Диссертация (1140795), страница 8
Текст из файла (страница 8)
6.46Рис 6. Исходы предыдущих беременностей.Как видно из представленных данных, лишь в 12,9% у женщин сугрозой прерывания в анамнезе были отмечены своевременные роды, в 8%был произведен медицинский аборт по желанию женщины. В остальныхслучаях имели место неблагополучные исходы беременностей. Отмеченвысокий процент недонашивания беременности. В группе УПБ в 9,7% имелиместо преждевременные роды, в 21 % случаев отмечался самопроизвольныйаборт, и в 42% происходило замирание плода на раннем сроке гестации. Вгруппе с неразвивающейся беременностью также отмечен высокий процентзамерших беременностей (37,5%), тогда как в группе с физиологическимтечением беременности самопроизвольный аборт был в 7,6 % случаев,диагноз неразвивающейся беременности был установлен в 5,8% случаев, асрочные роды составили 47% от числа всех беременностей.47Глава 4.
Результаты собственных исследований и ихобсуждение.4.1 Оценка функциональной активности нейтрофильного звеналейкоцитов методом хемилюминесценции с двойной последовательнойстимуляциейХемилюминесценцию успешно применяется при изучении иммунныхнарушений,нарушенийметаболизма,дисфункцииэндотелия,ишемии/реперфузии миокарда и мозга, онкологических и воспалительныхзаболеваний, а также многих других болезней, патогенез которых связан соксидативным стрессом [161].Новый метод ХЛ оценки функциональной активности нейтрофилов,основанный на последовательной стимуляции в образце цельной крови двумястимулами, позволяет оценить максимальный радикал-продуцирующийпотенциал нейтрофилов.
Стимулы ФМА и ФМЛФ имеют разный механизмдействия. ФМА (внутриклеточный механизм) проникает в клетку путемпассивной диффузии и активирует протеинкиназу С. ФМЛФ характеризуетсявнеклеточным рецепторным механизмом, причем стимуляция фМЛФобусловлена последовательной сменой внеклеточного и внутриклеточногосинтеза АФК. Взаимодействие фМЛФ со специфическими рецепторамиприводит к немедленной выработке АФК во внеклеточную среду НАДФ-Ноксидазными комплексами, находящимися на плазматической мембране.Активация рецепторов фМЛФ стимулирует растянутый во времени процессфагоцитоза и образование фагосом, в которых также происходит синтез АФК[158].Основным источником АФК в крови являются фагоциты. Генерацияосуществляется с помощью ферментного комплекса НАДФН-оксидазы.Изоформа NOX2, первая изученная НАДФН-оксидаза, представляет собоймногокомпонентный ферментативный комплекс, направленный на перенос48электрона на молекулу кислорода.
Этот комплекс встроен в липидныйбислой мембраны и может находится как на плазмалемме, так и намембранах секреторных вакуолей, гранул, содержащих желатиназу, илиспецифических гранул нейтрофилов. Весь ферментативный комплекссостоит из нескольких субъединиц. В покоящейся клетке эти субъединицыразобщены и распределены между плазматической мембраной и цитозолем.Во время активации клетки каким-либо стимулом запускается каскадвнутриклеточных посредников, сопровождающийся стремительным входомионов кальция в клетку, активацией протеинкиназы С, фосфолипазы А2, чтоприводит к фосфорилированию белков p47-phox и p67-phox и сборкемембранногокомплексаНАДФНоксидазыиактивныйсинтезсупероксидного радикала [162].В эксперименте активацию клетки вызывают воздействием различныхстимулов, которые подразделяют на корпускулярные (частицы латекса,опсонизированныйинеопсонизированныйзимозан,бактериииихкомпоненты, активированный уголь) и растворимые агенты (фМЛФ,аллергены,рецепторныйпирогенал).аппаратУказанныефагоцита.индукторывоздействуютчерезБезрецепторнаяактивацияклетокдостигается после воздействия кальциевого ионофора А 23187 илиактиватором ПкС ФМА, который проникает в клетку за счёт пассивнойдиффузии [163].Данные были проверены на нормальность распределения по критериюШапиро–Уилка.
Распределение данных не является нормальным, поэтомудальнейшие оценки проводили по непараметрическим критериям (р < 0.005).Оценка удельной активности нейтрофилаПри определении удельной спонтанной активности нейтрофила А*сп вгруппе К3 значения были выше в 4,5 раза по отношению к НБ (p = 0, 007), поотношению к УПБ в 2,1 раз, по отношению к группе К1 в 2,4 раза, однакоразличия не достоверны.
Удельная пиковая активность нейтрофила в ответна стимул ФМА была также достоверно выше у К3 по сравнению с НБ в 849раз (p = 0,001), в 4,7 раз к К1 (p = 0,0027) и в 3,7 раз по отношению к УПБ (p= 0,001). Удельная активность в ответ на стимул ФМЛФ статистическизначимо выше в группе УПБ по отношению к НБ в 2,4 раза (p = 0,003), в 2,5раз по отношению к К3 (p = 0,05), в 1,7 раз относительно К1 (p = 0,003).Суммарная удельная радикал-продуцирующая активность нейтрофила быладостоверно выше в группе УПБ по отношению к НБ в 2 раза (р = 0,002), в 2,6раз относительно К3 (р = 0,01) и в 1,8 раз относительно К1 (р = 0,004).Оценка удельной активности нейтрофила представлена в табл.
4Таблица 4Оценка удельной активности нейтрофилов по группамГруппаУПБНБК1К30,580,40,481,18спонтанная Медиана 1,280,591,152,72активностьУдельная25%75%2,71,452,256,56Удельная25%3,152,92,7516,65пиковаяМедиана 7,33,45,727активность75%13,388,810,75127,7Удельная25%70,5348,3552,840,15пиковаяМедиана 131,655,777,553,9активность75%202,986243,8123,3Суммарная25%82,5541,3552,1316,6удельнаяМедиана 137,563,173,5552,8нейтрофиланейтрофиланастимулФМАнейтрофиланастимулФМЛФ50активность75%249,787,1143107,5нейтрофилаТаким образом, удельная спонтанная активность нейтрофилов, а такжеудельная пиковая активность в ответ на стимул ФМА достоверно выше вгруппе пациенток после самопроизвольного выкидыша, что указывает навысокую генерацию АФК нейтрофилами в момент выкидыша. Удельнаяпиковая активность в ответ на стимул ФМЛФ и суммарная активностьнейтрофила была выше в группе беременных с угрозой прерывания, чтоговорит о высокой радикалпродуцирующей способности нейтрофилов кгенерации АФК на фоне угрозы прерывания (преимущественно за счетвнутриклеточной продукции).Оценка интегральной активности нейтрофилаОписание массива данных для интегральной спонтанной ХЛ длягруппы УПБ: Медиана для группы УПБ (0,21 V), межквартильный размах(0,09-0,6 V).
Медиана для группы НБ (0,08 V), межквартильный размах (0,050,125 V). Медиана для К1 (0,16 V) (межквартильный размах (0,06-0,3V).Медиана для К2 (0,22 V) (межквартильный размах (0,15- 0,27V). Медиана дляК3 (0,41 V) межквартильный размах (0,35-1,9V) (рис.7).Интегральная спонтанная активность нейтрофила в группе УПБ выше в2,6 раз по отношению к НБ. В группе К3 выше в 5,1 раз относительно группыНБ, в 1,86 раз выше чем К2, в 2,5 раз относительно К1 и в 1,9 раз выше УПБ.В группе К2 Acп в 2,7 раз выше чем в НБ.51Рис. 7.
Оценка интегральной спонтанной активности нейтрофила Acп по группам.Значения представлены в виде медиана ± межквартильный размах. Для оценкиразличений между группами использовали тест Манна-Уитни. * относительно К3критерий Манна-Уитни, p < 0,005; # относительно НБ р < 0,01.Таким образом, пациенты, беременность которых протекает на фонеугрозы прерывания, а также пациенты после самопроизвольного абортахарактеризуются высокой спонтанной активностью нейтрофилов, при этом упациентов снеразвивающейся беременностью, напротив, отмечаласьсниженная активность, указывающая на иммунносупрессию.При сравнительном анализе параметра AФМА статистически значимыеразличия были выше в группах К3 по отношению к НБ в 10 раз, поотношению к К2 в 9,6 раз, к К1 в 7,7 раз, к УПБ в 4,8 раз (p < 0,03), значенияв УПБ выше НБ в 2 раза, К2 в 1,9 раз (p < 0,02). Медиана для группы УПБ(1,2 V), межквартильный размах (0,57-6,7 V).
Медиана для группы НБ (0,6V), межквартильный размах (0,2-1,4 V). Медиана для К1 (0,7 V)52(межквартильныйразмах(0,4-29(межквартильныйразмах(0,28-V).4,1V).МедианадляМедианаК2дляК3(0,62V)(6V)(межквартильный размах (4-43,1V) (рис 8).5040*30#20#10**Б1УПК2К3КНБ0Рис. 8.
Оценка интегральной спонтанной активности нейтрофила по группам вответ на стимул ФМА. Значения представлены в виде медиана ± межквартильныйразмах. Для оценки различений между группами использовали тест Манна-Уитни. *относительно К3 критерий Манна-Уитни, p < 0,03; # относительно УПБ р < 0,02.Таким образом, интегральная спонтанная активность в ответ на стимулФМА был достоверно выше у пациентов после самопроизвольноговыкидыша и угрозы прерывания, что указывает на праймированиенейтрофилов и напряженность лейкоцитарногорезультатеродовойдеятельности.Напротив,звена иммунитета впринеразвивающейсябеременности был самый низкий ответ.
Отсутствие реакции на стимулуказывает на слабую способность нейтрофилов к генерации АФК.Сравнительная характеристика интегральной активности в ответ на стимулфМЛФ представлена в табл.5.53Таблица 5Интегральная активность в ответ на стимул фМЛФ по группамГруппы,междукоторымипроводилиМедианаМежквартильныйразмахсравнениеК3 (n = 5) и1411,4-28,4НБ (n = 9)8,85,3-10,2К1 (n = 61) и10,87,1-17,9НБ (n = 9)8,85,3-10,2УПБ (n = 28) и21,810,6-40,9НБ (n = 9)8,85,3-10,15К2 (n = 22) и4,92,8-13К3 (n = 5)14,011,4-28,4УПБ (n = 18) и21,810,6-40,9К2 (n = 22)4,92,8-13УПБ (n = 28) и21,810,6-40,9К1 (n = 5)10,87,1-17,9р критерийМаннаУитни0,010,030,0080,0070,0010,001Суммарная интегральная активность в ответ на стимул фМЛФдостоверно выше в группе УПБ по отношению к К1, К2, НБ более чем в 2раза (р < 0,001). В группе К3 достоверно выше, чем в К2 и НБ более чем в 1,6раз (р < 0,01) (рис.9).54Рис.
9. Оценка интегральной активности нейтрофила по группам в ответ настимул ФМЛФ. Значения представлены в виде медиана ± межквартильный размах. Дляоценки различений между группами использовали тест Манна-Уитни. * относительноУПБ критерий Манна-Уитни, p < 0,001; # относительно К3 р < 0,01, К1 относительноНБ р= 0,03.Таким образом, интегральная спонтанная активность в ответ на стимулФМЛФ достоверно выше у беременных с угрозой прерывания, что указываетна высокую способность нейтрофилов к генерации АФК и возможноепреждевременное прерывания беременности. После самопроизвольноговыкидыша способность к дальнейшей генерации АФК снижается, чтосвидетельствует о расходовании потенциала нейтрофилов после родовойдеятельности.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
