Диссертация (1174236), страница 6
Текст из файла (страница 6)
В русской популяцииУльяновской области данное заболевание было ассоциировано с аллелями DQB1*0201, DQA1*0101 (Брыляева Е.В., 2012).31РЕЗЮМЕРазличный характер HLA-ассоциаций при ХОБЛ, выявленный разнымиавторами,изучаемыхможет быть связан спопуляций.этническими особенностями HLA-профиляРассматриваемаяпроблематребуетпродолженияисследований в этом направлении.
Остается неизученной роль гаплотипов HLAв развитии ХОБЛ, в то время как лишь гаплотипические маркеры заболеваниймогут в полной мере подтвердить HLA-ассоциацию заболеваний. Кроме того, вопубликованных по рассматриваемой проблеме работах не обращается вниманиена природу развития ХОБЛ. Не изучены особенности развития ХОБЛ подвлиянием производственных химических поллютантов, в частности соединенийкремния. Значимость этой проблемы акцентируется в связи с повсеместнымраспространением и расширением в мире кремнийорганического производства.32ГЛАВА 2МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ2.1. Характеристика обследованных группС целью решения поставленных задач было проведено обследование 128работников цеха кремнийорганического производства(ПАО «Химпром»,г.
Новочебоксарск, Россия).Обследуемая когорта была разделена на две группы. Первую группусоставили больные ХОБЛ в стадии ремиссии – 62 человека, у которых симптомыболезни в виде кашля и одышки появились в течение 9-10 лет после началаработы на производстве. Включения в исследование осуществлялось согласноследующим критериям: 1) лица обоего пола в возрасте от 34 до 66 лет; 2)информированное добровольное согласие пациентов; 3) установленный диагнозХОБЛ. Исключались из исследования: 1) пациенты с сопутствующимивнелегочными заболеваниями в стадии суб- и декомпенсации; 2) пациенты спатологией органов дыхания, отличной от ХОБЛ (бронхиальная астма,бронхоэктатическая болезнь, туберкулез и др.); 3) лица с первичнымииммунодефицитными состояниями; 4) пациенты старше 66 и моложе 34 лет; 5)беременные женщины.
Диагностика ХОБЛ осуществлялась в соответствии сдиагностическими критериями GOLD (2006) и клиническими рекомендациями(Чучалин А.Г., 2003). Во вторую группу вошли 66 человек, работающие вкремнийорганическом производстве на протяжении 12-24 лет и не имеющиезаболеваний, связанных с профессиональной деятельностью. Эта группаработников,устойчивых«резистентных»ккразвитиюзаболеванию.ХОБЛ,условноСформированныеназванагруппыгруппойбылирандомизированы по половому, возрастному составу, продолжительности работына химическом производстве, стажу курения. С целью исключения этническихразличийвобследуемыегруппыотбиралисьлишьлицачувашскойнациональности, удовлетворяющие следующим критериям: 1) не состояли между33собой в родственных отношениях; 2) имели несколько предшествующихпоколений, проживавших на определенной территории Чувашии; 3) их предки неимели смешанных браков.Длярешениязадачнастоящегоисследованиявсемработникамкремнийорганического производства проводили клиническое обследование,рентгенологическое исследование органов грудной полости, спирометрию,бронхолитическийтестантихолинергическогосипратропиемдействия)прибромидомобнаружении(бронхолитикомсниженияиндексаОФВ1/ФЖЕЛ, оценку иммунного статуса и HLA-типирование.Объектом исследования служила периферическая кровь.
Кровь забиралиутром натощак из локтевой вены в объеме 8 мл с гепарином (20 Ед/мл) (дляпроведенияиммунофенотипированиямононуклеарныхклеток–МНК,определения фагоцитарной активности нейтрофилов), 5 мл в пробирки с 1 мл0,5 М раствора ЭДТА-Na2 (для HLA-типирования) и одновременно 5 мл в сухуюпробирку с последующим отделением сыворотки (для определения содержаниясывороточных иммуноглобулинов, циркулирующих иммунных комплексов –ЦИК).2.2. Методы исследованияБольным с подозрением на ХОБЛ предлагался специальный опросник(Чучалин А. Г., 2003, 2007), содержащий 5 вопросов:1.Беспокоит ли вас кашель ежедневно несколько раз в день?2.Откашливаете ли вы ежедневно мокроту?3.Быстрее ли у вас возникает одышка, чем у ваших сверстников?4.Вам больше 40 лет?5.Курите ли вы или курили раньше?При положительном ответе на 3и более вопросов проводилосьисследование функции внешнего дыхания.Для постановки диагноза ХОБЛ учитывались жалобы больного (нахронический кашель, хроническую продукцию мокроты, прогрессирующую34одышку), а также данные анамнеза (повторяющиеся эпизоды острого бронхита,действие факторов риска – табачного дыма, промышленных поллютантов,наличие отягощенного семейного анамнеза).Диагноз подтверждался исследованием функции внешнего дыханияУчитывалиследующиепоказатели:ЖЕЛ,ФЖЕЛ,ОФВ1,соотношениеОФВ1/ФЖЕЛ (модифицированный индекс Тиффно).
Результаты исследованияоценивались путем сопоставления их с должными величинами.Дляизученияобратимостиобструкциибольнымпроводилсябронхолитический тест с ипратропием бромидом (4 дозы=80 мкг) с измерениембронходилатационного ответа через 30–45 мин. У обследуемых больныхопределяли степень тяжести бронхиальной обструкции в зависимости отпостбронходилатационной величины ОФВ1 – I (легкую), II (среднюю),III(тяжелую) и IV (крайне тяжелую) в соответствии с рекомендациями GOLD (2006)(таблица 2.2.1)Таблица 2.2.1 – Клиническая характеристика ХОБЛразличной степени тяжести бронхиальной обструкцииСтепень (тяжесть)Клинический признакобструкцииI (легкая)Наличие/отсутствиехроническихпродукцияот должныхпредставления о наличии у них нарушений легочныхII (средняя)больныеобычноне(кашель,ОФВ1 ≥ 80%величинмокроты);симптомовимеютфункцийПоявлениеодышкинафонефизическойнагрузки.50 %≤ ОФВ1< 80% Пациенты обычно обращаются за медпомощью в связи собострением заболевания.
Наличие повторных обостренийвлияетнакачествожизнипациентовитребуетсоответственной тактики лечения. Вне обострений приспирометрииотчетливовентиляционные нарушенияпревалируютобструктивные35Окончание табл. 2.2.1Степень (тяжесть)Клинический признакобструкцииIII (тяжелая)Прогрессирование одышки существенно снижает качество30 %≤ ОФВ1<50% жизни пациентов. Частые обострения могут представлятьугрозудляжизнинедостаточности,из-заразвитияпоэтомуостройХОБЛлегочнойприобретаетинвалидизирующее течениеIV (крайнеХарактеризуетсятяжелая)обструкцией,ОФВ1<30%частокрайневтяжелойбронхиальнойсопровожденииспризнакамигипоксемии (SаO2 < 90%) и/или хронического легочногосердцаПримечание.
Все значения ОФВ1 в классификации относятся к постбронходилатационным.Клинические проявления заболевания оценивали с помощью вопросникаБританского медицинского исследовательского совета (MRC) (таблица 2.2.2).Таблица 2.2.2 – Оценка одышки по шкале MRCСтепеньТяжесть0нет1легкаяОписаниеЯчувствуюодышкутолькоприсильнойфизической нагрузкеЯ задыхаюсь, когда быстро иду по ровнойместности или поднимаюсь по пологому холмуИз-за одышки я хожу по ровной местности2средняямедленнее, чем люди того же возраста, или у меняостанавливается дыхание, когда я иду по ровнойместности в привычном для меня темпе36Окончание табл.
2.2.2СтепеньТяжестьОписаниеЯ задыхаюсь после того, как пройду примерно 1003тяжелаям, или после нескольких минут ходьбы по ровнойместности4оченьтяжелаяУ меня слишком сильная одышка, чтобы выходитьиз дому, или я задыхаюсь, когда одеваюсь илираздеваюсьДля определения иммунологических показателей использовали венознуюгепаринизированную кровь обследуемых лиц, из которой выделяли МНК путемцентрифугирования в течение 20 мин при температуре 10°С в градиентеплотности (с=1,077 г/см3) фиколл-верографина при 2000 об/мин (Bouym A., 1968).Идентификациюсубпопуляцийлимфоцитовпроводилиспомощьюиммунофенотипирования МНК методом прямой иммунофлюоресценции напроточном цитофлюориметре Fc500 с использованием моноклональных антител(МКАТ) CD3, CD4, CD8, CD16, CD19, CD25, CD71, CD95, HLA-DR (BeckmanCoulter) в соответствии с методикой производителя в Централизованной клиникодиагностической лаборатории БУ «Республиканская клиническая больница» МЗЧувашской Республики (зав.
лабораторией – Никифорова Н.В.)На МНК определяли уровни экспрессии дифференцировочных маркеров сиспользованиемдвойнойметкифлуоресцирующимикрасителями–флуоресцеина-5-изотиоционатом (ФИТЦ) и R-фикоэритрином (РЕ). ПомимоидентификацииТ-,В-лимфоцитов,NK-клеток,иммунорегуляторныхсубпопуляций Т-лимфоцитов – Т-хелперов, цитотоксических Т-лимфоцитов,определяли активированные клетки, несущие маркеры позитивной и негативнойактивации.37В таблице 2.1 представлен перечень МКАТ и соответствующие клетки,определенные с их помощью.Таблица 2.1 – МКАТ, использованные дляидентификации субпопуляций лимфоцитов№МКАТСубпопуляции лимфоцитов1.CD3Т-лимфоциты2.CD4Т-хелперы3.CD8Т-лимфоциты цитотоксические4.CD19В-лимфоциты5.CD25Клетки, несущие рецепторы к IL-26.CD71Клетки, несущие рецепторы трансферрина7.HLA-DRКлетки, несущие HLA-DR-антигеныCD95Активированные лимфоциты, несущие рецептор8.апоптоза Fas/ApoI9.CD16Естественные киллеры (NK-клетки)Определение концентрации сывороточных иммуноглобулинов основныхклассов(IgM, IgA, IgG) проводили методом радиальной иммунодиффузиипо Манчини (Manchini G.
еt al., 1965), используя моноспецифичные сывороткии стандарты ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ. Исследуемую сыворотку кровивносили в лунки агарового геля, содержащего моноспецифическую сывороткук соответствующим иммуноглобулинам. При диффузии сыворотки в гельпроисходиловзаимодействиесывороточныхиммуноглобулиновс соответствующими моноспецифическими сыворотками и образовывалоськольцо преципитации, диаметр которого линейно зависел от логарифмаконцентрациииммуноглобулинов.Анализпроводилиприкомнатнойтемпературе, причем при определении IgG, IgA инкубация продолжаласьв течение 24 часов, а при определении IgM – 48 часов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
