Автореферат (1140868), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Полученные результаты и использованная вэкспериментальная модель применимы при создании и доклиническом испытании новыхалгоритмов терапии и профилактики осложнений инсульта. Сведения о структурных различияхлимфоидной ткани у устойчивых и неустойчивых к стрессу крыс в норме и в условиях ЭГИ могутпослужить основой для внедрения в практику профилактических методик, направленных на5повышение устойчивости к стрессу, как у здоровых людей, так и у пациентов с факторами рискаразвития инсульта. Применение материалов диссертации возможно в экспериментальнойнаучно-исследовательской работе и в учебном процессе на кафедрах морфологического,клинического и биологического профиля медицинских и биологических ВУЗов, в научноисследовательских центрах.Основные положения, выносимые на защиту1.
В норме клеточный состав лимфоидных образований стенки трахеи у крыс с различнойустойчивостью к стрессу не одинаков в количественном отношении.2. В условиях ЭГИ происходят значительные изменения клеточного состава лимфоидныхобразований стенки трахеи крыс.3. Характер изменений клеточного состава лимфоидных образований при ЭГИ зависит отстрессоустойчивости крыс и срока эксперимента.4. В условиях ЭГИ лимфоидные узелки и собственная пластинка слизистой оболочки стенкитрахеи крыс характеризуются обеднением малыми и средними лимфоцитами и выраженнойдеструкцией клеток лимфоидного ряда.Методология и методы исследованияДля исследования использован материал (трахея), полученный у 98 сакрифицированныхкрыс-самцов Вистар.
Объект изучения – лимфоидные образования стенки органа. В работеприменялись метод эксперимента, гистологические, морфометрические и статистическиеметоды.Степень достоверности и апробация результатовДостоверностьиобоснованностьрезультатовивыводовдиссертационнойработыподтверждается их репрезентативностью за счет изучения 98 трахей (170 гистологическихпрепаратов), полученных от крыс-самцов Вистар, применением современных методовисследования с последующей статистической обработкой цифровых данных. Материалыдиссертационной работы доложены и обсуждены на совместных заседаниях кафедры анатомиичеловека ФГАОУ ВО ПМГМУ им.
И.М. Сеченова Минздрава России и лабораториифункциональной анатомии ФГБНУ Научно-исследовательский институт морфологии человека(2006-2009 г.г.,2012г.),наIVВсероссийскойнаучно-практическойконференциисМеждународным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительныхпроцессов» (Новосибирск, 2009 г.), VIII и X Всероссийской научной конференции "Бабухинскиечтения" (Орел, 2011 г., 2017 г.), X и XIII Конгрессе международной ассоциации морфологов(Ярославль, 2010 г.; Петрозаводск, 2016 г.), Всероссийской научной конференции смеждународным участием «Экологические аспекты морфогенеза» (Воронеж, 2015 г.), ЗаседанииМосковского отделения Научного медицинского общества анатомов, гистологов и эмбриологов6(2017 г.) Апробация диссертационной работы проведена на научной конференции кафедрыанатомии человека ФГАОУ ВО Первый МГМУ им.
И.М. Сеченова 26 апреля 2017 года.Личный вклад автораНа этапе планирования автором самостоятельно проведен поиск и анализ данныхотечественной и зарубежной научной литературы, определены цель и задачи исследования,разработан дизайн и выбраны методы исследования, адекватные поставленным задачам.Постановка эксперимента и предварительное тестирование крыс, сбор, подготовка и анализморфологического материала, а также проведение статистической обработки полученныхданных выполнены лично автором. Основное содержание диссертационного исследованиядостаточно полно отражено автором в научных статьях и тезисах.Внедрение результатов исследования в практикуРезультаты диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедреанатомии человека и кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии ФГАОУ ВО Первый МГМУим.
И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)Соответствие диссертации паспорту научной специальностиДиссертационная работа соответствует паспорту научной специальности 14.03.01 – анатомиячеловека, области исследования согласно пунктам 1,2 и 7.Публикация материалов исследованияОсновное содержание диссертации отражено в 17 научных работах, в том числе в 10 статьях,опубликованных в журналах из перечня ВАК РФ.Объем и структура диссертацииДиссертация изложена на 150 страницах машинописного текста, состоит из глав:введение, обзор литературы, материал и методы исследования, результаты собственногоисследования, обсуждение результатов исследования, заключение, выводы, практическиерекомендации, список сокращений, список литературы (239 ссылок, из них 163 – наотечественные и 76 - на зарубежные источники).
Диссертация содержит 29 таблиц, 28микрофотографию, 14 диаграмм.СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫМатериал и методы исследованияМатериалом для исследования служила трахея 98 крыс-самцов Wistar весом 250 - 300 г ввозрасте 4-6 месяцев (питомник РАМН «Столбовая»). Исследования проводились на базекафедры анатомии человека и кафедры нормальной физиологии ФГАОУ ВО ПМГМУ им. И.М.Сеченова в весеннее время года. Перед опытом крысы содержались в карантине 10 дней, по 10особей в клетке, в условиях естественного освещения и свободного доступа к воде и пище. Приработе с животными руководствовались положениями приказов Минвуза СССР № 742 от713.11.84 «Об утверждении правил проведения работ с использованием экспериментальныхживотных» и № 48 от 23.01.85 «О контроле за проведением работ с использованиемэкспериментальныхживотных»,требованиямиЕвропейскойконвенциипозащитеэкспериментальных позвоночных животных (от 18 марта 1986 г.).
Для оценки устойчивости крыск эмоциональному стрессу проводили предварительное тестирование животных в «открытомполе». Открытое поле - освещенная (100Вт) круглая арена (d=90 см, h=40 см), разделеннаярадиальными и круговыми линиями на 37 секторов. С помощью программы «Open Field»[«Открытое поле»; Коплик Е. В. 2002] регистрировали латентные периоды первого перемещенияи выхода в центр поля, горизонтальные амбуляции (количество пересеченных периферическихи центральных квадратов), вертикальную активность (количество периферических ицентральных стоек), исследовательскую активность (заглядывание в норы).
Тестированиепроводилось в течение 3 минут, в одно и то же время (10 часов). Устойчивость крыс к стрессуоценивали по величине индекса активности (ИА), для вычисления которого сумму числапересеченных периферических и центральных секторов, периферических и центральных стоек,а также исследованных объектов делили на сумму латентных периодов 1-го движения и выходаживотного в центр открытого поля [Коплик Е.В., 2002]. Из 150 крыс для эксперимента былоотобрано 49 устойчивых к стрессу крыс (УСК) - ИА от 2,25 до 5,8, и 49 неустойчивых к стрессукрыс (НСК) - ИА от 0,25 до 0,79 [Коплик Е. В.,2002], амбивалентные крысы из экспериментаисключались.
УСК и НСК были разделены на группы: интактная (норма), контрольная (ложнаяоперация) и экспериментальная (ЭГИ). В контрольных и экспериментальных группах выделены3 подгруппы в соответствии со сроками выведения из эксперимента (1,3,7-е сутки).Через 3-е суток после тестирования «в открытом поле» на крысах экспериментальныхгрупп был смоделирован инсульт.Н аркотизированных крыс (хлоралгидрат 400 мг/кгвнутрибрюшинно) помещали в стереотаксический аппарат в целях иммобилизации и точноговведения крови в головной мозг. После разреза кожи и подкожных тканей головы, в черепе крысделали отверстие с помощью бормашины.
Затем в отверстие вводили иглу с закруглённымконцом (№22), через которую в головной мозг вводили аутокровь в объеме 60 мкл без добавлениягепарина (стереотаксические координаты: А-0,7 мм, L- 3 мм, и Н- 6 мм - левое хвостатое ядро).Кровь забирали из бедренной вены непосредственно перед введением в мозг.
На иглупредварительно надевали латексное кольцо, препятствовавшее вытеканию крови по каналу вдольиглы [Deinsberger W. et al., 1996]. Контрольным крысам проводили ложную операцию трепанацию с введением иглы в головной мозг (без введения крови). Крыс выводили изэксперимента методом декапитации на 1, 3 и 7-е сутки после ЭГИ (в контрольной группе - послеложной операции). Животных вскрывали, трахею препарировали целиком и выделяли зонувблизи бифуркации органа. Материал забирали в течение 3-х минут после забоя, фиксировали в810 % формалине с последующей стандартной спиртовой проводкой и заливкой в парафин[Меркулов Г.А., 1961].
Из парафиновых блоков готовили срезы толщиной 5 мкм, окрашивалигематоксилин-эозином, азур-2-эозином, по Маллори. Подсчет клеток проводили на срезах,окрашенных азур-2-эозином. Стенку трахеи и клеточный состав лимфоидной ткани изучали спомощью микроскопа МБИ-3, при увеличении объектива 90, под масляной иммерсией сиспользованием двадцати пяти узловой морфометрической сетки (с шагом 10 мкм),вмонтированной в окуляр (10х) микроскопа. Определялся клеточный состав лимфоидныхузелков, собственной пластинки слизистой оболочки трахеи. Подсчет клеток проводили настандартной площади среза (880 мкм²) в 10 полях зрения.
Считали ретикулярные клетки,фибробласты, бласты, большие, средние и малые лимфоциты, плазмобласты, плазмоциты,нейтрофилы, эозинофилы, макрофаги, клетки с картинами митоза и деструктивно измененныеклетки. Результаты морфометрических исследований заносили в протоколы. Статистическуюобработку результатов проводили по общепринятой методике [Герасимов А.Н., 2007, НовиковД.А., 2005]. Полученный цифровой материал обработан на ПЭВМ (ОC Windows XP) сприменением статистического пакета программ SPSS 17 методами параметрической инепараметрической статистики. Для числовых показателей рассчитывали среднеарифметическиезначения абсолютных и относительных величин (M) и их стандартные ошибки (m).Достоверность различий определяли по T-критерию Стьюдента (p) и U-критерию Манн-Уитни(p₁). Корреляционную связь между показателями анализировали при помощи коэффициентовкорреляции Пирсона (r) и Спирмена (ρ). Различия оценивали, как значимые при p и p₁ ≤0,05.Диаграммы и таблицы построены в программе Microsoft Excel 2003.
Все методы исследованияосвоены автором и выполнялись ею лично.Результаты исследования и их обсуждениеПо нашим данным, в норме у крыс лимфоидная ткань стенки трахеи вблизи бифуркацииоргана представлена лимфоидными узелками. В собственной пластинке слизистой оболочки и вподслизистой основе стенки трахеи диффузно рассеяны клетки лимфоидного ряда, которыемогут образовывать скопления вблизи выводных протоков и терминальных отделов желез.Присутствие здесь лимфоидных узелков, наиболее зрелых в функциональном отношениилимфоидных структур возможно связано с активным контактом слизистой оболочки сантигенами из внешней среды ввиду турбулентного характера воздушной струи.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
