Диссертация (1140869), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Температуру тела (37Сº)поддерживали с использованием управляемой обратной связью электрогрелки.Разрез кожи и подкожных тканей головы проводили в проекции сагиттального швачерепа. По стереотаксическим координатам А-0,7 мм, L-3 мм, и Н-6 мм (областьлевого хвостатого ядра) проделывали отверстие в черепе диаметром 0,5 мм ивводили иглу (№22) с закруглённым концом, через которую вводили аутокровь вобъеме 60 мкл.
Для формирования гематомы кровь брали из бедренной венынепосредственно перед введением в мозг (гепарин не добавляли). Перед введениемкрови в мозг на иглу было надето плотно прилегающее латексное кольцо,препятствовавшее вытеканию крови по каналу вдоль иглы. Введение кровипроводили в два этапа: сначала, в течение 7 минут вводили 20 мкл крови, затемчерез 10 минут еще 40 мкл крови в течение 10 минут. Через 5 минут канюлюизвлекали. Отверстие в черепе заделывали стоматологическим цементом, кожуушивали. Летальных исходов не было. По локализации гематомы соответствоваликровоизлияниям, которые наиболее часто возникают у человека и развиваются врезультатеразрывалентикулостриарныхартерий.Вкачествеконтроляиспользованы крысы, которым была проведена ложная операция - трепанация свведением иглы в головной мозг без введения крови через иглу.
Операциипроводились утром, с 11 до 13 часов.Гистологические, морфометрические и статистические методыКрыс выводили из эксперимента методом декапитации на 1, 3 и 7-е суткипосле моделирования инсульта в 8 часов ровно (контрольных животных – на 1,3 и7-е сутки после ложной операции). Забор материала проводился в течение 3-хминут после забоя: животных вскрывали, трахею препарировали целиком, затемвыделяли зону вблизи ее бифуркации. Материал фиксировали в 10% формалине споследующей стандартной спиртовой проводкой и заливкой в парафин. Изпарафиновых блоков готовили срезы толщиной 5 мкм, окрашивали гематоксилинэозином, азур-2-эозином, по Маллори (для выявления коллагеновых волокон).32Подсчет клеток проводили на срезах, окрашенных азур-2-эозином.
Стенку трахеиизучали при помощи бинокулярной лупы МБИ-I. Клеточный состав лимфоиднойткани изучали с помощью микроскопа МБИ-3, при увеличении объектива 90, подмасляной иммерсией с использованием двадцати пяти узловой морфометрическойсетки (с шагом 10мкм), вмонтированной в окуляр (10х) микроскопа. Подсчетклеток проводили на стандартной площади среза равной 880 мкм² в 10 полях зренияв лимфоидных узелках (верхушка, центр и основание узелка), в собственнойпластинке слизистой оболочки трахеи, между клетками покровного эпителиятрахеи. Определяли количество бластов, больших, средних и малых лимфоцитов,плазмобластов, плазмоцитов, нейтрофилов, эозинофилов, макрофагов, клеток скартинами митоза, деструктивно измененных клеток, ретикулярных клеток ифибробластов.Результатыморфометрическихисследованийзаносиливпротоколы. Статистическую обработку результатов проводили по общепринятойметодике [36, 101].
Полученный цифровой материал обработан на ПЭВМ(Операционная система Windows XP) с применением статистического пакетапрограмм SPSS 17 (Statistical Package for the Social Sciences; SPSS, Inc. США)методами параметрической и непараметрической статистики. Для числовыхпоказателей рассчитывали среднеарифметические значения абсолютных иотносительных величин (M) и их стандартные ошибки (m). Достоверностьразличий определяли по T-критерию Стьюдента (p) и U-критерию Манн-Уитни(p₁). Корреляционную связь между показателями анализировали при помощикоэффициентов корреляции Пирсона (r) и Спирмена (ρ).
Различия оценивали, какзначимые при p и p₁≤0,05. Диаграммы и таблицы построены в программе MicrosoftExcel 2003.33ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ3.1. Клеточный состав лимфоидной ткани стенки трахеи у неустойчивых кстрессу крыс в норме и в условиях экспериментального геморрагическогоинсульта3.1.1. Клеточный состав лимфоидной ткани стенки трахеи у неустойчивых кстрессу крыс в нормеЛимфоидная ткань стенки трахеи крыс в изученном нами отделе органапредставлена прежде всего лимфоидными узелками.
Лимфоидные узелки имеютокруглую форму, располагаются субэпителиально, преимущественно в хрящевойчасти (рис. 1) и на границе хрящевой и перепончатой части трахеи.Рис. 1 Лимфоидный узелок в стенке трахеи интактной крысы1 – эпителиальная выстилка; 2 – собственная пластинка слизистой оболочки иподслизистая основа; 3 – гиалиновый хрящ; 4 – адвентициальная оболочка; 5 –хрящевая часть; 6 – перепончатая часть; 7 – лимфоидный узелок.Микрофотография. Окраска гематоксилин-эозином. Ув.: ок.10, об.5.Мантия и центры размножения в узелках не выявляются. Клетки лимфоидного рядарасполагаются в узелках компактно.
Характерной особенностью узелков являетсяих влияние на морфологию расположенного над ними эпителия (рис. 2).34Рис. 2 Уплощенные эпителиоциты над верхушкой лимфоидного узелка стенкитрахеи интактной крысы; 1 – эпителиоциты, не имеющие ресничек.Микрофотография. Окраска гематоксилин-эозином. Ув.: ок.10, об.100.Клеточный состав лимфоидных узелков характеризуется преобладаниеммалыхлимфоцитов(таблица1,2).Выявленасильнаяположительнаякорреляционная связь плотности распределения клеток и количества малыхлимфоцитов во всех зонах узелков (таблица 3). Плотность распределения клеток, атакже число малых лимфоцитов в абсолютном и относительном выражении визученных зонах узелков достоверно не различается.
Большие лимфоциты ибласты, присутствуют во всех отделах узелков. Абсолютное число этих клеток вцентре узелков большее по сравнению с другими отделами (соответственно,p=0,013 и p₁=0,01 для больших лимфоцитов, p=0,014 и p₁=0,01 для бластов) исоставляет, соответственно, 1,3±0,51 и 2,2±0,38 клеток/880мкм².
Доля бластов ибольших лимфоцитов в центре в 2,05 раз больше, чем в области верхушки узелков(таблица 2). Число плазматических клеток в верхушке лимфоидных узелковсоставляет 2,9±0,42 клеток/880мкм², что в 5,8 раз больше, чем в их основании, и в9,6 раз больше, чем в центре (соответственно, p=0,022 и p₁=0,01; p=0,025 иp₁=0,015) -таблица 1. Доля этих клеток максимальна в верхушках узелков исоставляет 9,32%.
В указанной зоне узелков содержание плазмобластов сильноположительно коррелирует с плотностью распределения клеток (таблица 3). В35узелках встречаются макрофаги, абсолютное число и доля этих клеток в изучаемыхзонах узелков одинаковы (таблица 1, 2). Содержание деструктивно измененныхклеток в центре узелков выше, чем в основании и верхушке, соответственно,2,6±0,5 клеток/880мкм² в верхушке, 4,0±0,38 – в центре и2,3±0,29 в основанииузелка (p=0,01и p₁=0,01; p=0,022 и p₁=0,04).
Доля этих клеток наибольшая в центреузелка (таблица 2).В рассматриваемом нами отделе трахеи встречались также скопления клетоклимфоидного ряда в области выводных протоков и терминальных отделов желез,но оно были более редкой находкой, чем лимфоидные узелки. Скопления восновном овальной формы, не имеют четких границ по периферии (рис. 3).Рис. 3 - Лимфатический сосуд, проходящий через скопление лимфоидного ряда вподслизистой основе стеки трахеи интактной крысы;1 - лимфатический сосуд; 2 –цилиндрический реснитчатый эпителийМикрофотография. Окраска гематоксилин-эозином. Ув.: ок.10, об.20.36Таблица 1Клеточный состав лимфоидных узелков, собственной пластинки слизистой оболочки и содержание клеток лимфоидного ряда вэпителиальной выстилке стенки трахеи в норме у неустойчивых к стрессу крыс (M±m и min - max в абсолютных значениях)n=7Клетки\ЛокализацияЭпителиальная выстилкаретикулярные клетки-фибробласты-бласты-большие лимфоциты-средние лимфоциты-малые лимфоциты0,2±0,190-1Собственная пластинкаслизистой оболочкиЛимфоидный узелок0,3±0,15*0-21,8±0,32*3-86,3±0,82*7-251,7±0,290-40,5±0,260-4верхушка2,3±0,29*1-41,7±0,39*0-40,1±0,090-11,6±0,21*0-24,9±0,523-813,7±1,73*7-251,5±0,42*0-41,4±0,42*0-4центр3,7±0,36*3-60,6±0,3*0-31,3±0,510-52,2±0,381-43,7±0,33*2-511,1±1,6*6-200,1±0,090-10,2±0,190-2основание2,8±0,24*2-41,9±0,45*1-50,7±0,210-21,9±0,31*1-43,1±0,31*2-511,9±0,8*8-160,4±0,260-20,1±0,090-12,0±0,29*1-43,4±0,47*0-4-плазмобласты-плазмоциты-незрелые нейтрофилы-----зрелые нейтрофилы-----незрелые эозинофилы-----зрелые эозинофилы-0,2±0,190-10,1±0,090-1--митозы-----0,1±0,091,2±0,381,1±0,341,2±0,37*0-40-40-30-21,2±0,35*2,6±0,54,0±0,38*2,3±0,29*деструктивно измененные клетки1-61-62-51-4Примечание: прочерк (-) означает отсутствие клеток на площади среза 880 мкм²; * - p и p₁≤0,05 при сравнении с показателями у устойчивых к стрессу крысмакрофаги-38Таблица 2Клеточный состав лимфоидных узелков, собственной пластинки слизистой оболочки и содержание клеток лимфоидного ряда вэпителиальной выстилке стенки трахеи в норме у неустойчивых к стрессу крыс (M±m в %); n=7Лимфоидный узелокЭпителиальнаявыстилкаСобственная пластинкаслизистой оболочкиверхушкацентроснованиеретикулярные клетки-11,43±0,94*7,39±0,94*13,12±1,15*10,65±0,78*фибробласты-19,43±1,505,47±1,25*2,13±0,96*7,22±1,44*бласты--0,32±0,314,61±1,632,66±0,67большие лимфоциты-1,71±0,48*5,15±0,69*7,80±1,227,22±0,99*средние лимфоциты-10,29±1,03*15,76±1,6613,12±1,05*11,79±0,99*100,00±89.9036,02±2,62*44,05±5,47*39,36±5,05*45,25±2,55*плазмобласты-9,71±0,944,82±1,35*0,35±0,311,52±0,84плазмоциты-2,86±0,844,50±1,34*0,71±0,630,38±0,31незрелые нейтрофилы-----зрелые нейтрофилы-----незрелые эозинофилы-----зрелые эозинофилы-1,14±0,630,32±0,31--митозы-0,71±0,42-макрофаги-0,57±0,31*3,68±1,223,90±1,13*4,56±0,63*деструктивно измененные клетки-6,86±1,30*8,36±1,64*14,18±1,2*48,74±0,94*Клетки\Локализациямалые лимфоцитыПримечание: прочерк (-) означает отсутствие клеток на площади 880 мкм²; * - p и p₁≤0,05 при сравнении с показателями у устойчивых к стрессу крыс39Таблица 3Корреляционные связи в содержании клеток в лимфоидных узелках и собственнойпластинке слизистой оболочки трахеи у неустойчивых к стрессу крыс в норме; n=14ЛокализацияКлеткиверхушкамалые лимфоциты/узелкаплазмобластымалые лимфоциты/ пркплазмобласты/пркцентрузелкасредние лимфоциты/пркмалые лимфоциты/пркплазмобласты/плазмоцитыоснованиеузелкамалые лимфоциты/пркплазмоциты/плазмобластысобственная плазмобласты /средниепластинкалимфоцитыплазмобласты/ малыелимфоцитыплазмоциты/пркКоэффициенткорреляции rpКоэффициентранговойкорреляции ρ-0,8160,828-0,804≤0,01≤0,01≤0,010,8970,8870,894≤0,01≤0,01≤0,010,8520,7871,000≤0,01≤0,01≤0,010,8520,7261,000≤0,01≤0,05≤0,010,8570,667≤0,01≤0,050,8040,667≤0,01≤0,050,748≤0,05-0,739≤0,050,7620,652≤0,05≤0,05-0,7390,663≤0,05≤0,05pПримечание: прк – плотность распределения клеток лимфоидного ряда на стандартнойплощади гистологического среза 880 мкм²В собственной пластинке слизистой оболочки трахеи диффузно рассеяныклетки лимфоидного ряда, окружающие просвет органа сплошным кольцом.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
