Диссертация (1174239)
Текст из файла
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕУЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «РОССИЙСКИЙНАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙУНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ Н.И.ПИРОГОВА» МИНИСТЕРСТВАЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИНа правах рукописиОгурцова Анастасия ДмитриевнаАнализ экспрессии и функциональной активности Toll-подобных рецепторов убольных бронхиальной астмой14.03.09 – клиническая иммунология, аллергологияДИССЕРТАЦИЯна соискание ученой степеникандидата медицинских наукНаучные руководители:доктор медицинских наук,доцент М.В.Хоревадоктор медицинских наук,профессор Т.В. ЛатышеваМосква – 20182СодержаниеВВЕДЕНИЕ ...................................................................................................................... 5ГЛАВА 1.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .............................................................................. 131.1 Характеристика Toll-подобных рецепторов ........................................................ 131.1.1 Характеристика и функции Toll-подобного рецептора 2 ................................ 171.1.2 Характеристика и функции Toll-подобного рецептора 4 ................................ 191.1.3 Сигнальные пути TLR2 и TLR4.......................................................................... 201.2 Роль Toll-подобных рецепторов в патогенезе аллергических заболеваний .....
211.2.1 Роль Toll-подобных рецепторов в патогенезе бронхиальной астмы .............. 241.3 Роль цитокинов в патогенезе бронхиальной астмы ............................................ 311.3.1 Роль цитокинов адаптивного иммунитета в патогенезе бронхиальной астмы......................................................................................................................................... 311.3.2 Роль цитокинов врожденного иммунитета в патогенезе бронхиальной астмы.........................................................................................................................................
341.4 Современные представления о роли механизмов врожденного иммунитета впатогенезе бронхиальной астмы .................................................................................. 38ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ .................................... 472.1. Объекты исследования .......................................................................................... 472.2 Разработка дизайна исследования .........................................................................
502.3. Реактивы .................................................................................................................. 532.4. Анализ экспрессии TLR2 и TLR4 на поверхности моноцитов методомпроточной цитофлюориметрии.................................................................................... 542.5. Выделение мононуклеарных клеток из периферической крови человека ....... 552.6. Культивирование МНК периферической крови человека .................................
5632.7. Определение концентрации цитокинов в культуральных супернатантахметодом иммуноферментного анализа ....................................................................... 562.8. Оценка экспрессии генов TLR2, TLR4 в мононуклеарных клеткахпериферической крови человека ................................................................................. 582.8.1 Выделение РНК из мононуклеарных клеток периферической крови человека.........................................................................................................................................
582.8.2 Проведение реакции обратной транскрипции .................................................. 592.8.3 Постановка полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме реальноговремени ........................................................................................................................... 602.9. Статистическая обработка результатов ............................................................... 62ГЛАВА 3.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ ............................................................ 633.1 Анализ экспрессии генов TLR2, TLR4 в мононуклеарных клеткахпериферической крови больных бронхиальной астмой............................................
633.2 Определение экспрессии TLR2, TLR4 на поверхности моноцитовпериферической крови больных бронхиальной астмой............................................ 673.3 Анализ функциональной активности TLR2 и TLR4 по индуцированнойлигандами продукции TNFα МНК периферической крови больных бронхиальнойастмой .............................................................................................................................
733.4.1 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-18 МНКпериферической крови больных бронхиальной астмой............................................ 803.4.2 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-33 МНКпериферической крови больных бронхиальной астмой ...........................................
833.4.3 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-10 МНКпериферической крови больных бронхиальной астмой............................................ 863.4.4 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-4 МНКпериферической крови больных бронхиальной астмой ...........................................
9043.4.5 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-13 МНКпериферической крови больных бронхиальной астмой............................................ 913.5 Исследование влияния Der p и комбинации Der p с ЛПС на продукцию TNFα,IL-4, IL-13 у больных аллергической бронхиальной астмой. .................................. 94Заключение .................................................................................................................. 101Выводы .........................................................................................................................
112Практические рекомендации……………………………………………………………...….113Список сокращений .................................................................................................... 114Список литературы ..................................................................................................... 1155ВВЕДЕНИЕАктуальностьВ настоящее время одной из актуальных проблем фундаментальной иклинической иммунологии является изучение механизмовврожденногоиммунитета. Ключевой функцией врожденного иммунитета считают способностьк распознаванию патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (PAMP)паттерн-распознающими рецепторами (PRR). К ним, в частности, относят Tollподобные рецепторы (TLR), которые играют решающую роль в ранней защитеорганизма от патогенов.
TLR представлены на поверхности и в эндосомахразличных гемопоэтических и негемопоэтических клеток человека, таких какмоноциты/макрофаги, эпителиальные клетки и пр. [215]. При распознаваниилигандов TLR происходит запуск каскада сигнальных молекул, в результатекоторого экспрессируютсягены про- и противовоспалительных цитокинов,хемокинов, костимуляторных молекул.В связи с тем, что TLR экспрессируются на многих клетках организма ираспознают широкий спектр лигандов, они вовлечены в патогенез многихзаболеваний.ПолиморфизмгеновTLR,нарушенияэкспрессииданныхрецепторов на клетке, распознавания лигандов или трансдукции сигнала могутспособствоватьразвитиюинфарктамиокарда,острогодеструктивногопанкреатита, различных аллергических заболеваний, в том числе бронхиальнойастмы, и др. заболеваний [23, 33, 135]. Астма является хроническим, широкораспространенным заболеванием, характеризуется обструкцией дыхательныхпутей и воспалением.
В настоящее время заболеваемость бронхиальной астмойсоставляет более 334 миллионов человек по всему миру[230]. Благодарямногочисленным исследованиям в этой области появляются новые данные опатогенезе бронхиальной астмы, характере течения заболевания, новые подходы кклассификации и терапии. Современные стандарты лечения и профилактикибронхиальной астмы, включающие применение глюкокортикостероидов ибронходилататоровкороткогоипролонгированногодействия,позволяют6успешно контролировать течение заболевания [230], но несмотря на это причиныи механизм развития заболевания полностью не установлены, и продолжаетсяпоиск новых мишеней для эффективного лечения больных.
Одним изперспективных направлений современной клинической иммунологии являетсяприменение агонистов и антагонистов TLR в терапии аллергических заболеваний.Известны экспериментальные работы на животных моделях, показывающиеэффективность использования антагониста TLR4 для уменьшения воспаления вдыхательныхпутях[126].АгонистыTLR2рассматриваютвкачестветерапевтических агентов, однако они могут не только ингибировать каскадвнутриклеточных реакций, но и поддерживать развитие воспалительногопроцесса [61].
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
