Автореферат (1140826), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Дрожжеподобные грибы рода Candida выделяли на среде Сабуро(SabouraudDextroseAgar,«Himedia»,Индия).Дляидентификацииграмположительных аэробных и факультативно анаэробных кокков использовалибиохимическую тест-систему «BBL Crystal GPID»; грамотрицательных аэробных ифакультативно анаэробных палочек, ферментирующих и не ферментирующих9глюкозу — «BBL Crystal E/NFID»; облигатных анаэробов — «BBL Crystal AnaerobeID Kit» («Becton Dickinson», США).При исследовании микрофлоры кишечника определяли количество бифидо- илактобактерий, кишечной палочки с нормальной и сниженной ферментативнойактивностью, энтерококков, стафилококков, клостридтальных и неклостридиальныхоблигатных анаэробов, гемолизирующих штаммов кишечной палочки иэнтерококка, условно-патогенных лактозонегативных цитратассимилирующихэнтеробактерий (клебсиелла, протей, энтеробактер, цитробактер и др.
), грибов родаCandida.В качестве референсных значений (нормы) состава микрофлоры кишечникачеловека приняты данные [Митрохин С.Д., 2004; Кириченко А.А., 1993].Оценку степени микробиологических отклонений поводили по ОСТ1500.11.0004-2003 «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника».Методы иммунологических исследованийОбразцы периферической крови для иммунологических исследованийотбирали при поступлении (10-5-е сутки до операции), затем на 3-5-е и 30-35-есутки после хирургического вмешательства.
Иммунологические исследованиявыполняли и оценивали их результаты в соответствии с принципами, изложеннымив руководстве по клинической иммунологии [Хаитов Р.М. и др., 2009].Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови проводилиметодом проточной лазерной цитометрии на приборе FACScan (Becton Dickinson,США) с использованием двухцветного реагента Simultest (флуоресцеинизотиоцианат, фикоэритрин) (Becton Dickinson, США).Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли по их способностипоглощать клетки Staphylococcus aureus, меченные флуоресцеин-изотиоцианатом,на проточном цитометре FACScan (Becton Dickinson, США).Исследования выполняли на базе лаборатории иммунологии и регуляторныхмеханизмов в хирургии Российского научного центра хирургии имени академикаБ.В.Петровского (руководитель – Заслуженный деятель науки России, профессорЛ.И.Винницкий).
Для сопоставления полученных результатов иммунологическихисследований с показателями здоровых доноров использовали референсныезначения, принятые в указанной лаборатории как условная норма.Методы статистической обработки результатов исследованияВвод, статистическую обработку и анализ данных проводили с помощьюсистемы микробиологического мониторинга «МИКРОБ» [Скала Л.З. и др., 2000], атакже программы Statistica 8 (StatSoft Inc) в соответствии с общепринятымиметодами биомедицинской статистики [Гланц С., 1999].
Результатымикробиологических исследований представлены в виде средней ± стандартная10ошибка средней (М±m); данные иммунологических исследований – в виде средней ±стандартное отклонение (М±SD). Межгрупповые сравнения по количественнымхарактеристикам проводили с помощью критериев Манна-Уитни и Вилкоксона длянезависимых и связанных выборок, соответственно. При сравнении независимыхвыборок по качественным признакам использовали критерий χ2 с поправкой Йейтсаи точный критерий Фишера. При анализе связи переменных рассчитываликоэффициент корреляции Спирмена. Нулевая гипотеза отвергалась при p≤0,05.РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕВлияние Биона 3 на состояние кишечной микрофлоры у больныхколоректальным раком в периоперационном периодеВ предоперационный период статистически значимых различий поизученным микробиологическим показателям между группами больных невыявлено. У подавляющего большинства пациентов диагностирован дисбиоз(микроэкологический дисбаланс) толстой кишки.
Разница между здоровымилюдьми (данные литературы) и больными КРР была статистически значимой побольшинству изученных микробиологических показателей.У 65-75% больных с КРР было существенно снижено количествополноценной кишечной палочки и бифидобактерий, более чем у 50% – количестволактобацилл. Одновременно с этим у 45-53% (в разных группах) больных КРРотмечалась экспансия условно-патогенных цитратассимилирующих энтеробактерий(протей, клебсиелла, цитробактер, энтеробактер).У 20-25% пациентов была выявлена пролиферация энтерококков, которыепреобладали в количественном плане над палочковидными формами кишечныхбактерий.
Количество бактероидов было на порядок меньше референс-нормы, ивысевались они лишь у 35-42% больных КРР. Количество пептострептококковстатистически значимо не отличалось от референсных значений. Содержаниедругой группы облигатных анаэробов – клостридий – у онкологических больных(>6,0lg) существенно превышало таковое у здоровых людей (4,8±0,4). У 25-43%больных КРР обнаружена пролиферация в толстой кишке дрожжеподобных грибоврода Кандида. У 15-20% выявляли золотистого стафилококка. У 35-45% больных вмикробном пейзаже фекалий появлялись кишечные палочки и энтерококки сатипичными биологическими свойствами: они были способны вызывать гемолизэритроцитов барана при инкубировании in vitro.У 66% больных с КРР выявлен дисбиоз толстой кишки, который оценивалсякак дисбактериоз III степени тяжести, а фаза этого патологического процесса – какфаза агрессии аэробной флоры.
У 34% пациентов установлен дисбиоз II степенитяжести, находившийся в пусковой фазе развития процесса.11Эти данные предопределили целесообразность периоперационногоприменения пробиотически-мультивитаминного комплекса.Схема приема Биона 3 была разработана с учетом данных литературы о том,что у онкологических больных последовательное применение синбиотиков до ипосле хирургического вмешательства корригирует иммунологические нарушения ирасстройства кишечной микробиоты эффективнее, чем использование этихпрепаратов только в послеоперационном периоде [Tevlin R.
et al, 2013].Больные КРР хорошо перенесли периоперационый курс приема Биона 3: восновной группе не отмечено ни одного случая развития нежелательных побочныхявлений, связанных с применением этого препарата.В раннем послеоперационном периоде у больных контрольной группы,получавших стандартное периоперационное лечение, продолжали выявлятьсястатистически значимые изменения как в количественном, так и в качественномсоставе нормальной микрофлоры толстой кишки по сравнению с референснымипоказателями (табл. 3).Таблица 3. Влияние Биона 3 на показатели микробной экологии кишечника убольных КРР в раннем послеоперационном периодеКонтрольнаяОсновнаяРеференсныеМикроорганизмыгруппагруппа (Бион 3)значенияLg КОЕ/гLg КОЕ/гLg КОЕ/гКишечная палочка с полноценными4,2±0,3*6,5±0,4#7,7±0,4биологическими свойствамиБифидобактерии<7,0*8,0±0,49,6±0,4Лактобактерии4,2±0,2*6,0±0,3#6,9±0,3Цитратассимилирующие условно7,0±0,4*5,2±0,2#4,3±0,3патогенныеэнтеробактерииЭнтерококки9,2±0,6*6,7±0,4#5,6±0,4Облигатные анаэробы:- бактероиды10,0±0,29,5±0,39,2±0,5- пептострептококки8,0±0,36,2±0,4#6,4±0,4- клостридии>6,0*5,8±0,44,8±0,4Грибы:- C.
albicans3,3±0,6*2,5±0,5*0Стафилококки:Золотистый стафилококк5,3±0,7*0#0Гемолитические формы кишечныхбактерий:- кишечной палочки- энтерококка8,0±0,6*8,4±0,3*123,1±0,3*#2,5±0,4*#00Примечание: * – p≤0,05 в сравнении с референсными значениями; # – p≤0,05 всравнении с показателями контрольной группы больных КРР.Количество кишечных палочек с полноценными биологическимисвойствами, бифидобактерий и лактобацилл было на 1-3 порядка меньше референснормы. Значительно была снижена и частота их высевания (удельный вес вмикробном пейзаже): бифидобактерии высевались лишь у 8-10% больных,лактобациллы – у 19-22%, кишечные палочки с типичными биологическимисвойствами – у 46-53%.
Напротив, количество условно-патогенных,цитратассимилирующих бактерий, а также их удельный вес в микробном пейзаже(30-35%) были значительно выше по сравнению с референсными значениями. У 5565% больных была выявлена пролиферация энтерококков. У 45-50% пациентовконтрольной группы количество бактероидов на порядок превышало условнуюнорму. Содержание пептострептококков было на два порядка выше референсныхпоказателей. У 60-70% больных выявлена выраженная пролиферация клостридий. У35-40% больных выявлены грибы рода Кандида, а у 80-100% – гемолитическиеформы кишечных палочек и энтерококков. Статистически значимых измененийчисла бактероидов и пептострептококков не выявлено, вместе с тем прослеживаласьявная тенденция к их экспансии в микробном пейзаже фекалий больных.Установлено, что в раннем послеоперационном периоде в контрольной группедоля больных с дисбиозом толстой кишки, который оценивался как дисбактериоз IIIстепени тяжести, а фаза этого патологического процесса – как фаза агрессииаэробной флоры, возрастала с предоперационного уровня (65%) до 80%.
У 20%больных этой группы выявлен дисбиоз II степени тяжести и пусковая фазаразвивающегося патологического процесса (рис. 1).Рисунок 1. Влияние Биона 3 на доли больных КРР с разными степенямидисбиоза кишечника в раннем послеоперационном периодеКонтроль20%11%Бион 380%52%2 степень3 степеньнорма37%1 степень2 степеньПрием Биона 3 индуцировал в раннем послеоперационном периодезначительные сдвиги в сторону улучшения состояния микробной экологии толстой13кишки по сравнению с контрольной группой (табл.
3). Следует отметить, что у 11%больных основной группы в результате бактериологического исследования образцовфекалий не обнаружено микробиологических критериев дисбиоза толстой кишки. У37% пациентов выявлен дисбиоз I степени тяжести, находившийся в латентной фазе,а у 52% больных – дисбиоз II степени тяжести в пусковой фазе (рис. 1).Симптомы кишечной диспепсии отсутствовали у 100% пациентов,получавших Бион 3. У 30% из них отмечалось незначительное уменьшениеколичества кишечных палочек с типичными биологическими свойствами всравнении с референсными значениями. У такого же процента больных мыобнаружили уменьшение количества бифидобактерий, у 15% – было сниженоколичество лактобацилл. Изменения в защитной флоре кишечного микробиоценозабыли выражены не столь резко как в контрольной группе, что, очевидно, связано спротективным эффектом Биона 3.
Среди больных, принимавших пробиотическимультивитаминный комплекс, только у 8-9% было обнаружено увеличениеудельного веса в микробном пейзаже их фекалий условно-патогенных,цитратассимилирующих энтеробактерий, и лишь у 12-13% – высевались кишечныепалочки и энтерококки с гемолитическими свойствами. У 9-10% больных основнойгруппы отмечалась пролиферация клостридий. Увеличение количественногосодержания энтерококков по сравнению с референсными значениями быловыявлено у 20-21% больных. В основной группе больных, также как и вконтрольной группе, был достаточно высок процент лиц, у которых из калавысевались Candida albicans (21%).
Это говорит о том, что Бион 3 не предотвращаетразвитие кандидоза кишечника, а лишь незначительно снижает его степень.Очевидно, для этих целей пробиотик следует комбинировать с антимикотиками.В позднем послеоперационном периоде в контрольной группе сохранялисьсущественные расстройства кишечной микрофлоры (табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
