin. The missing link between ferritin and haemosiderin. Biochem J. 1987; 245: 439-446.
Cooper JP, Iancu TC, Ward RJ, Peters TG. Quantitative analysis of immunogold labelling for ferritin in liver from control and iron-overloaded rats. Histocem J. 1988; 20: 499-509.
Dickey LF, Sreedharan S, Theil EC, Didsbury JR, Kaufman RE. Multiple red cell ferritin mRNAs, which code for an abundant protein in the embryonic cell type, analyzed by cDNA sequence and by primer extension of the 5'-untranslated regions. J. Biol. Chem. 2001; 261: 949-955.
Leibold EA, Munro HN. Cytoplasmic protein binds in vitro to a highly conserved sequence in the 5' untranslated region of ferritin heavy- and light-subunit mRNAs. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1988; 85: 2171-2175.
Kaptain S, Downey WE, Tang C, Klausner RD. A regulated RNA binding protein also possesses aconitase activity. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991; 88: 10109-10113.
Melefors TM, Goossen B, Johanson HE, Hentze MW. Translational control of 5-aminolevulinate synthase mRNA by iron- responsive elements in erythroid cells. J. Biol. Chem. 1993; 268, 5974-5978.
Hirayama M, Kohgo Y, Kondo H, Niitsu Y. Regulation of iron metabolism in HepG2 cells: a possible role for cytokines in the hepatic deposition of iron. Hepatology. 1993; 18: 874-880.
Reissman KR, Dietrich MR. On the presence of ferritin in the peripheral blood of patients with hepatocellular disease. J. of clinical investigation. 1956; 35: 588-595.
Addison GM, Beamish MR, Hales CN, Llewellyn P. An immunoradiometric assay for ferritin in the serum of normal subjects and patients with iron deficiency and iron overload. J. of Clin. Pathol. 1972; 25: 326-329.
White K, Munro HN. Induction of ferritin subunit synthesis by iron is regulated at both the transcriptional and translational levels. J. Biol.Chem. 1988; 263: 8938-8942.
Cragg SJ, Covell AM, Burch A, Worwood M. Turnover of 131I-human spleen ferritin in plasma. British J. of Haematology. 1983; 55: 83-92.
Yamashita N, Oba K, Nakano H, and Metori S. Age-related changes in concentrations of ferritin, glycosylated ferritin, and non-glycosylated ferritin. Nippon Ronen Igakkai Zasshi. 1996; 33: 754-760.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
