Диссертация (1174239), страница 12
Текст из файла (страница 12)
При этом высокий уровеньTNFαможетприводитькувеличениюколичестванейтрофиловвбронхоальвеолярном лаваже [16], что также способно усугубить тяжесть течениязаболевания и в дальнейшем влиять на формирование ГКС-резистентности. У79больных смешанной БА уровень продукции TNFα достоверно превышалпоказатели в группе больных аллергической БА. Пациенты со смешанной БАимеютсенсибилизациюкаллергенам,однакозасчетприсоединенияинфекционного компонента заболевание протекает круглогодично.
Развитиенаиболее тяжелых обострений при контакте пациентов с инфекционнымиагентами может быть связано с увеличенной функциональной активностьюTLR2 и TLR4. Присоединение инфекционного агента в данной группе пациентовможетусиливатьдействиепричинно-значимогоаллергена.Убольныхаллергической БА приступ развивается при контакте пациента с причиннозначимым аллергеном. При этом, например, содержание аллергена в домашнейпыли не влияет на тяжесть заболевания [140]. Но известно, что увеличениесодержания ЛПС в домашней пыли может коррелировать с усилением тяжестиБА [141]. Согласно проведенному нами исследованию у больных среднетяжелойаллергической БА ЛПС-индуцированная продукция TNFα МНК периферическойкрови достоверно выше, чем у больных с легкой степенью тяжести заболевания.Полученные нами данные свидетельствуют, что активация механизмовврожденного иммунитета вносит существенный вклад в развитие и поддержаниевоспаления при бронхиальной астме различных форм.
При этом, гиперактивацияTLR4 вносит существенный вклад в поддержание воспаления у больныхнеаллергической БА, механизмы развития которой до сих пор остаютсяпредметом дискуссии.803.4 Определение спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированнойпродукции цитокинов МНК периферической крови больных бронхиальнойастмой3.4.1 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-18МНК периферической крови больных бронхиальной астмойНа следующем этапе оценивали стимулированную лигандами TLR2 иTLR4 выработку IL-18. Интерлейкин (IL)-18 продуцируется моноцитами,макрофагами,дендритнымиклетками,Т-иB-лимфоцитамиидр.Вырабатывается в ответ на попадание в организм вирусных и бактериальныхпатогенов, и участвует в поляризации иммунного ответа [176, 183]. Известно,что IL-18 необходим для дифференцировки Treg, которые супрессируютразвитие аллергических реакций [107].
С другой стороны, согласно последнимданным литературы, экспрессия IL-18 увеличивается при аллергическихзаболеваниях [12, 19, 32, 87, 183]. Было выявлено, что IL-18 и IL-18R в большомколичестве экспрессируются на эпителиальных клетках легких у пациентов стяжелой астмой [154], а уровень IL-18 напрямую коррелирует с тяжестьютечения бронхиальной астмы [74].На данном этапе исследования, проводилась оценка влияния лигандовTLR2 и TLR4 на продукцию IL-18 МНК периферической крови здоровыхдоноров и больных контролируемой бронхиальной астмой.
Спонтаннаяпродукция IL-18 была статистически достоверно выше у больных аллергическойБА (212 (187-287) пг/мл), смешанной БА (234,5 (178,5-279,5) и неаллергическойБА (264,5 (252-277) пг/мл) по сравнению со здоровыми донорами (113,5 (90-132)пг/мл, рис. 25).81Рисунок 25. Спонтанная продукция IL-18 мононуклеарными клеткамиздоровых доноров и больных бронхиальной астмой различных форм.Уровень спонтанной продукции IL-18 МНК периферической крови независел от формы бронхиальной астмы.Известно,плейотропнымичтоIL-18эффектами,–провоспалительныйкоторыйспособенцитокин,участвоватьобладающийвразвитиииммунного ответа. IL-18 может поляризовать иммунный ответ как в сторонуTh2 [77], так и в сторону Th1 [119]. Результат активации иммунной системы подвлиянием IL-18 будет зависеть от многих факторов, в том числе от цитокиновогомикроокружения.
В патогенезе аллергических заболеваний IL-18 играетдвойственную роль. В исследовании Yang и соавт. [234] было показано, чтоуровень данного цитокина повышался в сыворотках больных аллергическойбронхиальной астмой, что коррелировало с тяжестью заболевания. Однако такжесуществуют исследования, в которых показан низкий уровень концентрации IL18 в сыворотке [86] и мокроте [176] у пациентов с тяжелой астмой.У трансгенных мышей с гиперэкспрессией IL-18, показано увеличениепродукции IFNγ, IL-4, IL-5 и IL-13 [85]. На экспериментальной мышиной моделибыло показано, что стимулированные IL-18 Th1 клетки памяти приобретают82способность индуцировать гиперреактивность дыхательных путей[199].Согласно работе Campbell и соавт. [30] систематическая нейтрализация IL-18приводит к накоплению эозинофилов. Эти исследования и другие показывают,что в зависимости от условий, IL-18 может определять как Th1 тип ответа, так иTh2 тип иммунного ответа.
Решающее значение играют клетки-продуценты имикроокружение.В дальнейшем нами было установлено, что лиганды TLR2 и TLR4 (ПГ иЛПС, соответственно), не влияют на продукцию данного цитокина МНКпериферической крови ни у здоровых доноров, ни у больных контролируемойбронхиальной астмой легкого и среднетяжелого течения (рис. 26).Рисунок 26. Спонтанная и ПГ-индуцированная продукция IL-18мононуклеарными клетками здоровых доноров и больных бронхиальной астмойразличных форм.Известно также, что IL-18 преимущественно продуцируется в ответ наактивацию PRR, среди которых не только TLR, но RIG-1, NOD1, NOD2.83Передача сигнала через NOD1 и NOD2 идет двумя путями: через NFκB и путемобразования инфламмасомы и активации каспазы-1. На экспериментальноймышиной модели астмы было показано, что сенсибилизация овальбуминомприводит к воспалению через активацию NLRP3 [120].
Возможно, что активациятранскрипции генов IL-18 в большей степени связана с активацией NODR, чемTLR, что может объяснить отсутствие ЛПС- и ПГ-индуцированной продукцииданного цитокина МНК.3.4.2 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-33МНК периферической крови больных бронхиальной астмойIL-33 – цитокин, обладающий плейотропными эффектами, которыйспособен участвовать в развитии иммунного ответа, воспалительной реакции иможет быть вовлечен в иммунопатогенез многих заболеваний. Рецептор к IL-33содержитцитоплазматический TIR (Toll/IL-1R) домена, необходимый дляпередачи сигнала внутрь клетки [175].
Впервые IL-33 был обнаружен в эпителиибронхов и дыхательных путей, фибробластах и гладкомышечных клетках, чтоуказывало на роль этого цитокина в регуляции защиты слизистых оболочек [27].В исследованиях последних лет показано, что IL-33 играет важную роль вразвитии аллергических заболеваний.Согласнолитературнымданным,сывороточныйуровеньIL-33увеличивается у больных с аллергической бронхиальной астмой по сравнениюсо здоровыми донорами [97]. Также на экспериментальных моделях показано,что IL-33 играет важную роль при развитии аллергического воспаления вслизистой оболочке полости носа [27].На экспериментальной мышиной модели показано, что IL-33 усиливаетответ макрофагов на стимуляцию ЛПС, увеличивая экспрессию MD2, TLR4,растворимой формы CD14 и MyD88 [131].
IL-33 активирует иммунный ответTh2-типа, действуя либо непосредственно на Т-лимфоциты, либо опосредованночерез ILC2 клетки, которые в свою очередь синтезируют IL-5, IL-9, IL-13 [198,84219]. У больных аллергическими заболеваниями IL-33 может играть связующуюроль между врожденным и адаптивным иммунитетом [138].В данной работе впервые была проведена оценка индуцированнойлигандами TLR2 и TLR4 продукции IL-33 МНК периферической крови больныхаллергической, смешанной и неаллергической бронхиальной астмы (табл.
7).Таблица 7. Сравнительная характеристика продукции IL-33 МНКздоровых доноров и больных бронхиальной астмой разных форм.КонцентрацияСпонтаннаялиганда, мкг/млпродукцияЛПС 0,1ПГ 2,5Концентрация IL-33, пг/млГруппы обследуемыхЗдоровые доноры10(9,2-10,8)Больные аллергической БА10,5(9,7-10,8)Больные смешанной БАБольные неаллергической БА11,3(10,3-11,9)9,9(9,2-10,4)8,6(8-10,1)9(8,8-9,3)8,8(8,6-9,2)8,8(7,8-9)10,2(9,4-12,5)9,9(9,4-10,8)9,6(9-9,9)9(8,6-9,4)У здоровых доноров спонтанная продукция IL-33 МНК периферическойкрови составила 10 (9,2-10,8) пг/мл. Как видно из таблицы 7, спонтаннаяпродукция IL-33 у здоровых доноров сопоставима с показателями у больныхаллергической БА (10,5 (9,7-10,8) пг/мл), смешанной БА (8,6 (8-10,1) пг/мл) инеаллергической БА (8,8 (8,6-9,2) пг/мл).
В дальнейшем МНК периферическойкрови здоровых доноров и больных БА культивировали в присутствии ЛПС вконцентрации 0,1 мкг/мл и ПГ в концентрации 2,5 мкг/мл. Таким образом,85изучаласьTLR2-иTLR4-индуцированнойпродукцияIL-33МНКпериферической крови.ЛПС-индуцированная выработка IL-33 достоверно не отличалась отконтроля и составила: 11,3 (10,3-11,9) пг/мл у здоровых доноров, 9,9 (9,2-10,4)пг/мл у больных аллергической БА, 9 (8,8-9,3) пг/мл у больных смешанной БА и8,8 (7,8-9) пг/мл у больных неаллергической БА. ПГ-индуцированная продукцияIL-33 у здоровых доноров составила 10,2 (9,4-12,5) пг/мл, что статистическидостоверно не отличалось от концентрации цитокина в группе больныхаллергической БА (9,9 (9,4-10,8) пг/мл), смешанной БА (9,6 (9-9,9) пг/мл) инеаллергической БА (9 (8,6-9,4) пг/мл).Таким образом, выявили, что у больных контролируемой бронхиальнойастмой легкого и среднетяжелого течения не изменяется спонтанная или ЛПС-,ПГ-индуцированная продукция IL-33 МНК периферической крови по сравнениюсо здоровыми донорами.Известно, что IL-33 важен также при развитии аллергического воспаленияв коже, слизистой оболочке полости носа [71, 76, 181].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
