Диссертация (1140795), страница 7
Текст из файла (страница 7)
В результате, итоговаякриваяпредставляетсякакматематическаясуммаквадратично-экспоненциальных функций. Оказалось, что любая кривая может бытьразложена на три составляющие: 1) ФМА-индуцированная продукция АФК,2) «быстрая» фМЛФ-индуцированная вспышка, обусловленная внеклеточнойпродукцией АФК через рецепторный путь, 3) «медленная» фМЛФиндуцированная вспышка, обусловленная внутриклеточной продукцией АФК(рис.3).38IХЛ, усл.ед.а)б)1,21,00,80,60,40,20,01,21,00,80,60,40,20,0050010002310Время, с5001000Рис. 3. Кривая кинетической ХЛ нейтрофилов крови при ответе на два стимула(ФМА и фМЛФ): а) результат математического моделирования и экспериментальнаякривая, б) результат деконволюции на три квадратично-экспоненциальные функции(пояснение в тексте).2.2.3 Определение антиоксидантной активности плазмы кровиметодом кинетической хемилюминесценцииОценку антиоксидантной активности (АОА) плазмы крови проводили спомощью методики, основанной на подавлении хемилюминесценции (ХЛ)[15].
Источником свободных радикалов в системе являлось диазосоединение— 2’-азо-бис(2-амидинопропан) дигидрохлорид (АБАП; Fluka, США). Вкачестве хемилюминесцентного зонда использовали люминол (5-амино1,2,3,4-тетрагидро-1,4-фталазиндион, гидразид 3-аминофталевой кислоты,Sigma,США).Хемилюминесцентныйанализплазмыпроводилинаоднокюветном хемилюминометре SmartLum 100 (ДИСофт, Россия) [159].В микропробирку объемом 1,5 мл помещали 50,0 мкл 50 мМ раствораАБАП и 20,0 мкл 0,1 мМ люминола.
Смесь перемешивали в течение двухминут на встряхивателе «Vortex yellow line tts2» при частоте 1400 об/мин иинкубировали 20 минут в темноте при комнатной температуре. Образованиесвободных радикалов в системе инициировали добавлением в кювету 93039мкл нагретого (37˚С) фосфатного буферного раствора (100 мМ КН2РО4, рН7,4; Sigma, США) к 70,0 мкл смеси АБАП и люминола. Помещали пробиркув кюветное отделение хемилюминометра. Регистрировали свечение додостижения стационарного уровня (I0) при 37°С, затем добавляли 10 мклплазмы крови, предварительно разбавленной в 10 раз фосфатным буфернымраствором. После добавления плазмы крови свечение прекращалосьблагодаря нейтрализации радикалов антиоксидантами плазмы крови, преждевсего, мочевой кислотой.
После расходования антиоксидантов происходилонарастание свечения и достижение нового стационарного уровня I (рис. 4).Общий объем пробы в кювете составлял 1,000 мл.Рис.4.Типичнаякриваяразвитияхемилюминесценцииприисследованииантиоксидантных свойств плазмы крови. Аналитический сигнал S(АОА) — площадь надкривой, «вырезаемая» антиоксидантами.В качестве аналитического сигнала использовали S(АОА) — площадьнад кривой, «вырезаемую» антиоксидантами.2.2.3 Оценка оксислительнойтриптофановой флуоресценциимодификацииальбуминапоСпектры флуоресценции регистрировали на спектрофлуориметре RF5301PC (SHIMADZU, Япония) в кварцевых кюветах с длиной оптическогопути 1,00 см.40Предварительно из плазмы крови отделяли глобулины — к 100 мклплазмы добавляли равное количество насыщенного раствора сульфатааммония ((NH4)2SO4, Sigma-Aldrich, США), при этом глобулины осаждались,а альбумин оставался в растворе.
Образовавшийся осадок отделялицентрифугированием в течение 10 минут при 450 g (микроцентрифугаMiniSpin — Eppendorf, Нидерланды). Использование сульфата аммония вкачестве высаливателя не оказывало мешающего влияния проведениюспектрофлуориметрических исследований.Полученную безглобулиновую плазму предварительно разбавляли в500 раз в 100 мМ фосфатном буферном растворе (рН 7,4) и одновременнорегистрировали спектр флуоресценции и спектр поглощения. Для расчетадоли окисленного альбумина использовали формулу:где I — флуоресценция альбумина в исследуемой плазме (λex = 260 нм,λmax = 335 нм), I0 — флуоресценция чистого альбумина в концентрации,равной концентрации альбумина в плазме, определенной биохимическимметодом.2.3 Статистическая обработка материалаСтатистическуюобработкуданныхпроводили,используяпрограммный пакет GraphPad Prisma 6.0.
Результаты представлены в видемедианыиинтерквартильногоразмаха.Дляпроверкигипотезыонормальности распределения данных использовали критерий Шапиро–Уилка(p > 0,05). Для изучения связи между данными использовали коэффициентранговой корреляции Спирмена. Коэффициент корреляции признавалсядостоверным при p < 0,05. Достоверность различия между группамиопределяли с помощью критерия Манна–Уитни.
Различия признавалистатистически достоверными при уровне значимости p < 0,05.41Глава 3. Клиническая характеристика пациентовВ исследовании принимали участие 125 пациентов, из которых 28беременных женщин с угрозой прерывания беременности. Из них у 19пациентов установлен диагноз ПНБ. Средний срок беременности составил19,3±7,6 нед. Угроза прерывания проявлялась тянущими болями внизуживота, скудными кровянистыми выделения из половых путей.
У 2 женщинпроизошла гибель эмбриона на сроке беременности 8-9 недель. У остальныхпациенток беременность завершилась самопроизвольным выкидышем илипреждевременными родами.Группа пациенток с неразвивающейся беременностью (n = 9). Диагнозустанавливалсяпорезультатамобъективногоосмотраиданныхультразвукового исследования. Средний срок беременности составил 6,1±1,5нед. Группу К1 составили 61 пациентка, беременность которых закончиласьсрочными родами. Средний срок беременности составил 15,6 ±8,3 нед.Небеременные здоровые женщины (К2). Средний возраст составил 29,6лет.
Группа женщин после самопроизвольного выкидыша (n = 5). Давностьвыкидыша от 4,5 до 48 часов.Терапия пациентов с угрозой прерывания включала в себя препаратыпрогестеронового ряда («Дюфастон», «Утрожестан») в терапевтическихдозировках, гемостатическую, витаминотерапию, спазмолитическую, а такжепо показаниям антибактериальную терапию препаратами широкого спектрадействия.При установке диагноза неразвивающаяся беременность, пациентампроводилиплановоевыскабливаниеполостиматкинафонеантибактериальной, противовоспалительной терапии.Возраст обследуемых варьировал от 18 до 43 лет (средний возраст29,7± 5,7 года).
Распределение пациентов по возрастным категориям вгруппах сравнения представлено в табл. 1.42Таблица 1Распределение пациентов по возрастным категориямВозрастГруппы обследованных (n=125)(лет)УПБНБ (n=9)К1 (n=61)К2 (n=22)К3 (n=5)(n=28)18-241 (3,6%)1 (11%)16 (26,2%)1 (5%)-25-299 (32%)1 (11%)18 (29,5%)9 (41%)1 (20%)30-348 (28,8%)2 (22%)15 (24,5%)2 (9%)1 (20%)35-399 (32%)3 (34%)10 (16,4%)10 (45%)2 (40%)Старше 40 1 (3,6%)2 (22%)2 (3,4%)-1 (20%)Приобъективномосмотрепациентовотмечалсяженскийтиптелосложения с правильным развитием вторичных половых признаков. Приобщем объективном обследовании беременных острой патологии со сторонысердечно-сосудистой, легочной, пищеварительной и мочевыделительнойсистем не выявлено.По данным литературы, избыточная масса тела значительно осложняеттечение беременности и является фактором риска перинатальной патологии[160].
Избыточная масса тела наблюдалось в 56,8% беременных с угрозойпрерывания, а индекс массы тела в среднем был равен 25,43±5,4 кг/рост2,медиана 26. В группе с неразвивающейся беременностью также отмечалсявысокий процент пациентов с нарушением жирового обмена (56%), ИМТсоставил 23,11±5,22 кг/рост2, медиана 25. Нормальные показатели ИМТимели 39,3 % пациентов с угрозой прерывания и 33% с неразвивающейсябеременностью. Напротив, в группах контроля К1 и К2 нормальный ИМТсоставил 65,6% и 68,3%.
Медиана для группы К1 составила 22, ИМТ в43среднем 23,49±4,49 кг/рост 2 . Для группы К2 медиана -20,5, ИМТ составил всреднем 21,05±3,29 кг/рост 2. Результаты представлены в табл. 2Таблица 2Распределение пациентов, в зависимости от ИМТИМТБеременные Неразвиваю Здоровыесугрозой щаясяпрерывания беременносНеберемен Пациентыбеременны ныепослеесамопроизвольтьноговыкидыша<181 (3.6%)1 (11%)2 (3.3%)3 (13.7 %)018-2511 (39.3%)3 (33%)40 (65.6%)15 (68.3%)1 (20%)25-308 (28.6%)4 (45%)12 (19.7%)4 (18%)1 (20%)30-356 (21.4%)1 (11%)4 (6.6)02 (40%)>352 (7.1%)03 (4.8%)01 (20%)При изучении анамнеза у всех обследованных пациенток быливыявлены различные нарушения менструального цикла (табл.3), причемболеевыраженныевгруппебеременныхсугрозойпрерывания:менструальный цикл более 31-35 дней отмечен в 64,7% пациентов с угрозойпрерывания и в 22,9 % - группы К2; меноррагии (длительность менструациисвыше 7 дней - в 64,3% случаев, обильные менструации - в 22% случаев вгруппе УПБ и в 60% в К3; альгодисменорея (77% случаев в группе снеразвивающейся беременностью и в 15% - в группе К2 ); нерегулярныеменструации (56% случаев в группе УПБ и в 60 % - в группе К3).44Таблица3Характер менструального цикла у обследуемых пациентовДлительностьГруппы обследованных (n=125)менструальногоциклаУПБНБ (n=9)К1 (n=61) К2 (n=22) К3 (n=5)(n=28)21-244 (14,2%)1 (11%)12 (19,8)3 (14%)1 (20%)25-306 (21,5%)2 (22%)35 (57,3)15 (68%)2 (40%)31-3518 (64,3)6 (67%)14 (22,9)4 (18%)2 (40%)До 3-х6 (22%)2 (22%)8 (13%)2 (9%)04-710 (34%)3 (34%)48 (79%)16 (73)3 (60%)>712 (44%)4 (44%)5 (8%)4 (18)2 (40%)скудные12 (44%)7 (78%)6 (10%)1 (5%)1 (20%)умеренные10 (34%)1 (11%)49 (80%)17 (77%)1 (20%)обильные6 (22%)1 (11%)6 (10%)4 (18%)3 (60%)регулярные12 (44%)6 (66%)53 (87%)19 (86%)2 (40%)нерегулярные16 (56%)3 (34%)8 (13%)3 (14%)3 (60%)болезненные11 (39%)7 (77%)9 (15%)6 (27 %)2 (40%)безболезненные17 (61%)2 (23%)52 (85%)16 (73%)3 (60%)Продолжительностьменструации (дни)ХарактерменструацииПри изучении гинекологического анамнеза отмечено преобладаниевоспалительныхзаболеванийоргановмалоготаза:хроническийсальпингоофорит составил 28,5 % в группе с угрозой прерывания и в 4,5% и5% в группах небеременных и здоровых беременных; хронический45эндометрит в 57% случаев был в группе УПБ, по сравнению с 3% в группеК1.
Структура гинекологической заболеваемости представлена на рис.5После выкидыша33%18%КольпитПороки развития матки40% Небеременные9%10%Дисфункция яичников11%0%0%0%6,50%7%22%0%0%7%Хронический эндометрит0%Миома матки0%0%5.Структура40%33%22%28,50%20%4,50%11%7%6,50%10%57%20%14%0%32%40%4,50%5%Аденомиоз41%11%0%3%Хронический сальпингоофоритРис60%27%Эктопия шейки маткиБесплодие I, II23%39% Здоровые беременные40%Неразвивающаяся беременность43%Угроза прерывания20%22%30%40%гинекологической50%60%70%заболеваемостиввидегистограммы.Эти данныев целом указываютна совокупностьразличныхзаболеваний в группах пациентов с угрозой прерывания, а также снеразвивающейся беременностью, что указывает на влияние данныхпатологий на течение и прогноз беременности.При изучении репродуктивной функции обращалось внимание начисло беременностей и их исходы. Исходы беременностей у обследованныхженщин представлены в рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
