Автореферат (1140891), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Образцы периферической крови собирали в 9 мл пробирки сЭДТА. Далее экстрагировали ДНК из нефракционированных лейкоцитов (стандартныйпротокол гемолиза NH4Cl) в объеме 100 мкл буфера для элюирования с использованиемприбора MagNA Pure LC с изоляцией ДНК MANA Pure LC Kit I (Roche Applied Science,Мангейм, Германия).
Негативным признавался тест при значении порогового цикла Ct ниже 44.Долю мутантной фракции выражали в %, рассчитывая по формуле: (количество мутантногоаллеля/общее количество аллелей гена KIT) х 100, где количество мутантного аллеля KITD816V рассчитывается как 10((D816VspecificassayCt-43)/(-3.47)) и общее количество аллелей гена KIT10((TotalalleleassayCt-41)/(-3.32)) [Kristensen 2013].У 12 пациентов было проведено комплексное исследование костного мозга, включающеецитологическое исследование аспирата костного мозга, гистологическое, микроскопическое иИГХ-исследование трепанобиоптата.
Одновременно с аспирацией, с помощью вращения иглы,извлекали столбик костной ткани (твердый костный мозг) длиной 6-10 мм и помещали враствор формалина. Всем больным проводилось ультразвуковое исследование органовбрюшной полости.Статистический анализ данных проводился с использованием критерия Стьюдента (Ткритерия) для нормально распределенных показателей и статистического непараметрическогокритерия - точного метода Фишера, не зависящего от характера распределения показателя;использованы пакеты программ EXCEL 2010 и STATISTICA 7.0.РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙОбщая характеристика больных мастоцитозомВ исследование были включены 30 больных мастоцитозом. Из них 9 мужчин (30%) и 21женщина (70%) в возрасте от 20 до 66 лет, средний возраст 36,5 (30,25; 53,25) лет. Наибольшееколичество пациентов (37%) относилось к возрастной группе 30-39 лет, что указывает навысокую значимость заболевания в социально активной группе населения.
Во всех возрастныхгруппах, кроме 40-49 лет, преобладали женщины. Вероятно, распределение по полу впроведенном исследовании связано с более частым обращением женщин, что, возможно,обусловлено большим беспокойством за свой внешний вид. В современных зарубежныхисследованиях значительных гендерных различий отмечено не было [De la Hoz 2008; Lim2009]. Длительность процесса варьировала от 1 года до 35 лет, средний возраст – 9,5 (6,25; 13)лет. Таким образом, у большинства пациентов (67%) продолжительность заболеваниясоставляла 5-14 лет.11При длительном течении процесса возрастала частота возникновения симптомов,обусловленныхпоражениемкостно-мышечнойсистемы,увеличиваласьплотностьрасположения сыпи, уровень триптазы и эозинфилов в крови, что может указывать напостепенное прогрессирование. Заболевание дебютировало наиболее часто (в 43% случаев) впериод с 21 до 30 лет, что соответствует литературным данным [Hartmann 2016].
Немного реже,у 23% больных, первые проявления мастоцитоза наблюдались позже, в возрасте 41-50 лет.У всех больных отмечались высыпания по типу мономорфного варианта ППКМ. Водном случае, при очень длительном течении заболевания (21 год), наблюдалось развитиеочагов субатрофии в области отдельных классических элементов поражения, что, вероятно,связано с деструкцией эластических волокон вследствие мастоцитоза. У всех пациентоввыявлен положительный или, в редких случаях, слабоположительный симптом Дарье (отек ипокраснение элемента после механического воздействия).При патогистологическом исследовании биоптата кожи (окраска гематоксилином иэозином) в базальном слое отмечалось увеличенное количество клеток с гранулами меланина –кератиноцитов, меланоцитов, при окраске толуидиновым синим – ТК с метахроматичнымигранулами сиреневого цвета.
При ИГХ-исследовании были выявлены ТК, экспрессирующиеСD117.Большинство больных отмечали первые высыпания на коже груди или бедер, реже – вобласти верхней трети спины, живота, кистей, предплечий, лица и ягодиц. В 10% случаевпациенты связывали дебют заболевания с перенесенным стрессом, в остальных случаяхпровоцирующий фактор не был установлен. Постепенно высыпания распространялись по всемукожному покрову, включая лицо.Распространенность сыпи варьировала от 20% до 100% от всей площади кожногопокрова, средний показатель составил 90 (71; 95) %. Связи между распространенностьювысыпаний и продолжительностью заболевания выявлено не было.
Однако по мерепрогрессирования сыпь становится более заметной в связи с увеличением плотностирасположения элементов. Корреляции между распространенностью высыпаний, уровнемтриптазы и подтипом мастоцитоза не выявлено, что указывает на малую диагностическуюзначимость данного критерия.Плотность расположения высыпаний составляла от 1 до 97%; среднее значение 25 (10;47,5) %. Высокая плотность расположения сыпи, а именно более 50%, прямо коррелировала сналичием костных симптомов (p=0,03) и в меньшей степени психосоматических расстройств ижелудочно-кишечных симптомов, при которых статистической значимости выявлено не было.Таким образом, относительный риск развития костных симптомов при высокой плотностирасположения сыпи составил 3,33 (1,04; 10,71).
Плотность распожения элементов сыпи прямо12коррелировала с уровнем триптазы; в группе больных с плотностью <50% средний уровеньсывороточной триптазы составил 37±6 нг/мл, а при плотности ≥50% – 86±20 нг/мл (p=0,004).При длительном течении мастоцитоза наблюдалось увеличение плотности расположенияэлементов сыпи, что говорит о постепенном прогрессировании заболевания.Средний и максимальный диаметр элементов – неспецифичные и высоко вариабельныепоказатели. Однако следует отметить, что максимальный диаметр очагов коррелировал свыявлением гепато- и/или спленомегалии (5,5±1 мм против 15±5 мм; p=0,04).Из30больных12пациентовпрошлиполноеобследование,включающеетрепанобиопсию, в результате чего у двоих диагностирован КМ, а у 10 (83%) – СМ.
Средибольных СМ у 4 – ИСМ, троих – ТСМ и еще троих – АСМ. Остальным 18 пациентам поставлендиагноз МВК. Таким образом, среди больных мастоцитозом преобладала клиническая формаИСМ (33% случаев), что соответствует данным многочисленных исследований [Cohen 2014;Lim 2009; Pardanani 2013; Valent 2013].Выявлена прямая статистически значимая корреляция между возрастом больного иподтипом мастоцитоза (p<0,04). Пациенты старшей возрастной группы страдали болееагрессивными формами мастоцитоза, а именно АСМ и ТСМ (p<0,04). При позднем дебюте илидлительном течении заболевания выявлена тенденция к развитию более агрессивных форммастоцитоза. Дебют патологического процесса при КМ и ИСМ встречался в возрасте 26,5±1,5 и26,5±6,2 лет, а при ТСМ и АСМ в 40±5,3 и 44±8,3 года, соответственно.Распространенность сыпи у больных КМ составила 83,5±6,5%; ИСМ 91±5,7%; ТСМ40,3±13,9%; АСМ 85,7±10,6%. При ИСМ отмечалась бóльшая площадь пораженной кожи посравнению с ТСМ (p<0,01).
Однако при АСМ распространенность высыпаний быласопоставима с данными по больным КМ и ИСМ. Следовательно, о тенденции к меньшейплощади поражения при агрессивных формах мастоцитоза говорить нельзя. Таким образом, входе детального изучения связи клинической картины с подтипом мастоцитоза, корреляциимежду диаметром очагов (средним и максимальным), распространенностью высыпаний, атакже плотностью расположения элементов сыпи и подтипом заболевания выявлено не было.Большинство больных (77%) предъявляли жалобы на зуд в покое и/или послевоздействия провоцирующих факторов, включающих трение, перепад температур, контакт сгорячей водой, прием алкоголя, физическую нагрузку, воздействие стресса.
Все больные КМотмечали отсутствие зуда, в отличие от пациентов с СМ. Достоверно более высокаяинтенсивность зуда выявлена у больных АСМ по сравнению с ИСМ (3,3 против 1,25; p<0,005).Системные симптомы, опосредованные медиаторами воспаления ТК, были отмечены у 22(73%) больных, включая психосоматические расстройства (у 20 больных/67%); симптомы,обусловленные поражением костной системы (у 12 больных /40%) и ЖКТ (10 больных/33%). У13трети больных выявлены все системные симптомы, опосредованные воздействием медиаторовТК на различные внутренние органы. Выявлена корреляция между интенсивностьюпсихосоматических расстройств, костных симптомов и подтипом мастоцитоза (от наиболееблагоприятногоКМксамомуагрессивномуАСМ).Связимеждусимптомами,опосредованными поражением ЖКТ (боль в эпигастрии, тошнота), и агрессивностью процессаотмечено не было. Можно предположить, что симптомы поражения ЖКТ могут бытьобусловлены сопутствующей патологией, а не основным заболеванием.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
