11088 (600488), страница 2

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 2)

Изоферменты КФК находятся в тесном функциональном сопряжении с другими ферментами, обеспечивающими перенос веществ и ионов через мембраны. Так, в митохондриях КФК функционирует в тесном сопряжении с АТФ-АДФ-транслоказой, в миофибриллах, мембране СПР и сарколемме – соответственно с Mg-зависимой, Са-зависимой и Na, К-зависимой АТФ-азой.

Важность изучения роли мембранных образований в процессах транспорта и утилизации энергии клетками миокарда приобретает особое значение в условиях его ишемии, при которой наблюдаются существенные изменения в структуре и свойствах белково-липидного слоя мембран и прежде всего в их фосфолипидном составе. Последнее обстоятельство особенно важно в связи с имеющимися в литературе сведениями о том, что некоторые изоферменты КФК, скорее всего, связываются с мембраной с помощью именно фосфолипидов.

В лаборатории биохимии Украинского НИИ кардиологии им. Н. Д. Стражеско (Киев) и в лаборатории мембраноактивных соединений -дикетонов Института органического синтеза АН Латвийской ССР (Рига) изучали активность митохондриального изофермента КФК при дозированном ограничении коронарного кровотока , а также вопрос об энергообеспечении транспорта Са ²⁺ через мембраны СПР клеток миокарда и связи этого процесса с некоторыми другими показателями, определяющими функциональное состояние мембранного аппарата СПР.

Опыты проводили на кроликах в условиях острого ограничения коронарного кровотока (внутривенное введение вазопрессина в дозе 0,5 ед/кг), а также на фоне предварительного введения (за 1 ч до вазопрессина) животным антиоксидантного препарата AV-156Na. В мембранах СПР определяли активность КФК, некоторые показатели перекисного окисления липидов, а также содержание фосфолипидов.

Результаты проведенного исследования (таблица №2) свидетельствуют о выраженном влиянии экспериментальной ишемии на все изучаемые звенья метаболизма миокарда. Так, активность изофермента КФК, связанного с мембраной СПР, снижается при вазопрессиновой коронарной недостаточности более чем на 25%.

Таблица №2. Активность КФК, содержание фосфолипидов в мебранах СПР миокарда кроликов при экспериментальной ишемии

Сдвиги, обнаруженные со стороны активности КФК, тесно сопряжены со структурными изменениями в мембранах СПР, прежде всего их липидного состава. Так, в условиях коронарной недостаточности наблюдается некоторое снижение содержания мембраносвязанного холестерина, а также резкое падение уровня фосфолипидов (на 40%),

При введении антиоксидантного препарата AV-156Na наблюдалось однонаправленное изменение изучаемых показателей в сторону их нормализации. Этот эффект свидетельствует о том, что уровень протекания перекисных реакций в миокарде во многом определяет характер изменения отдельных метаболических процессов в мембранах.

Обнаруженное снижении активности КФК мембран СПР в условиях экспериментальной ишемии может свидетельствовать об определенном нарушении нормального снабжения энергией транспортной Са-АТФ-азы мембран СПР. При этом изменение активности КФК происходит на фоне значительного снижения в мембранах СПР сердца кроликов уровня фосфолипидов. Возможно, изофермент КФК. Связанный с мембраной СПР, является липидзависимым ферментом и для проявления полной его активности сохранение нормальной липидной структуры мембран – важное и необходимое условие. (Фролькис Р. А., Воронков Г. С. , Дубур Г. Я., Циомик В. А., Гомон И. В. – Некоторые аспекты изучения активности креатинфосфокиназы в мембранах саркоплазматического ретикулума миокарда в условиях экспериментальной коронарной недостаточности //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, М., 1983, №5, с. 53, 54).

Влияние алкогольной интоксикации и процессов старения на активность креатинфосфокиназы и ее изоферментов

В отделе фармакологии Института экспериментальной медицины АМН СССР (Ленинград) проводили опыты по выявлению возрастных изменений активности КФК в сыворотке крови интактных животных в возрасте 4 и 24 месяцев, а также изучали влияние острой алкогольной интоксикации на активность КФК и ее изоферментов в тканях и биологических жидкостях крыс 2 групп: 1) животные в возрасте 4 месяцев, которым за 3 часа до начала эксперимента внутрибрюшинно вводили 25% раствор этанола в дозе 3 и 5 г/кг; 2) контроль – крысы, которым вводили соответствующие объемы физиологического раствора. Перед декапитацией у этих животных под легким эфирным наркозом брали ликвор. В экстракте головного мозга, полученном из коры больших полушарий, ликворе и сыворотке крови определяли активность КФК и ее изоферментный профиль. Общую активность фермента определяли колориметрическим методом. Изоферменты разделяли с помощью хроматографии на колонке на сефадексе ДЕАЕ А50. Количество белка определяли микробиуретовым методом. Статическую обработку проводили по Стьюденту.

Анализируя данные об общей активности КФК в сыворотке крови крыс с острой алкогольной интоксикацией, а также у интактных крыс разного возраста, можно сделать вывод о том, что интактные животные в возрасте 4-5 месяцев по активности КФК и ее изоферментному спектру резко отличаются от интактных крыс в возрасте 24 месяцев (таблица №3).

Таблица №3.Общая активность КФК в сыворотке крови крыс различного возраста и крыс с острой алкогольной интоксикацией

Наблюдаемый факт возрастного снижения общей активности КФК в крови, возможно, является следствием изменения уровня общего метаболизма, замедления процессов обновления тканей, уменьшения двигательной активности и т. д.

При введении этанола в дозе 3 г/кг, общая активность в крови резко увеличивается за счет возрастания активности всех трех форм фермента. Наряду с этим наблюдается резкое изменение процентного содержания изоферментов (рис. 1).

Изоферментный спектр КФК в сыворотке крови крыс разного возраста и крыс с острой алкогольной интоксикацией

Рис. 1. По оси абсцисс – изоферментные профили различных групп крыс. А – интактные крысы в возрасте 4 мес., Б – интактные крысы в возрасте 24 мес., В – интактные крысы в возрасте 4 мес. + острая алкогольная интоксикация. 1 – ММ-изофермент КФК, 2 – МВ-изофермент КФК, 3 – ВВ-изофермент КФК. По оси ординат – содержание изоферментов КФК в крови (в %).

Эти данные свидетельствуют о том, что этанол вызывает структурные повреждения мембран клеток на уровне всего организма, мозг и миокард страдают при этом более всего, так как абсолютный прирост активности для МВ- и ВВ-изоферментов наибольший. (в 4 и 10 раз соответственно), в то время как активность ММ-КФК увеличивается всего в 1,4 раза. Можно предположить, что источником сывороточной активности ВВ-КФК является ткань мозга. Для проверки этого предположения была изучена динамика активности КФК в системе мозг – ликвор – кровь (таблица №4).

Таблица №4. Активность КФК в головном мозге, ликворе и сыворотке крови крыс при острой алкогольной интоксикации (n=12)

Активность КФК при введении этанола крысам, снижается в мозге, а в ликворе и крови увеличивается, причем данные измерения носят дозозависимый характер. Это позволяет говорить о том, что под действием острой алкогольной интоксикации нарушается проницаемость гематоэнцефалического барьера и клеток коры головного мозга, в результате чего становится возможной утечка глобулярного белка КФК из цитоплазмы клеток в ликвор, а затем в кровь, что и может приводить к изменению содержания ВВ-изофермента в крови. (Чуваев И. В. – Характеристика изоферментного спектра креатинкиназы в сыворотке крови крыс при старении и острой алкогольной интоксикации //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, М., 1993, №12, с. 390, 391).

Заключение

Креатинфосфокиназа - ключевой фермент биосинтеза макроэргического субстрата - креатинфосфата, играющего наряду с АТФ выдающуюся роль в биоэнергетике сердечной мышцы и всего организма.

Определение активности креатинкиназы служит ценным диагностическим тестом при инфаркте миокарда и других патологиях. На основании последовательных измерений активности креатинкиназы в сыворотке крови можно судить о степени некротического процесса в миокарде и оценить эффективность проводимой терапии.

Но не все аспекты функций креатинфосфокиназы изучены. Важная информация может быть получена при изучении креатинкиназной системы в мозге, КФК цитоплазмы и митохондрий которого представлена иными, чем в мышцах, изоформами, а также в мышечных клетках разных видов животных, стоящих на разных ступенях эволюции; при разных патологических состояниях.

Список литературы

1. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия, М., 1998.

2. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты, Т. 1, М., 1982.

3. Кнооре Д. Г. Биологическая химия, М., 2000.

4. Ленинджер А., Биохимия, М., 1976.

5. Липская Т. Ю. Физиологическая роль креатинкиназной системы: эволюция представлений, М., 2001.

6. Марри Р., Биохимия человека, Т. 2, М., 1993.

7. Фролькис Р. А., Воронков Г. С., Дубур Г. Я., Циомик В. А., Гомон И. В. Некоторые аспекты изучения активности креатинфосфокиназы в мембранах саркоплазматического ретикулума миокарда в условиях экспериментальной коронарной недостаточности //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины №5, М., 1983.

8. Чуваев И. В. Характеристика изоферментного спектра креатинкиназы в сыворотке крови крыс при старении и острой алкогольной интоксикации //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины №4, М., 1991.

Характеристики

Список файлов курсовой работы